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噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽 被引量:1
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作者 苏林 孔燕 +2 位作者 刘长征 杨克恭 陈松森 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期351-356,共6页
目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,... 目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示 人干细胞因子 模拟 筛选 酶联免疫吸附测定法
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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建 被引量:8
2
作者 潘卫 戚中田 +2 位作者 贺祥 陈秋莉 潘欣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期857-860,共4页
目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。 展开更多
关键词 噬菌体随机展示 核心蛋白 丙型肝炎 HCV
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猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定 被引量:12
3
作者 徐和敏 王琴 +1 位作者 徐璐 范学政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期71-76,共6页
本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(... 本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(SM-E2库和HCLV-E2库)。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术,采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM-E2库和HCLV-E2库进行抗原表位筛选。结果共筛选到了5条与E2蛋白高度同源的序列,在E2蛋白上的同源区域分别为TAVSPTTLR、YYEP、TTWKEYSH、GGQ(V)VK和PDGLPHY。结果表明,TAVSPTTLR、YYEP和TTWKEYSH序列与目前已知E2蛋白表位一致,说明它们是E2蛋白上的优势表位;GGQ(V)VK和PDGLPHY序列与预测表位一致,推测是E2蛋白上潜在的抗原表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 噬菌体展示
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量子点荧光标记在重组噬菌体表面展示肽与胰岛素受体相互作用中的应用 被引量:9
4
作者 李鸿梅 刘含智 +4 位作者 张皓 朱贵宾 王丽萍 杨柏 李惟 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期982-984,共3页
Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experi... Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experimental result shows that the labeling phage can still infect E.coli K91 normally. We have also developed the procedures for using QDs to label CHO-IR cells and Mouse Kidney tissue slice. The tissue slice remained stably labeled for over 10 d and the cells remained stably labeled even for over 5 months. 展开更多
关键词 量子点荧光标记 重组噬菌体表面展示 胰岛素受体 相互作用 生物荧光标记 光谱学
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噬菌体随机十二肽库淘选三水白虎汤作用于类风湿关节炎滑膜细胞的靶点研究 被引量:8
5
作者 潘超 肖长虹 +3 位作者 高燕 赵晓峰 李凯芹 毕亚男 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期446-448,453,共4页
目的:利用噬菌体随机十二肽库淘选出与三水白虎汤(SSBH)作用的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)特异性结合的多肽,寻找SSBH治疗类风湿关节炎的蛋白靶点。方法:以SSBH处理过的RASFs为靶细胞,生理盐水(NS)处理的RASFs为吸附细胞,全细胞... 目的:利用噬菌体随机十二肽库淘选出与三水白虎汤(SSBH)作用的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)特异性结合的多肽,寻找SSBH治疗类风湿关节炎的蛋白靶点。方法:以SSBH处理过的RASFs为靶细胞,生理盐水(NS)处理的RASFs为吸附细胞,全细胞差减筛选法对噬菌体十二肽库进行3轮淘选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体,并初步鉴定噬菌体克隆的亲和力,阳性克隆测序后进行生物学分析。结果:3轮淘选后,随机挑选32个噬菌体克隆进行DNA序列分析,展示SGVYKVAYDWQH十二肽的噬菌体被富集约为56%(18/32)。结论:从噬菌体肽库筛选到SSBH作用RASFs的特异性结合短肽,并分析出相关作用蛋白。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 噬菌体随机十二 三水白虎汤 全细胞差减筛选
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运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽 被引量:4
6
作者 杨海捷 段光杰 +3 位作者 刘友生 陈锐 余德文 杨宇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期2262-2266,共5页
目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步... 目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证。挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析。结果经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽)。检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点。结论通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。 展开更多
关键词 内毒素 噬菌体展示随机 生物信息学
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肺癌噬菌体展示肽库的构建及肺癌早期检测分子标志的筛选 被引量:3
7
作者 赵晋丰 吴玲玲 +5 位作者 常文军 黄盛东 余永伟 赵立军 陈祎佳 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1157-1161,共5页
目的:构建肺癌噬菌体展示肽库,筛选出肺癌早期检测的分子标志群。方法:取30例第二军医大学长海医院手术后立即冻存的肺癌组织标本构建肺癌噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集肺癌组及非肿瘤对照组血浆中的抗体进行5轮... 目的:构建肺癌噬菌体展示肽库,筛选出肺癌早期检测的分子标志群。方法:取30例第二军医大学长海医院手术后立即冻存的肺癌组织标本构建肺癌噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集肺癌组及非肿瘤对照组血浆中的抗体进行5轮亲和筛选,富集肺癌特异性的相关肽;随机挑取5轮筛选后的500个噬菌体克隆,用ELISA法进一步筛选肺癌/对照D比值大于2.0的肺癌特异标志物克隆,进行基因序列测定和蛋白功能预测。结果:(1)该噬菌体展示肽库的滴度为3.0×106pfu,库容9.0×106pfu,随机挑选20个噬菌斑经PCR鉴定其重组率为60%。(2)共筛选出19个有意义的噬菌体,测序后,预测其蛋白质功能,9个与癌症相关,8个功能未知,2个与癌症不相关。结论:筛选出的噬菌体克隆所表达的抗原很可能是早期诊断肺癌的标志物。 展开更多
关键词 噬菌体展示 肺肿瘤 分子标志
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噬菌体展示肽库技术应用的研究进展 被引量:7
8
