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噬菌体展示技术筛选细胞穿透肽的研究进展
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作者 田宛鑫 刘思佳 +3 位作者 姜宁 赵芳芳 宋军 张爱忠 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3658-3665,共8页
细胞穿透肽(CPP)是一类由5~30个天然或人造氨基酸残基组成的短肽序列,具有增强细胞摄取抗原并促进穿越各种生物屏障的能力,因其高效、独特的跨膜运输能力成为近年来生物医药领域的研究热点。噬菌体展示技术(PDT)是一种通过对噬菌体DNA... 细胞穿透肽(CPP)是一类由5~30个天然或人造氨基酸残基组成的短肽序列,具有增强细胞摄取抗原并促进穿越各种生物屏障的能力,因其高效、独特的跨膜运输能力成为近年来生物医药领域的研究热点。噬菌体展示技术(PDT)是一种通过对噬菌体DNA进行基因改造,从而在噬菌体表面展示的分子技术,其包含的遗传序列可将表型与基因型相连,该技术允许不同的肽库在噬菌体颗粒表面表达,并能选择与靶标特异性结合的多肽,且其具有简单、高效和低成本等优点。因此,可利用其在不损伤其他正常细胞的情况下实现靶向治疗,为研发靶向递药新型载体,实现靶向药物投递奠定了基础。本文综述了细胞穿透肽以及利用噬菌体展示技术筛选细胞穿透肽的研究进展,同时也为饲用抗生素替代品的研究与开发提供更有效的思路和方法,并进一步为胞内致病菌的精准杀伤提供新的策略和研究方向。 展开更多
关键词 细胞穿透 噬菌体展示技术 靶向 抗菌
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庚型肝炎病毒全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建与鉴定 被引量:2
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作者 吴晓兰 潘卫 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期842-845,共4页
目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。 方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,... 目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。 方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,并用原位杂交、限制性酶切及 DNA测序等方法鉴定所建文库的随机性和完整性。 结果 :所建肽库的容量为5 .34× 10 4个菌落形成单位 ,滴度为 1.41× 10 1 4 TU/ ml。原位杂交结果证明在 HGV基因组的不同区域均有阳性菌落 ,酶切鉴定和 DNA测序结果显示插入片段的长度和片段来源区域具有随机性。结论 :所建肽库具有良好的完整性、随机性及实用性 ,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽展示肽库 庚型肝炎 HGV CDNA
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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建 被引量:8
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作者 潘卫 戚中田 +2 位作者 贺祥 陈秋莉 潘欣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期857-860,共4页
目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。 展开更多
关键词 噬菌体随机展示 核心蛋白 丙型肝炎 HCV
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从HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库中筛选抗原表位 被引量:6
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作者 潘卫 戚中田 +4 位作者 吴晓兰 贺祥 潘欣 陈秋莉 杜平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期20-23,共4页
目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术,筛选HCV核心蛋白的抗原序列。用抗-HCV核心抗体单独阳性的血清,对巳构建的HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行4轮筛选,检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂... 目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术,筛选HCV核心蛋白的抗原序列。用抗-HCV核心抗体单独阳性的血清,对巳构建的HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行4轮筛选,检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂交阳性率来评价筛选的效果。测定和分析7个杂交阳性克隆的DNA序列。结果所测定的7个序列中,6个为HCV核心蛋白序列,其中5个被正确地展示于噬菌体表面,1个可能被正确展示,这些序列均含有重要的HCV核心抗原表位。另1个为大肠杆菌nrfa基因。结论噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选,并具有简便、快速、准确的优点。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 噬菌体 随机 抗原
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运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽 被引量:4
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作者 杨海捷 段光杰 +3 位作者 刘友生 陈锐 余德文 杨宇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期2262-2266,共5页
目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步... 目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证。挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析。结果经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽)。检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点。结论通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。 展开更多
