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猪II型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达 被引量：16
1
作者 韩凌霞 陈艳 +3 位作者 崔尚金 王云峰 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
猪II型圆环病毒(PCV＿2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中... 猪II型圆环病毒(PCV＿2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道,致病性的PCV＿2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX＿6p＿1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS＿PAGE结果,重组质粒pPRO＿Cap和pPRO＿Rep以及pGEX＿ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%。将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV＿2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX＿ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV＿2感染用候选抗原。 展开更多
关键词 pcv-2 诊断抗原 猪II型圆环病毒 全基因组序列分析 ORFl基因 ORF2基因 基因克隆 基因表达
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猪细环病毒1型间接ELISA抗体检测方法的建立
2
作者 杨敩校 刘芊麟 +5 位作者 陈丙生 蒋小玲 王建舫 董虹 肖兴 周双海 《北京农学院学报》 2024年第1期43-46,共4页
【目的】建立一种检测猪细环病毒1型抗体的血清学方法。【方法】以猪细环病毒1型衣壳蛋白为包被抗原,筛选和优化抗体检测反应条件来建立一种检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,之后进行特异性和重复性试验,并进行初步临床... 【目的】建立一种检测猪细环病毒1型抗体的血清学方法。【方法】以猪细环病毒1型衣壳蛋白为包被抗原,筛选和优化抗体检测反应条件来建立一种检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,之后进行特异性和重复性试验,并进行初步临床应用检测。【结果】确定了检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法的各项最佳反应条件;对8种猪源病毒阳性血清的检测结果显示只有猪细环病毒1型阳性血清为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数均小于5%,批间变异系数均小于10%,显示出良好的重复性。对来源于北京和湖南地区的400份猪血清样品的检测结果显示,猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体阳性率为75.25%,PCR阳性率为71.00%,二者之间没有显著差异(P>0.05),表明这两个地区存在较多的的猪细环病毒1型感染。【结论】建立了一种特异性和重复性都良好的检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA,可用于猪细环病毒1型抗体的临床检测。 展开更多
关键词 猪细环病毒1型 衣壳蛋白 间接ELISA 抗体 检测
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TUNEL法检测类猪圆环病毒2型因子P1诱导猪免疫器官细胞凋亡的研究 被引量：19
3
作者 温立斌 何孔旺 +2 位作者 杨汉春 王玉然 董美响 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第B10期88-91,共4页
研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。猪感染P1后21和35 d的扁桃体、脾脏和腹股沟淋巴结等免疫器官... 研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。猪感染P1后21和35 d的扁桃体、脾脏和腹股沟淋巴结等免疫器官细胞出现了凋亡。P1可能引起猪的免疫抑制。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 P1 凋亡 TUNEL
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猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救 被引量：7
4
作者 刘长明 危艳武 +3 位作者 陆月华 张朝霞 袁婧 黄立平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期161-165,共5页
用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1/G株。通... 用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1/G株。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)在病毒感染细胞中检出病毒抗原,其抗原性仅与PCV1/Cap蛋白单价特异性抗体发生反应,而与抗PCV2/Cap蛋白抗体无交叉。克隆毒株基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,可用PCR结合限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)与亲本病毒相鉴别。该毒株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,病毒滴度达104.8 TCID50/mL。构建的PCV1感染性克隆,为今后开展该病毒的起源与演化、遗传变异规律、分子鉴别诊断等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 感染性克隆 病毒拯救
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类猪圆环病毒因子P1核酸链型和极性的研究 被引量：8
5
作者 温立斌 何孔旺 +8 位作者 倪艳秀 张雪寒 李彬 王小敏 郭容利 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期120-122,共3页
研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为... 研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为单股、负链基因组。 展开更多
关键词 类猪圆环病毒因子P1 核酸链型 极性
