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固相时间分辨荧光免疫标记技术研究 被引量:10
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作者 潘利华 周誓红 +2 位作者 孙文伟 谢文兵 赵超 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1601-1604,共4页
通过固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4 ,7 二氯磺基苯 1,10菲罗啉 2 ,9 二羧酸标记抗 乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)IgG实验 ,对于BCPDA标记蛋白质的方法进行了研究。结果表明 :BCPDA在相对温和条件下能与蛋白质反应 ,反应后蛋白... 通过固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4 ,7 二氯磺基苯 1,10菲罗啉 2 ,9 二羧酸标记抗 乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)IgG实验 ,对于BCPDA标记蛋白质的方法进行了研究。结果表明 :BCPDA在相对温和条件下能与蛋白质反应 ,反应后蛋白质的相对生物活性高于 78% ,标记比为 2 3~ 5 5 ,蛋白回收率达6 0 %以上。在一定条件下与铕离子形成稳定的BCPDA Eu3 + (HBsAb)IgG标记物。利用自建的分析方法 ,测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。 展开更多
关键词 固相时间分辨荧光免疫标记技术 标记 抗-乙型肝炎表面抗体 4 7.二氯磺基苯-1 10菲罗啉-2 9-二羧酸
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多功能灵敏固相时间分辨荧光免疫分析仪设计 被引量:9
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作者 宋克非 张佩杰 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2609-2615,共7页
针对固相时间分辨荧光光谱的测量,设计出一种全新的固相时间分辨荧光免疫分析系统。使用氮分子激光器作为激发光源,采用积分球和单色仪相结合的荧光收集结构,使杂散光对样品荧光的影响降到最低;用光电倍增管进行光电转换,在500~700 nm... 针对固相时间分辨荧光光谱的测量,设计出一种全新的固相时间分辨荧光免疫分析系统。使用氮分子激光器作为激发光源,采用积分球和单色仪相结合的荧光收集结构,使杂散光对样品荧光的影响降到最低;用光电倍增管进行光电转换,在500~700 nm范围实现了高分辨荧光光谱测量;利用数字方式实现取样积分功能,提高了系统的信噪比。系统可实现荧光寿命、时间分辨荧光光谱、物质浓度的自动测量,仪器的检测灵敏度可达10-12 mol/L,线性范围为10-12~10-9 mol/L,稳定性相对误差小于3%,荧光光谱分辨为0.5 nm。 展开更多
关键词 时间分辨 荧光免疫分析系统 光栅单色仪 积分球
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时间分辨荧光免疫分析技术在真菌毒素检测的应用 被引量:11
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作者 王坤 侯玉泽 +4 位作者 胡骁飞 王耀 李文君 裴亚峰 邓瑞广 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期197-201,共5页
近些年,生物标记技术不断的发展。免疫分析技术得到了快速的发展。例如放射免疫分析技术,由于放射分析技术存在污染性和局限性,限制其进一步发展与应用,继由放射免疫分析技术之后,又研究形成了各种非放射免疫技术,包括酶标记分析... 近些年,生物标记技术不断的发展。免疫分析技术得到了快速的发展。例如放射免疫分析技术,由于放射分析技术存在污染性和局限性,限制其进一步发展与应用,继由放射免疫分析技术之后,又研究形成了各种非放射免疫技术,包括酶标记分析技术、荧光免疫分析技术、化学发光免疫分析技术、时间分辨荧光免疫分析(Time.resolvednuoreimmuoassay,TRFIA)技术等。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析技术 真菌毒素 应用 放射免疫分析技术 化学发光免疫分析技术 检测 放射免疫技术 标记技术
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纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立 被引量:11
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作者 周彬 高雷 +3 位作者 金坚 陈蕴 黄飚 赵卫国 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期338-342,共5页
目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测... 目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007~100ng/mL,批内批间变异系数均<5%。不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%~110%、67%~100%、74%~100%。结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 脱氧雪腐镰刀烯醇 生物毒素 纳米均时间分辨荧光免疫法(AlphaLISA)
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稀土荧光螯合物时间分辨荧光光谱分析方法研究 被引量:3
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作者 李云辉 狄燕清 +6 位作者 杨秀云 潘利华 李俊玲 王云磊 李海燕 常宇 刘文宇 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第9期2475-2478,共4页
以提高固相时间分辨荧光免疫分析灵敏度为目的,在自行研制固相时间分辨荧光免疫分析样机和合成新荧光化合物的基础上,首先对新合成的4,4′-二溴-6,6′-二(N,N-二(乙氧基羰基)氨甲基)-2,2′-联吡啶-Eu(Ⅲ)螯合物的荧光性质及时间分辨荧... 以提高固相时间分辨荧光免疫分析灵敏度为目的,在自行研制固相时间分辨荧光免疫分析样机和合成新荧光化合物的基础上,首先对新合成的4,4′-二溴-6,6′-二(N,N-二(乙氧基羰基)氨甲基)-2,2′-联吡啶-Eu(Ⅲ)螯合物的荧光性质及时间分辨荧光光谱分析方法进行了研究;其次对Eu-TTA-phen和Eu-β-NTA-TOPO等化合物进行时间分辨荧光光谱分析检测。 展开更多
关键词 时间分辨荧光光谱分析 铕螯合剂