关键词 内毒素 噬菌体展示随机 生物信息学
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噬菌体展示随机肽库及其在抗原表位研究上的应用 被引量:5
6
作者 王欣之 傅志强 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2005年第1期42-45,共4页
本文主要介绍了噬菌体展示系统的原理,并就噬菌体表面展示系统的不同表达载体类别,分别做了描述, 同时讨论该展示系统在抗原表位研究上的应用。
关键词 抗原表位 噬菌体展示 随机 噬菌体表面展示 研究 表达载体 类别 应用
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从噬菌体展示随机肽库中筛选豌豆凝集素的结合肽
7
作者 周翔 詹金彪 +1 位作者 毛献荣 王克夷 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第5期412-416,共5页
目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合... 目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合成了3条6肽ARMWSF、RYDYSY、LRLRQL,用不同浓度的6肽对PSA、ConA与HRP的结合进行竞争抑制实验。结果:经过三轮筛选后,这些噬菌体展示肽有明显的富集,从第三轮挑选的22个克隆的插入氨基酸序列可分为三大类;点印迹结果表明,这些噬菌体展示肽能与PSA特异结合,而α-甲基-D-甘露糖苷不同程度地抑制这种结合;LRLRQL不溶于水,ARMWSF和RYDYSY对PSA和HRP的结合有抑制,而对ConA和HRP的结合没有明显抑制。结论:人工合成的2条6肽和PSA的结合部位与α-甲基-D-甘露糖苷和PSA结合的部位并非相同。 展开更多
关键词 噬菌体 类/分离提纯 模拟 外源凝集素类/遗传学 植物 噬菌体展示随机 豌豆凝集素 亲和筛选 结合
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噬菌体展示随机十五肽库的构建 被引量:1
8
作者 王筱蒙 邱郑 +1 位作者 张芳 王旻 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期242-246,共5页
为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编... 为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编码随机十五肽的基因。将扩增后的目的基因经过SfiΙ,NotΙ两个限制性内切酶双酶切后,与经同样双酶切的5'去磷酸化的噬菌粒载体连接,将重组产物电转入大肠埃希菌TG1感受态细胞。集合菌落后进行库容和多样性检验。所建肽库库容可达5×108。随机挑取20个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机十五肽库。 展开更多
关键词 噬菌体展示 随机十五
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噬菌体展示随机肽库技术及其在动物医学中的应用
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作者 李娜 《甘肃畜牧兽医》 2009年第2期44-46,共3页
关键词 噬菌体展示技术 动物医学 随机 应用 SMITH 基因工程 基因融合 基因片段
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猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定 被引量:12
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作者 徐和敏 王琴 +1 位作者 徐璐 范学政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期71-76,共6页
本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(... 本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(SM-E2库和HCLV-E2库)。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术,采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM-E2库和HCLV-E2库进行抗原表位筛选。结果共筛选到了5条与E2蛋白高度同源的序列,在E2蛋白上的同源区域分别为TAVSPTTLR、YYEP、TTWKEYSH、GGQ(V)VK和PDGLPHY。结果表明,TAVSPTTLR、YYEP和TTWKEYSH序列与目前已知E2蛋白表位一致,说明它们是E2蛋白上的优势表位;GGQ(V)VK和PDGLPHY序列与预测表位一致,推测是E2蛋白上潜在的抗原表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 噬菌体展示
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噬菌体随机十二肽库淘选三水白虎汤作用于类风湿关节炎滑膜细胞的靶点研究 被引量:8
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作者 潘超 肖长虹 +3 位作者 高燕 赵晓峰 李凯芹 毕亚男 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期446-448,453,共4页
目的:利用噬菌体随机十二肽库淘选出与三水白虎汤(SSBH)作用的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)特异性结合的多肽,寻找SSBH治疗类风湿关节炎的蛋白靶点。方法:以SSBH处理过的RASFs为靶细胞,生理盐水(NS)处理的RASFs为吸附细胞,全细胞... 目的:利用噬菌体随机十二肽库淘选出与三水白虎汤(SSBH)作用的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)特异性结合的多肽,寻找SSBH治疗类风湿关节炎的蛋白靶点。方法:以SSBH处理过的RASFs为靶细胞,生理盐水(NS)处理的RASFs为吸附细胞,全细胞差减筛选法对噬菌体十二肽库进行3轮淘选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体,并初步鉴定噬菌体克隆的亲和力,阳性克隆测序后进行生物学分析。结果:3轮淘选后,随机挑选32个噬菌体克隆进行DNA序列分析,展示SGVYKVAYDWQH十二肽的噬菌体被富集约为56%(18/32)。结论:从噬菌体肽库筛选到SSBH作用RASFs的特异性结合短肽,并分析出相关作用蛋白。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 噬菌体随机十二 三水白虎汤 全细胞差减筛选