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猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析 被引量：5
6
作者 闻晓波 李冬野 +8 位作者 李树东 冉旭华 李晓娟 邵磊 王密 朴范泽 杨焕民 侯喜林 倪宏波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期41-44,共4页
为探讨原核表达的PCV-2ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原... 为探讨原核表达的PCV-2ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原核表达载体pET30a(+)上,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组质粒pET30a-ORF2/ORF1。转化E.coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳与Western blot分析。纯化的重组蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性反应,并能与免疫小鼠的抗血清发生特异性反应。重组蛋白具有较好的免疫学活性,为基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF2 ORF1 表达
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应用高分辨熔点曲线分析区分类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型 被引量：4
7
作者 温立斌 何孔旺 +5 位作者 杨汉春 郭容利 钟书霖 周俊明 李成仁 陈梦海 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期315-319,共5页
为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HR... 为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HRM分析可区分相差1个碱基的靶序列。因此,HRM分析可为P1和PCV2的分子诊断提供一种新的技术手段。 展开更多
关键词 高分辨熔点曲线 类猪圆环病毒因子P1 猪圆环病毒2型 鉴别
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猪圆环病毒2型Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白在杆状病毒中共表达及鉴定 被引量：3
8
作者 王一平 郭龙军 +7 位作者 唐青海 刘丹 危艳武 李胜斌 刘建波 黄立平 吴洪丽 刘长明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期44-47,共4页
为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacm... 为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacmid-Cap-VP1),并转染Sf21昆虫细胞,拯救出能够共表达PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白的重组杆状病毒(rBac-Cap-VP1)。SDS-PAGE和western blot检测结果表明,共表达的重组PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白产物的分子量分别为28 ku和30 ku,各占总蛋白含量的11.6%和3.4%,能够分别与PCV2和FMDV抗体发生特异性反应,表明共表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为PCV2和FMDV基因工程二联亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪O型口蹄疫病毒 CAP蛋白 VP1蛋白 共表达
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猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用 被引量：3
9
作者 徐磊 郭抗抗 +4 位作者 陈恒 曹伟伟 吕其壮 宁蓬勃 张彦明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第6期1-7,共7页
根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copi... 根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 猪圆环病毒2型a基因型 猪圆环病毒2型b基因型 三重PCR
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猪圆环病毒1型贵州分离株全基因组的克隆与序列分析 被引量：2
10
作者 王伟丞 梁海英 +2 位作者 曾智勇 汤德元 刘钊 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第9期161-163,共3页
为了解猪圆环病毒（PCV）在贵州的分子流行病学和遗传变异情况，同时为其深入研究提供参考，应用PCR方法对采自贵阳、都匀和遵义地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征的病料进行 PCV1全基因组的扩增、克隆和测序分析。结果表明：扩增克隆的... 为了解猪圆环病毒（PCV）在贵州的分子流行病学和遗传变异情况，同时为其深入研究提供参考，应用PCR方法对采自贵阳、都匀和遵义地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征的病料进行 PCV1全基因组的扩增、克隆和测序分析。结果表明：扩增克隆的4株PCV1基因组全长均为1759 bp，4株PCV1间的核苷酸序列相似性在99．1％-99．7％，与国内外其他PCV1参考毒株的核苷酸序列相似性均在98．1％以上，与参考毒株PCV2的核苷酸序列相似性在77％左右；4株PCV1与国内其他PCV1毒株位于同一进化分支， PCV1国外毒株则位于另一进化分支。4株PCV1和参考毒株 PCV2的 ORF1、ORF2推导氨基酸序列相似性分别为86．2％-87．8％和64．0％-68．2％，4株PCV1与PCV2的ORF1在复制起始区和其他功能区高度保守，可为构建嵌合病毒PCV1-2提供骨架。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 基因组 克隆 序列分析 PCV1
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人参皂苷Rb1对猪圆环病毒2型疫苗免疫的增强效果 被引量：5
11
作者 汪伟 何孔旺 +2 位作者 温立斌 肖琦 倪艳秀 《江苏农业科学》 2018年第21期180-182,共3页