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稀土穴状荧光配合物的合成与光谱性质 被引量:3
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作者 常宇 谢文兵 +3 位作者 周誓红 李俊玲 刘宝峰 潘利华 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期361-366,共6页
以2,6-二甲基吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为起始原料,经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)溴代、亲电取代反应合成了时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂2,6-{N,N′,N,N′-[二(2,2′-联吡啶-6,6′-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-3,5-二羧酸二乙酯。经差热分析... 以2,6-二甲基吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为起始原料,经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)溴代、亲电取代反应合成了时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂2,6-{N,N′,N,N′-[二(2,2′-联吡啶-6,6′-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-3,5-二羧酸二乙酯。经差热分析仪(DTA)、傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、核磁共振波谱仪(1 H NMR)、质谱仪(MS)等技术手段表征确认了化合物结构和性能。对该化合物与铕离子形成螯合物的荧光性质研究表明:激发光谱波长范围较宽,激发峰值为322nm;荧光发射峰为597nm(~5D_0-~7F_1)、618nm(~5D_0-~7F_2);荧光寿命为918μs;量子产率Φ=0.249。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 螯合剂 合成 穴状联吡啶衍生物
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4,4'-二溴-6,6'-二(N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基)-2,2'-联吡啶的合成与表征 被引量:4
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作者 李云辉 李海燕 +4 位作者 潘利华 徐经伟 常宇 狄燕清 刘文宇 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1008-1011,共4页
以4,4'-二硝基-6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶-N,N'-二氧化物为起始原料,经过三氟乙酸酐酯化、羟甲基化、氢溴酸溴甲基化及亚氨基二乙酸二乙酯氢胺基甲基化合成了4,4'-二溴-6,6'-二(N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基)-2,2... 以4,4'-二硝基-6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶-N,N'-二氧化物为起始原料,经过三氟乙酸酐酯化、羟甲基化、氢溴酸溴甲基化及亚氨基二乙酸二乙酯氢胺基甲基化合成了4,4'-二溴-6,6'-二(N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基)-2,2'-联吡啶。通过熔点、红外光谱、核磁共振、高效液相色谱、高分辨质谱测试技术表征了该化合物的结构,为合成时间分辨荧光免疫分析新型双功能螯合剂提供了重要中间体。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 螯合剂 中间体 二溴二溴甲基联吡啶 二溴二(N N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基)联吡啶 合成
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4,4′-二硝基-6,6′-二甲基-2,2′-联吡啶-N,N′-氧化物的合成 被引量:4
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作者 曲晓春 潘利华 +3 位作者 谢文兵 孔令艳 丁凤艳 付强 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期72-76,共5页
从时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂合成出发,设计了固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体4,4′-二硝基-6,6′-二甲基-2,2′-联吡啶-N,N′-氧化物的合成路线.以2-氨基-6-甲基吡啶为原料,经过重氮化溴化、乌尔曼偶联、氧化、硝化四步... 从时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂合成出发,设计了固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体4,4′-二硝基-6,6′-二甲基-2,2′-联吡啶-N,N′-氧化物的合成路线.以2-氨基-6-甲基吡啶为原料,经过重氮化溴化、乌尔曼偶联、氧化、硝化四步合成了该化合物,通过熔点、红外光谱、元素分析1、H NMR对其进行了表征.证明了该结构的正确性和合成方法的可靠性. 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 6 6'-二甲基-2 2'-联吡啶-N N'-氧化物 4 4'-二硝基-6 6'-二甲基-2 2'-联吡啶-N N'-氧化物
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铕螯合物的制备及光谱性质研究 被引量:2
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作者 孙延文 常宇 +4 位作者 金玉芬 谢文兵 常静 于庭 潘利华 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第7期2189-2193,共5页