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利用噬菌体随机肽库对神经胶质瘤母系SWO-38进行全细胞筛选 被引量:6
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作者 高双荣 钟雪云 +6 位作者 颜艳灵 钟振宇 秦艳芳 孙艳花 王冰 于莉娜 钟瑛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期946-948,共3页
目的和方法 :用噬菌体随机 7肽库对神经胶质瘤母细胞 (SWO - 38)进行全细胞筛选 ,并通过竞争结合实验检验所筛选出的克隆的结合特异性。结果 :经过 3轮“吸附 -洗脱 -扩增” ,噬菌体高度富集 ,并得到两个特异性较强的克隆。结论 :利用... 目的和方法 :用噬菌体随机 7肽库对神经胶质瘤母细胞 (SWO - 38)进行全细胞筛选 ,并通过竞争结合实验检验所筛选出的克隆的结合特异性。结果 :经过 3轮“吸附 -洗脱 -扩增” ,噬菌体高度富集 ,并得到两个特异性较强的克隆。结论 :利用噬菌体肽库可以简便。 展开更多
关键词 噬菌体随机 全细胞筛选 噬菌体 神经胶质瘤 肿瘤导向治疗
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噬菌体随机肽库淘选肺癌细胞NCI-H1299特异性结合多肽 被引量:5
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作者 石磊 潘雪刁 +7 位作者 王军业 潘琴 巫玮 金桂芳 房思练 侯炳忠 何兴祥 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期300-304,共5页
目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二... 目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选,挑取单克隆ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中,其中6号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZS6。细胞免疫荧光试验进一步证明,合成的相应多肽FITCZS6对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZS6,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体 肺癌 NCI—H1299 减性筛选
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一种稳定、易于操作的噬菌体随机肽库载体的构建 被引量:5
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作者 万瑛 代佳平 +1 位作者 王燕 刘昕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期256-258,共3页
目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOMB3序列进行点矩阵作图分析(Dot-Plot分析),切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性... 目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOMB3序列进行点矩阵作图分析(Dot-Plot分析),切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性。原克隆位点63bp的填充序列增加到1435bp以便于酶切鉴定和电泳回收。结果:构建了命名为pTMB2的噬菌粒载体。结论:pTMB2的噬菌粒载体更为稳定且易于操作。 展开更多
关键词 噬菌体随机 pCOMB3 Dot-Plot分析 载体
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应用噬菌体展示肽库技术淘选大鼠CCR5膜外第一、二胞外环特异性结合的活性拮抗肽与初步鉴定 被引量:10
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作者 刘思雪 胡梅 +2 位作者 叶小研 黄花荣 钟英强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1225-1230,共6页
目的:利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5(CCR5)膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法:在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子... 目的:利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5(CCR5)膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法:在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子,利用噬菌体展示7肽文库进行3~4轮淘选,用ELISA法鉴定所选肽与靶分子的结合,并测定其与浓度的关系。结果:与CCR5第一、二胞外环特异性结合的噬菌体展示的短肽序列分别为GHWKVWL和HYIDFRW,ELISA鉴定呈阳性反应,且短肽与靶分子的结合具有浓度依赖性和可饱和性。结论:利用噬菌体展示技术成功获得了2条CCR5特异性结合的短肽,并在体外证明其可与CCR5第一、二胞外环具有结合能力。 展开更多
关键词 CC趋化因子受体5 拮抗 噬菌体展示
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日本血吸虫病患者血清对噬菌体随机7肽库的免疫筛选 被引量:17
16
作者 舒新华 易新元 曾宪芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期109-112,共4页
