采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响 被引量：5

1

作者 张姣 周廉淇 +2 位作者 田芳 张养军 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期102-110,共9页

研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响。实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右。但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当。而在一定程... 研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响。实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右。但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当。而在一定程度上加大磁性颗粒的粒径后,团聚现象得到明显改善。选择磁性载体粒径为20nm的固定化酶反应器,对其性能进一步考察。结果显示胰蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)的质量比为1∶1时,即能于1 min内实现快速酶解;当酶解10 min时,其零漏切位点肽段数和蛋白质序列覆盖率基本达到稳定,并明显优于溶液酶解水平。通过对漏切位点的统计分析比较,发现固定化酶解与溶液酶解时的漏切位点规律基本类似。因此,采用不同粒径磁性载体制备的固定化酶反应器均可在蛋白质组学研究中提供快速、高效的酶解。 展开更多

关键词 磁性颗粒 固定化酶反应器 蛋白质组学 蛋白质酶解

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蛋白质组学中的固定化酶反应器制备的研究进展 被引量：3

2

作者 张凌怡 王兵兵 +3 位作者 上官露露 张润生 陈建虎 张维冰 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1121-1125,共5页

固定化酶反应器作为蛋白质组学研究中"bottom-up"策略重要的组件,具有酶解快速、酶解效率高、酶稳定性和活性高、简单易操作、能够与多种检测方式联用等优点,对于发展高效快速的蛋白质组学分析方法具有重要意义。本文就固定... 固定化酶反应器作为蛋白质组学研究中"bottom-up"策略重要的组件,具有酶解快速、酶解效率高、酶稳定性和活性高、简单易操作、能够与多种检测方式联用等优点,对于发展高效快速的蛋白质组学分析方法具有重要意义。本文就固定化酶反应器的制备方法及其在蛋白质组学中的应用做简单的概述,着重介绍酶的固定方法、固定化酶的载体、用于固定的酶的种类。近几年固定化酶反应器的研究集中于提高固酶量、保持酶活性、增加酶解效率、减小非特异性吸附等方面。研究结果表明,采用纳米材料、整体材料等新型载体,提高载体亲水性,采用多酶同时酶解等方法能够有效改善固定化酶反应器的性能,提高蛋白质的鉴定效率。 展开更多

关键词 固定化酶反应器 酶 载体材料 蛋白质组学 制备

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建立脑双位点微透析结合高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学方法同步监测大鼠腹内侧前额叶皮质和海马中乙酰胆碱和胆碱含量 被引量：3

3

作者 张美玉 蔡铁全 +3 位作者 孙丹丹 刘洋 崔悦 王丹巧 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期97-106,共10页

目的建立同步动态监测清醒自由活动状态下大鼠腹内侧前额叶皮质（mPFC）和海马细胞外液中乙酰胆碱（ACh）和胆碱（Ch）方法,用于药物干预下不同脑区胆碱类神经递质变化研究。方法建立mPFC和海马双位点双通道同步微透析采样技术和高效液... 目的建立同步动态监测清醒自由活动状态下大鼠腹内侧前额叶皮质（mPFC）和海马细胞外液中乙酰胆碱（ACh）和胆碱（Ch）方法,用于药物干预下不同脑区胆碱类神经递质变化研究。方法建立mPFC和海马双位点双通道同步微透析采样技术和高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学（HPLCIMER-ECD）方法。通过对清醒自由活动大鼠mPFC和海马同步灌流透析取样,HPLC-IMER-ECD分析药物作用下大鼠mPFC和海马细胞外液中ACh和Ch的动态变化,验证该技术方法的可行性和适用性。结果大鼠mPFC和海马双套管植入术及透析采样后状态表现良好,表明脑双位点双通道同步微透析采样技术可行。HPLC-IMER-ECD法测定ACh和Ch,两者浓度在0.02-2.00μmo·lL-1范围内线性关系良好,ACh最低检测限为10 nmo·lL-1,Ch最低检测限为5 nmol·L-1（信噪比为3∶1）。ACh 0.1,0.4和2.0μmol·L-1日内精密度相对标准偏差为0.87%-1.83%,日间精密度为5.38%-6.80%;Ch日内精密度相对标准偏差为1.60%-2.91%,日间精密度相对标准偏差为5.56%-7.38%;ACh相对回收率为96.0%-113.0%,Ch为102.3%-109.2%。叠氮钠能明显降低mPFC和海马细胞外液中ACh（P〈0.05）,但能显著升高两脑区内Ch含量（P〈0.05）。人参皂苷Rg1可逆转叠氮钠导致的海马区ACh降低（P〈0.05）及mPFC和海马区Ch含量的升高（P〈0.05）。mPFC细胞外液中ACh和Ch较高,受到叠氮钠影响较海马区更敏感。结论脑双位点微透析结合HPLC-IMER-ECD方法能同步监测大鼠mPFC和海马中ACh和Ch含量变化。人参皂苷Rg1可通过调节脑内ACh和Ch动态平衡,增强中枢胆碱能系统的功能。 展开更多