稀土螯合物的制备是均相时间分辨荧光免疫分析中的关键部分,为了合成理想的稀土螯合物,以2,6-二(溴甲基)吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为原料,首先优化合成了Li^+2,6-{N,N’,N,N’-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸乙... 稀土螯合物的制备是均相时间分辨荧光免疫分析中的关键部分,为了合成理想的稀土螯合物,以2,6-二(溴甲基)吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为原料,首先优化合成了Li^+2,6-{N,N’,N,N’-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸乙酯,使其产率明显提高。进一步选择乙腈和甲醇两种反应体系合成铕螯合物,并比较了不同反应体系下合成的铕螯合物的光谱性质。研究表明,乙腈和甲醇两种反应体系所得铕螯合物的激发光谱(最大激发波长为310nm)、发射光谱(最大发射波长为616nm)、量子产率基本相同,荧光强度在10^(-8)~10^(-5) mol·L^(-1)范围内与Eu^(3+)浓度均成线性,相关系数分别为0.993 73和0.986 65,两种铕螯合物(c=2.5×10^(-5) mol·L^(-1))的荧光强度略有差异,荧光寿命分别为825和830μs。因此,两种反应体系所得铕螯合物具有斯托克斯位移大、荧光强度强以及荧光寿命长等优点,并且此种穴状螯合剂结构中的吡啶-2,2-联吡啶可保护铕离子免受其他物质的干扰,是理想的稀土螯合物,可用于蛋白质、核酸等生物分子的标记。本研究不仅拓展了合成新型稀土螯合物的方法,而且为进一步建立均相时间分辨荧光免疫分析奠定了基础。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 稀土穴状螯合物 合成 光谱性质
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4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶的合成与表征 被引量:3
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作者 曹熙杰 谢文兵 +4 位作者 潘利华 常宇 崔善子 张洪杰 党丹丹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1462-1465,共4页
以4,4'-二硝基-2,2'-联吡啶-6,6'-二亚甲基双三氟乙酸酯作为起始原料,经水解、溴化、酯化和对氨基苯乙炔取代4步反应合成了4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶.通过红... 以4,4'-二硝基-2,2'-联吡啶-6,6'-二亚甲基双三氟乙酸酯作为起始原料,经水解、溴化、酯化和对氨基苯乙炔取代4步反应合成了4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二[N,N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2,2'-联吡啶.通过红外光谱、核磁共振波谱、高分辨质谱等表征了该化合物的结构.该化合物经水解后与铕离子形成稀土荧光螯合物,在紫外光激发下,发射出具有铕离子特征的荧光光谱. 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 螯合剂 中间体 4 4'-二(对氨基苯乙炔基)-6 6'-二[N N-二(乙氧基羰甲基)氨甲基]-2 2'-联吡啶
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6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶-4,4'-二甲酸甲酯的合成与表征 被引量:2
11
作者 柴永真 常宇 +3 位作者 宋蕊琴 刘巍 李云辉 潘利华 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期146-150,共5页
以6-甲基-2-羟基吡啶-4-甲酸甲酯为起始原料,经酯化反应制备2-甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)吡啶-4-甲酸甲酯,使其在过渡金属镍络合物催化作用下自身偶联合成6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶-4,4'-二甲酸甲酯,通过改变投料比例、反应温... 以6-甲基-2-羟基吡啶-4-甲酸甲酯为起始原料,经酯化反应制备2-甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)吡啶-4-甲酸甲酯,使其在过渡金属镍络合物催化作用下自身偶联合成6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶-4,4'-二甲酸甲酯,通过改变投料比例、反应温度及投料顺序获得最佳反应条件,收率77%。经核磁共振、红外光谱、质谱及差示扫描热量法等对分子结构进行了表征,验证了合成方法的可靠性。该结构能够满足均相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体的需求。目前,它已成功用于均相时间分辨荧光免疫分析。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 自身偶联 二甲基-联吡啶-二甲酸甲酯
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环索奈德通过靶向HIV-1衣壳蛋白六聚体调节其体外装配
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作者 张莉 张大为 包小峰 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期19-24,共6页
多肽CAI在HIV-1衣壳蛋白(CA)C末端的结合口袋可用来筛选CA蛋白装配调节剂。采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)筛选399个化合物,发现1个小分子化合物环索奈德(ciclesonide)能够竞争性抑制十二肽CAI与CA蛋白C末端的结合,其半数抑制浓度IC_(... 多肽CAI在HIV-1衣壳蛋白(CA)C末端的结合口袋可用来筛选CA蛋白装配调节剂。采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)筛选399个化合物,发现1个小分子化合物环索奈德(ciclesonide)能够竞争性抑制十二肽CAI与CA蛋白C末端的结合,其半数抑制浓度IC_(50)值为6.06μmol/L。生物膜干涉技术(BLI)测量环索奈德与CA蛋白(单体和六聚体)的结合,环索奈德与CA六聚体的亲和力为159 nmol/L,远远大于其与CA单体的亲和力(K_(D)=1.68 mmol/L)。衣壳蛋白体外装配实验表明,环索奈德能促进CA蛋白的装配,且具有浓度依赖性。分子模拟分析环索奈德与CA蛋白的结合模式,显示环索奈德与CA六聚体的相互作用发生在六聚体相邻亚基N末端-C末端的界面上,并与H67和L211两个残基形成氢键。研究表明,环索奈德是一种潜在的HIV-1衣壳装配调节剂。 展开更多
关键词 环索奈德 衣壳装配 C端结构域 人类免疫缺陷病毒1型 时间分辨荧光技术
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