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蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化
被引量：
5
1
作者
李民
杨青
+3 位作者
包永明
雷旭宇
许建强
安利佳
《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》
CSCD
北大核心
2003年第2期22-25,共4页
将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞...
将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.
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关键词
类凝血酶
固定化金属亲和层折
融合表达
大肠杆菌
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职称材料
题名
蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化
被引量：
5
1
作者
李民
杨青
包永明
雷旭宇
许建强
安利佳
机构
大连理工大学生物工程系
出处
《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》
CSCD
北大核心
2003年第2期22-25,共4页
基金
辽宁省科技基金项目(No.99305001)资助课题.
文摘
将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.
关键词
类凝血酶
固定化金属亲和层折
融合表达
大肠杆菌
Keywords
thrombin-like enzyme
immobilized metal affinity chromatography
fusion expression
E. coli
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化
李民
杨青
包永明
雷旭宇
许建强
安利佳
《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》
CSCD
北大核心
2003
5
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