关键词 脑双位点微透析 高效液相色谱法 固定化酶反应器 电化学 乙酰胆碱 胆碱

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固定化酶反应器制备新型烟草保润剂的研究 被引量：14

4

作者 黄强 李楠 蒋元力 《郑州工业大学学报》 1999年第4期50-52,共3页

通过对苹果及其皮渣进行预处理、水解、脱酯转化、脱色、浓缩、干燥等系列处理工艺，获得高纯度果胶．采用先进的固定化酶反应技术，利用α－ 淀粉酶的催化作用，对所得果胶进行低酯化处理；对水解产品与底物进行超滤分离，最终获得高... 通过对苹果及其皮渣进行预处理、水解、脱酯转化、脱色、浓缩、干燥等系列处理工艺，获得高纯度果胶．采用先进的固定化酶反应技术，利用α－ 淀粉酶的催化作用，对所得果胶进行低酯化处理；对水解产品与底物进行超滤分离，最终获得高纯度、低酯化度的Ｄ－ 吡喃半乳糖醛酸． 展开更多

关键词 固定化酶反应器 保润剂 D-吡喃半乳醛酸 烟草

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原子转移自由基聚合修饰银丝固定化酶反应器的制备及在蛋白质组鉴定中的应用

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作者 周廉淇 张姣 +2 位作者 田芳 张养军 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期355-361,共7页

针对传统溶液酶解存在的酶解时间较长、酶自切物干扰以及蛋白酶不能重复使用等缺陷,通过电子转移生成催化剂的原子转移自由基聚合法修饰银丝,并以其为载体制备了一种新型的固定化酶反应器。用质谱考察了银丝固定化酶反应器(SW-Trypsin)... 针对传统溶液酶解存在的酶解时间较长、酶自切物干扰以及蛋白酶不能重复使用等缺陷,通过电子转移生成催化剂的原子转移自由基聚合法修饰银丝,并以其为载体制备了一种新型的固定化酶反应器。用质谱考察了银丝固定化酶反应器(SW-Trypsin)的酶解效率、重复性和回收率。结果表明:绒毛状聚合物修饰的SW-Trypsin的酶解效率较高,酶解标准蛋白牛血清白蛋白(BSA)20 min后,肽段的氨基酸序列覆盖率可达93%,高于传统溶液酶解方法酶解16 h所得79%的覆盖率。使用该固定化酶反应器于一个月内8次酶解BSA所得的氨基酸序列覆盖率在89%到97%之间,平均覆盖率为94%,显示出良好的稳定性。另外,该固定化酶反应器酶解马心肌红蛋白(MYO)的回收率为87.67%。最后,用SW-Trypsin酶解腾冲嗜热菌全蛋白20 min,所鉴定到的氨基酸序列覆盖率和蛋白数量与同样条件下溶液酶解16 h的结果接近,且零漏切位点肽段的比例更高。加之容易分离的优点,SW-Trypsin在蛋白质组学的应用中具有良好的前景。 展开更多