目的从噬菌体随机多肽文库中 ,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基 ,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库。按吸附 -洗脱 -扩... 目的从噬菌体随机多肽文库中 ,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基 ,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库。按吸附 -洗脱 -扩增的淘筛过程 ,经3轮免疫淘筛后 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并用斑点ELISA分析其诊断血吸虫病的价值。结果经3轮免疫淘筛后 ,特异性结合的噬菌体富集增加近100倍。用ELISA检测第3轮筛选后随机挑取的30个噬菌体克隆 ,有26个克隆能与慢性血吸虫病患者的血清Ig产生特异性反应 ,其中A值最高的2个克隆具有诊断血吸虫病的潜在价值。结论噬菌体随机肽库技术 ,可应用于分析、鉴定血吸虫抗原表位 ,继而为获得亚单位表位水平的诊断试剂和抗血吸虫病的短肽疫苗提供依据。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 免疫筛选 噬菌体 随机
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随机多肽噬菌体展示载体pCANTAB5X的构建 被引量:12
17
作者 潘卫 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期723-725,共3页
目的:构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法:在引物中加入XbaⅠ识别序列,将用该引物扩增的PCR产物克隆到pGEM-T中,再将该片段插入pCANTAB5E中构建成噬菌体展示载体pCANTAB5X。结果:限制... 目的:构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法:在引物中加入XbaⅠ识别序列,将用该引物扩增的PCR产物克隆到pGEM-T中,再将该片段插入pCANTAB5E中构建成噬菌体展示载体pCANTAB5X。结果:限制酶切点XbaⅠ和HGV C片段被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB5X中。结论:构建的新的噬菌体展示载体pCANTAB5X能有效展示外源性随机多肽。 展开更多
关键词 噬菌体展示 随机 外源性 pCANTAB5X
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从噬菌体随机肽库中筛选IL-6抗体的识别表位 被引量:5
18
作者 陈兴 王鑫 +4 位作者 杨子义 董家新 王建安 姚志建 沈倍奋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期125-126,共2页
目的 :从噬菌体随机 6肽文库中筛选IL 6抗体的识别表位。方法 :利用具有IL 6中和活性的单抗C2 2 0筛选呈现于丝状噬菌体表面P3蛋白的随机 6肽文库。结果 :从噬菌体随机 6肽文库中筛选出 36株可与单抗特异结合的噬菌体克隆 ,其中多数克... 目的 :从噬菌体随机 6肽文库中筛选IL 6抗体的识别表位。方法 :利用具有IL 6中和活性的单抗C2 2 0筛选呈现于丝状噬菌体表面P3蛋白的随机 6肽文库。结果 :从噬菌体随机 6肽文库中筛选出 36株可与单抗特异结合的噬菌体克隆 ,其中多数克隆呈现核心序列SWLR ,该序列与IL 6的序列具有一定同源性。竞争结合实验和Western印迹分析 ,带有SWFNLR和HSWLRY小肽的 2株噬菌体克隆可与IL 6竞争结合单抗C2 2 0。结论 :SWFNLR和HSWLRY是IL 6单抗C2 2 0特异识别的表位。 展开更多
关键词 随机 IL-6 单克隆抗体 识别表位
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肺癌噬菌体展示肽库的构建及肺癌早期检测分子标志的筛选 被引量:3
19
作者 赵晋丰 吴玲玲 +5 位作者 常文军 黄盛东 余永伟 赵立军 陈祎佳 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1157-1161,共5页
目的:构建肺癌噬菌体展示肽库,筛选出肺癌早期检测的分子标志群。方法:取30例第二军医大学长海医院手术后立即冻存的肺癌组织标本构建肺癌噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集肺癌组及非肿瘤对照组血浆中的抗体进行5轮... 目的:构建肺癌噬菌体展示肽库,筛选出肺癌早期检测的分子标志群。方法:取30例第二军医大学长海医院手术后立即冻存的肺癌组织标本构建肺癌噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集肺癌组及非肿瘤对照组血浆中的抗体进行5轮亲和筛选,富集肺癌特异性的相关肽;随机挑取5轮筛选后的500个噬菌体克隆,用ELISA法进一步筛选肺癌/对照D比值大于2.0的肺癌特异标志物克隆,进行基因序列测定和蛋白功能预测。结果:(1)该噬菌体展示肽库的滴度为3.0×106pfu,库容9.0×106pfu,随机挑选20个噬菌斑经PCR鉴定其重组率为60%。(2)共筛选出19个有意义的噬菌体,测序后,预测其蛋白质功能,9个与癌症相关,8个功能未知,2个与癌症不相关。结论:筛选出的噬菌体克隆所表达的抗原很可能是早期诊断肺癌的标志物。 展开更多
关键词 噬菌体展示 肺肿瘤 分子标志
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噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合肽的实验研究 被引量:3
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作者 杨璞 何剪太 +4 位作者 王吉伟 胡玉 于丽 金鑫 张阳德 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1806-1808,1815,共4页
目的利用噬菌体随机肽库筛选特异性靶向人肝癌细胞的短肽,为肝癌的靶向治疗提供理论依据。方法以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,对噬菌体随机十二肽库进行3轮筛选。建立HepG2荷瘤裸鼠实验动物模型,并在裸鼠体内对经过体外3轮筛选的肽库再进行... 目的利用噬菌体随机肽库筛选特异性靶向人肝癌细胞的短肽,为肝癌的靶向治疗提供理论依据。方法以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,对噬菌体随机十二肽库进行3轮筛选。建立HepG2荷瘤裸鼠实验动物模型,并在裸鼠体内对经过体外3轮筛选的肽库再进行1轮筛选。随机挑取30个阳性噬菌体克隆进行序列测定及同源性分析。通过免疫细胞化学染色、免疫组织化学染色鉴定噬菌体展示肽的特异性。结果经过3轮体外筛选和1轮动物体内筛选,噬菌体在靶细胞HepG2上出现明显富集,随机挑选克隆测序结果表明十二肽VRKRSECLGAHD出现次数最多,免疫细胞化学染色、免疫组织化学染色进一步证明该噬菌体能特异结合于肝癌细胞。结论筛选得到的短肽能够特异性与肝癌细胞结合,为进一步研制用于治疗肝癌的高靶向性药物奠定实验基础。 展开更多
关键词 噬菌体 肝癌 HEPG2细胞 体内筛选
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