人参皂苷Rb1是人参的主要有效成分之一。通过将人参皂苷Rb1与氢氧化铝胶作为佐剂和猪圆环病毒2型抗原混合免疫Babc/c小鼠,检测免疫后PCV2抗体转阳时间、抗体滴度及攻毒后血清病毒载量变化。结果表明,Rb1和抗原混合物免疫动物后,高剂量Rb... 人参皂苷Rb1是人参的主要有效成分之一。通过将人参皂苷Rb1与氢氧化铝胶作为佐剂和猪圆环病毒2型抗原混合免疫Babc/c小鼠,检测免疫后PCV2抗体转阳时间、抗体滴度及攻毒后血清病毒载量变化。结果表明,Rb1和抗原混合物免疫动物后,高剂量Rb1(100μg)能够明显缩短抗体转阳时间,显著提高抗体滴度,降低血清病毒载量及血清病毒阳性率。因此,人参皂苷Rb1具有较好的免疫增强效果,是一种较好的免疫佐剂。 展开更多
关键词 人参皂苷RB1 佐剂 猪圆环病毒2型 疫苗免疫 滴度
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猪圆环病毒1型和2型Rep蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：2
12
作者 李益飞 申会刚 +3 位作者 商绍彬 陈庆新 郭军庆 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期350-354,共5页
分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。S... 分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达。进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液。这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性。本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型和2型 REP蛋白 表达 纯化
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猪圆环病毒1型和2型衣壳蛋白的表达与鉴定 被引量：2
13
作者 成大荣 朱善元 +2 位作者 陈长春 金山 徐建生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期760-764,共5页
根据已经发表的猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白基因(Cap)分别设计一对引物,利用PCR方法从已知的PCV1和PCV2中各扩增到一条DNA片段。将PCR产物按预定的阅读框架插入表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST... 根据已经发表的猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白基因(Cap)分别设计一对引物,利用PCR方法从已知的PCV1和PCV2中各扩增到一条DNA片段。将PCR产物按预定的阅读框架插入表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pCAP-PCV1和pCAP-PCV2,并分别转化大肠杆菌BL21。序列测定表明,所克隆的序列大小均为579bp,其中PCV1的cap基因与GenBank中的U49186序列一致,PCV2的cap基因与DQ104422序列一致。通过对菌体裂解物的SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,证明携带重组质粒pCAP-PCV1或pCAP-PCV2的大肠杆菌均可以表达融合蛋白形式的衣壳蛋白(分别命名为GST-CAP1和GST-CAP2,分子量约为49ku)。通过免疫小鼠制备了GST-CAP1和GST-CAP2多价血清,并通过dot-ELISA进一步证明了PCV1与PCV2的抗原交叉性。猪圆环病毒衣壳蛋白的表达,将为临床检测PCV抗体提供诊断抗原以及为研制PCV单克隆抗体提供材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 PCV1 PCV2 衣壳蛋白 表达
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5株湖南猪圆环病毒1型全基因组测序与遗传进化分析 被引量：4
14
作者 何世成 王紫微 +5 位作者 王成 胡巧云 唐小明 王卫国 谢怡灵 王昌建 《中国动物检疫》 CAS 2021年第12期26-32,共7页
为了解湖南猪群猪圆环病毒1型(PCV1)的遗传变异情况,以PCV1阳性DNA为模板,使用PCR方法分两段扩增PCV1全基因序列并进行拼接。结果共获得5个PCV1全基因组,其中3株全基因大小为1759 bp,另外2株分别为1758 bp和1760 bp。5株全基因组同源性... 为了解湖南猪群猪圆环病毒1型(PCV1)的遗传变异情况,以PCV1阳性DNA为模板,使用PCR方法分两段扩增PCV1全基因序列并进行拼接。结果共获得5个PCV1全基因组,其中3株全基因大小为1759 bp,另外2株分别为1758 bp和1760 bp。5株全基因组同源性为98.4%~99.7%,与国内外的PCV1全基因组同源性为98.1%~99.7%;ORF2序列同源性为97.6%~99.6%,与国内外的PCV1 ORF2同源性为96.1%~99.9%。系统发育树显示,5株PCV1均属于同一分支,并显示出一定的地理差异,但差异较小。结果表明,湖南省流行的PCV1毒株基因较为稳定,分离株间差异较小。本研究为湖南省猪圆环病毒病防控及相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 全基因扩增 遗传进化分析 湖南省
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猪圆环病毒1型与2型双重PCR检测方法的建立及应用 被引量：7
15
作者 王立娇 胡胜云 +3 位作者 张雪 陈天慧 于红欣 周双海 《北京农学院学报》 2019年第1期61-65,共5页
【目的】建立一种可同时检测猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的双重PCR检测方法并进行临床应用。【方法】对PCV1和PCV2的单项PCR方法分别进行条件优化后对两种病毒的双重PCR进行条件优化并进行特异性与敏感性试验,然后用单项PCR方法和双... 【目的】建立一种可同时检测猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的双重PCR检测方法并进行临床应用。【方法】对PCV1和PCV2的单项PCR方法分别进行条件优化后对两种病毒的双重PCR进行条件优化并进行特异性与敏感性试验,然后用单项PCR方法和双重PCR对临床样品进行比较检测。【结果】双重PCR检测方法对PCV1和PCV2的检测灵敏度分别为1.7×10~3、4×10~3 copies/μL,该方法对当前常见猪源DNA病毒的检测结果都是阴性。该方法对2013—2017年15个猪场的145份断奶仔猪样品的检测结果显示,PCV1和PCV2的个体阳性率分别为11.7%和77.2%,与单项PCR方法检测结果无显著(P>0.05)差异,且两种方法检出的PCV1或PCV2的阳性猪场完全一致;临床样品中PCV2的猪场阳性率与个体阳性率都极显著(P<0.01)高于PCV1。【结论】建立了一种有较高敏感性与特异性的PCV1和PCV2的双重PCR检测方法,当前猪场中PCV2感染较PCV1感染明显占优势。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 猪圆环病毒2型 双重PCR