关键词 原子转移自由基聚合反应 蛋白质组学 质谱 固定化酶反应器 银丝

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基于中心辐射树枝状介孔二氧化硅构筑CPO固定化酶反应器及应用 被引量：3

6

作者 宋艺超 胡满成 +2 位作者 李淑妮 翟全国 蒋育澄 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1805-1812,共8页

首先制备粒径均匀的具有开放的三维中心辐射树枝状结构的介孔二氧化硅(DSP)粒子,再通过静电相互作用在孔道内负载氯过氧化物酶(CPO)构筑了CPO@DSP固定化酶反应器.通过改变硅源正硅酸乙酯(TEOS)和模板剂十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)的浓... 首先制备粒径均匀的具有开放的三维中心辐射树枝状结构的介孔二氧化硅(DSP)粒子,再通过静电相互作用在孔道内负载氯过氧化物酶(CPO)构筑了CPO@DSP固定化酶反应器.通过改变硅源正硅酸乙酯(TEOS)和模板剂十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)的浓度调控孔径大小,研究了孔径对固定化酶反应器催化活性的影响;同时基于酶促反应动力学分析探讨了孔道内酶催化反应的限域效应,并进一步在CPO@DSP表面包覆海藻酸钠(SA)水凝胶薄膜以抑制酶反应器在使用过程中酶分子的泄露,所得SA-CPO@DSP固定化酶反应器的重复使用性显著提高,循环使用10次后,仍能保持90%以上的催化活性.将SA-CPO@DSP酶反应器用于环境水体中残留抗生素左氧氟沙星的降解,对100μg/mL的底物在25 min内降解率可达88%以上;将该反应器用于苯酚的视觉比色检测,裸眼可检测到5μmol/L的苯酚,表明SA-CPO@DSP酶反应器在环境保护方面具有良好的应用前景. 展开更多

关键词 固定化酶反应器 介孔二氧化硅 氯过氧化物酶 环境应用

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基于多级孔金属有机骨架构筑HRP固定化酶反应器及其染料降解应用 被引量：7

7

作者 高霞 潘会宾 +3 位作者 乔成芳 陈凤英 周元 杨文华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1591-1599,共9页

以不稳定的Cu-金属有机骨架(Cu-MOF)为模板剂,利用自组装模板法制备多级孔Zr-MOF,再通过物理吸附法在多级孔Zr-MOF的介孔孔道中负载辣根过氧化物酶(HRP)构筑了HRP@Zr-MOF固定化酶反应器.通过改变孔径调节剂苯甲酸(HBC)的浓度调控孔径大... 以不稳定的Cu-金属有机骨架(Cu-MOF)为模板剂,利用自组装模板法制备多级孔Zr-MOF,再通过物理吸附法在多级孔Zr-MOF的介孔孔道中负载辣根过氧化物酶(HRP)构筑了HRP@Zr-MOF固定化酶反应器.通过改变孔径调节剂苯甲酸(HBC)的浓度调控孔径大小,研究了孔径对固定化酶反应器催化活性的影响;考察了固定化体系缓冲溶液pH值、固定化时间及温度对固定效果的影响.以HRP催化降解结晶紫染料为模型反应,探讨了HRP@Zr-MOF的操作稳定性和重复使用性.结果表明,pH=3.0、固定化时间为60 min、固定化温度为30℃是固定化HRP的最佳条件,固载量最高可达61.6 mg/g.与游离酶相比,HRP@Zr-MOF固定化酶反应器表现出更好的热稳定性、酸碱稳定性、H2O2稳定性和储存稳定性;重复使用10次后,HRP@Zr-MOF的催化活性仍能保持62.3%.将HRP@Zr-MOF应用于实际水样中结晶紫染料的催化降解,在5 min内降解率高达90%以上,表现出非常高效的催化效率. 展开更多

关键词 金属有机骨架 辣根过氧化物酶 固定化酶反应器 染料降解

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固定化β-葡萄糖醛酸酶反应器的制备及其在4-甲基亚硝胺基-1-(3-吡啶)-1-丁醇的O-糖苷化合物分析中的应用 被引量：3

8

作者 王婷 姚二民 +5 位作者 邓楠 边阳阳 刘萍萍 张柯 陈千思 李斌 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期245-252,共8页

采用溶胶-凝胶法,以丙烯酰胺作为单体,制备了基于有机-硅胶杂化整体柱的β-葡萄糖醛酸酶反应器。优化了硅酸甲酯和γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅的物质的量的比、丙烯酰胺和聚乙二醇的用量,以及水浴温度等制备条件,获得了孔隙均匀、... 采用溶胶-凝胶法,以丙烯酰胺作为单体,制备了基于有机-硅胶杂化整体柱的β-葡萄糖醛酸酶反应器。优化了硅酸甲酯和γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅的物质的量的比、丙烯酰胺和聚乙二醇的用量,以及水浴温度等制备条件,获得了孔隙均匀、通透性良好、机械强度高的有机-硅胶杂化整体柱。采用光学显微镜和扫描电镜表征杂化整体柱。进一步将β-葡萄糖醛酸酶共价键合在整体柱上,以4-甲基亚硝胺基-1-(3-吡啶)-1-丁醇(NNAL)的O-糖苷化合物(NNAL-O-Gluc)为底物研究酶反应器的水解效果,实验结果证明酶反应器在室温条件下的水解效率大大提高,实现了NNAL-O-Gluc高效水解与分析,解决了目前NNAL-O-Gluc分析中前处理水解效率低的问题。 展开更多

关键词 有机-硅胶杂化整体柱 6-葡萄糖醛酸酶 固定化酶反应器 4-甲基亚硝胺基-1-(3-吡啶)-1-丁醇的0-糖苷化合物

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基于DNA定向固定化技术构建毛细管固定化酶微反应器的研究进展 被引量：2

9

作者 宋佳一 李梦琦 +4 位作者 沈昊 周梓昕 贺雯婷 苏萍 杨屹 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1206-1210,共5页

生物酶影响着物质代谢和质能转换等生命活动,生物体内某些酶的活性变化会导致疾病的发生。发展新型的酶分析方法对深刻理解生物代谢过程、疾病诊断和药物研发等具有重要意义。毛细管电泳(CE)具有分离效率高、分析速度快、操作简单和样... 生物酶影响着物质代谢和质能转换等生命活动,生物体内某些酶的活性变化会导致疾病的发生。发展新型的酶分析方法对深刻理解生物代谢过程、疾病诊断和药物研发等具有重要意义。毛细管电泳(CE)具有分离效率高、分析速度快、操作简单和样品消耗少以及可与多种检测手段联用等优点,在酶分析研究中越来越受到关注。CE酶分析主要包括离线和在线两种模式,其中,固定化酶微反应器与毛细管电泳联用(CE-IMER)的在线酶分析已经成为主要的酶分析方法之一。CE-IMER充分结合了固定化酶和CE的优势,将游离酶固定在毛细管内,不仅可以显著提高酶的稳定性和重复使用性,而且可以实现纳升规模溶液的自动化酶分析,进而显著降低酶分析成本。目前已有大量方法制备IMER用于CE酶分析,然而如何构建性能良好、可再生使用、酶固载量大、自动化程度高的CE-IMER一直是该领域重点研究的问题。DNA定向固定化技术(DDI)可以充分利用DNA分子的碱基互补配对(A-T,C-G),在温和的生理条件下特异性固定生物大分子。由于短链双螺旋DNA分子具有较强的机械刚性和物理化学稳定性,通过DDI将酶固定在载体表面,有利于降低传质阻力,提高酶与底物的接触能力,进而促进酶促分析过程。该文主要综述了利用DDI构建新型IMER在CE酶分析中的应用现状,并对其未来发展进行了展望。 展开更多