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猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析 被引量：1
16
作者 陈美玲 陈焕春 +1 位作者 宋云峰 黄红亮 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期109-112,共4页
参照Genbank上公开发表的PCV1 全基因序列设计引物,以质粒pSK PCV为模板扩增出PCV1 ORF2基因,插入pMD18 T载体,对筛选出的阳性质粒进行测序,将测序结果同Genbank上发表的PCV1 基因序列相比较,同源性达97%,再与Genbank 上发表的PCV2 的OR... 参照Genbank上公开发表的PCV1 全基因序列设计引物,以质粒pSK PCV为模板扩增出PCV1 ORF2基因,插入pMD18 T载体,对筛选出的阳性质粒进行测序,将测序结果同Genbank上发表的PCV1 基因序列相比较,同源性达97%,再与Genbank 上发表的PCV2 的ORF2 基因序列相比较发现PCV1 ORF2 和PCV2 ORF2的差异表现在两者在核苷酸序列的2个部位互相存在基因缺失现象。将推导出的PCV1 ORF2 的氨基酸序列同PCV2 ORF2进行比较,发现二者在几个功能区相当保守,尤其是N 末端的核定位序列、N 糖基化位点以及酪氨酸磷酸化位点。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 ORF2基因 克隆 序列分析
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猪圆环病毒1型北京株全基因组克隆及序列分析 被引量：3
17
作者 邵小雪 郭星 +2 位作者 周双海 冉多良 汤世坤 《北京农学院学报》 2009年第4期35-38,共4页
参照GenBank上猪圆环病毒1型（PCV1）全基因组序列设计1对引物，用PCR技术从北京一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列，并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示，该株PCV1基因组全长为1759bp，与国内... 参照GenBank上猪圆环病毒1型（PCV1）全基因组序列设计1对引物，用PCR技术从北京一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列，并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示，该株PCV1基因组全长为1759bp，与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性为99．4％。主要开放阅读框（ORF）序列结果显示，该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别在97．5％～99．8％和92．7％～100％。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高，但仍然呈现出一定的地域相关性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 北京株 全基因组 克隆 序列分析
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猪圆环病毒2型对外周血单核细胞中PD-1,PD-L1和IL-21转录水平的影响
18
作者 朱艳平 何勇 +7 位作者 刘佳 朗梦圆 岳锋 郭东光 李鹏 孙丽莎 马广飞 王选年 《动物医学进展》 北大核心 2021年第8期14-20,共7页
用猪圆环病毒2型(PCV2)体外感染外周血单核细胞,建立荧光定量PCR方法检测PCV2的病毒载量;同时,在PCV2感染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72h收集细胞,抽提RNA进行反转录,检测PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平变化,分析评价PCV2感染对PD-... 用猪圆环病毒2型(PCV2)体外感染外周血单核细胞,建立荧光定量PCR方法检测PCV2的病毒载量;同时,在PCV2感染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72h收集细胞,抽提RNA进行反转录,检测PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平变化,分析评价PCV2感染对PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平变化的影响。结果显示,PD-1在感染外周血单核细胞后72 h显著升高,达到峰值;PD-L1在感染后转录水平都显著升高,48 h达到峰值;IL-21在感染后48 h转录水平最低。结果表明,PCV2不仅能够在体外感染外周血单核细胞,而且随着病毒载量的增加,导致PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平显著升高。以上结果表明,PCV2感染导致PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平升高,通过激活PD-1/PD-L1通路,从而抑制IL-21的转录水平;相反,IL-21刺激PD-1、PD-L1的转录水平升高。研究结果为探索PCV2的致病机制和控制PCV2的感染提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪外周血单核细胞 PD-1 PD-L1 白细胞介素21 转录水平
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猪圆环病毒1型阴性的PK-15细胞株的筛选
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作者 张春红 蒋智勇 +1 位作者 孙丽华 宋长绪 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第5期32-33,共2页
关键词 猪圆环病毒1型 PK-15细胞 细胞株 猪伪狂犬病病毒 筛选 阴性 ATCC 传代细胞系
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1例猪圆环病毒1型和巴氏杆菌混合感染的诊治 被引量：1
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作者 侯庆同 《养殖与饲料》 2023年第3期71-73,共3页
江苏淮安某猪场出现疫情,通过临床检查、PCR病毒鉴定及实验室细菌检测,确诊为猪圆环病毒1型和多杀性巴氏杆菌混合感染。借助药敏试验,筛选出青霉素、氯霉素、氟苯尼考等敏感药物,经过采取有针对性的综合防治措施,有效控制了疫情。
关键词 猪 圆环病毒1型(pcv-1) 多杀性巴氏杆菌 PCR 药敏试验
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