关键词 毛细管电泳 固定化酶微反应器 固定化酶 DNA定向固定化

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动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的方法 被引量：7

10

作者 孙晓芳 王巍 +1 位作者 赵德忠 王丹巧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期232-234,共3页

目的　建立动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中乙酰胆碱 (ACh)和胆碱 (Ch)水平的方法。方法　应用脑内微透析与高效液相色谱 (HPLC ) 柱后固定化酶反应器 (IMER ) 电化学检测法 (ED)相结合的技术 ,动态监测正常清醒自由活... 目的　建立动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中乙酰胆碱 (ACh)和胆碱 (Ch)水平的方法。方法　应用脑内微透析与高效液相色谱 (HPLC ) 柱后固定化酶反应器 (IMER ) 电化学检测法 (ED)相结合的技术 ,动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中ACh和Ch水平。结果　大鼠纹状体细胞外液中ACh和Ch浓度在灌流开始时较高 ,然后逐渐降低 ,ACh在灌流进行 2 4 0min后达到较稳定水平 ;Ch浓度则在灌流的 4 5 0min内持续下降。HPLC IMER ED检测ACh和Ch的极限可达 15 0fmol,且至少在 0 12 5～ 1 0 μmol·L-1的范围内线性关系良好。结论　HPLC IMER ED是一种灵敏且可靠的测定ACh和Ch的方法 ,和微透析技术相结合可以动态监测清醒自由活动大鼠脑内细胞外液中ACh和Ch的水平。 展开更多

关键词 高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测法 脑内微透析 乙酰胆碱和胆碱 动态监测

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集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用 被引量：1

11

作者 周愿 张珅 +2 位作者 袁辉明 张丽华 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期355-360,共6页

为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记... 为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1∶1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能,发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90%;蛋白质经hIMER在线酶解10 min产生的漏切及酶解产物在hIMER柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小,所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析,发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达,15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。 展开更多

关键词 集成化蛋白质组定量分析平台 蛋白质标记 定量蛋白质组学 亲水型固定化酶反应器

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发酵工程

12

《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第11期48-50,共3页

902974 基质和产物浓度对在恒化培养中肺炎克雷伯氏菌生长的影响[英]/Rutgers,M.…//Biochim.Biophys.Acta B.-1989,977（2）.-142[译自 DBA,1990,9（5）,90-02509]将肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）培养在不同稀释度和不同产物... 902974 基质和产物浓度对在恒化培养中肺炎克雷伯氏菌生长的影响[英]/Rutgers,M.…//Biochim.Biophys.Acta B.-1989,977（2）.-142[译自 DBA,1990,9（5）,90-02509]将肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）培养在不同稀释度和不同产物（CO₂-HCO₃^-和生物量）浓度下的限氮、限葡萄糖或限柠檬酸的恒化培养装置中。 展开更多

关键词 发酵工程 恒化培养 肺炎克雷伯氏菌 产物浓度 Biophys 发酵液 发酵罐 混合培养物 固定化酶反应器 稀释度

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发酵工程

13

《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第7期45-52,共8页

901763 生物技术的黄金时代[英]/Malik,V.S.//Adv.Appl.Microbio1.-1989,34.-263～306[译自 DBA,1989,8(23),89-13665]生物技术是微生物学,生物化学、遗传学和生化工程等多学科的综合.生物技术为解决能源成本上涨。

关键词 生化工程 生物技术 发酵工程 二氨基庚二酸 链霉菌 固定化酶反应器 最适温度 内酞胺类抗生素 鱼腥藻属 菌体裂解

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