作者 李芳秋 朱扣军 武建国 《医学研究生学报》 CAS 2004年第9期843-846,共4页
噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术 ,它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面 ,使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要... 噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术 ,它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面 ,使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要用途。 展开更多
关键词 噬菌体展示 蛋白质相互作用 肿瘤靶
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利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位 被引量:3
9
作者 张扬 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 高崧 张如宽 刘秀梵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期60-63,共4页
目的 用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果 经过三轮的亲和筛... 目的 用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果 经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。 结论 实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。 展开更多
关键词 沙门氏菌 O9抗原 模拟表位 噬菌体展示
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噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽 被引量:1
10
作者 唐波 黄定德 +2 位作者 郑磊 任浩 李前伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期10-14,共5页
目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确... 目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力。结果成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPAC1受体结合。结论通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽。 展开更多
关键词 VPAC1 稳定转染 噬菌体展示 十二 分子探针
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庚型肝炎病毒全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建与鉴定 被引量:2
11
作者 吴晓兰 潘卫 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期842-845,共4页
目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。 方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,... 目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。 方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,并用原位杂交、限制性酶切及 DNA测序等方法鉴定所建文库的随机性和完整性。 结果 :所建肽库的容量为5 .34× 10 4个菌落形成单位 ,滴度为 1.41× 10 1 4 TU/ ml。原位杂交结果证明在 HGV基因组的不同区域均有阳性菌落 ,酶切鉴定和 DNA测序结果显示插入片段的长度和片段来源区域具有随机性。结论 :所建肽库具有良好的完整性、随机性及实用性 ,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体随机展示 庚型肝炎 HGV CDNA
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从噬菌体展示肽库中筛选与人精子蛋白17结合的短肽序列 被引量:3
12
作者 李芳秋 吴玲 +1 位作者 王卫萍 金洁 《医学研究生学报》 CAS 2007年第7期675-677,681,共4页
目的:随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17(Sp17)特异性结合的短肽序列,并进行鉴定。方法:以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛。富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DN... 目的:随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17(Sp17)特异性结合的短肽序列,并进行鉴定。方法:以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛。富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DNA测序分析。结果:随机挑出20个噬菌体克隆进行鉴定,ELISA显示其中5个克隆与Sp17有较强结合活性,其氨基酸序列分别为QLMSNIHRRM II、RKMMNQTKRHLP、NTMKTMR IMMTR、RRRLLLMQRRMKR和SPRPMMRR IRKQ。结论:从噬菌体展示肽库中筛选鉴定出5个与人Sp17结合的12肽序列。 展开更多
关键词 精子蛋白17结合短 噬菌体展示 酶标记免疫吸附分析法
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噬菌体展示随机肽库及其在抗原表位研究上的应用 被引量:5
13
作者 王欣之 傅志强 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2005年第1期42-45,共4页
本文主要介绍了噬菌体展示系统的原理,并就噬菌体表面展示系统的不同表达载体类别,分别做了描述, 同时讨论该展示系统在抗原表位研究上的应用。
关键词 抗原表位 噬菌体展示 随机 噬菌体表面展示 研究 表达载体 类别 应用
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多肽的表面展示与结构库 被引量:12
14
作者 朱圣庚 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期534-544,共11页
表面展示是一种新的基因操作技术,它使表达的多肽以融合蛋白形式展现在噬菌体或细胞表面,保持相对独立的空间结构和生物活性。该技术可用于研究多肽(蛋白质)的性质、相互识别和作用,并据此从巨大展示库中选择特定靶功能的多肽结构... 表面展示是一种新的基因操作技术,它使表达的多肽以融合蛋白形式展现在噬菌体或细胞表面,保持相对独立的空间结构和生物活性。该技术可用于研究多肽(蛋白质)的性质、相互识别和作用,并据此从巨大展示库中选择特定靶功能的多肽结构。常用丝状噬菌体、T4噬菌体、λ噬菌体以及细胞构建表面展示系统。表面展示库包括重组噬菌体抗体库、随机短肽库、多肽构象库、cDNA展示库和基因突变体展示库。表面展示技术可用于人工抗体和疫苗的制备、抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离、细胞表面工程的研究、多肽药物的研制。 展开更多
关键词 表面展示结构 亲和选择 蛋白质 基因操纵
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从噬菌体展示随机肽库中筛选豌豆凝集素的结合肽
15
作者 周翔 詹金彪 +1 位作者 毛献荣 王克夷 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第5期412-416,共5页
目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合... 目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合成了3条6肽ARMWSF、RYDYSY、LRLRQL,用不同浓度的6肽对PSA、ConA与HRP的结合进行竞争抑制实验。结果:经过三轮筛选后,这些噬菌体展示肽有明显的富集,从第三轮挑选的22个克隆的插入氨基酸序列可分为三大类;点印迹结果表明,这些噬菌体展示肽能与PSA特异结合,而α-甲基-D-甘露糖苷不同程度地抑制这种结合;LRLRQL不溶于水,ARMWSF和RYDYSY对PSA和HRP的结合有抑制,而对ConA和HRP的结合没有明显抑制。结论:人工合成的2条6肽和PSA的结合部位与α-甲基-D-甘露糖苷和PSA结合的部位并非相同。 展开更多
关键词 噬菌体 类/分离提纯 模拟 外源凝集素类/遗传学 植物 噬菌体展示随机 豌豆凝集素 亲和筛选 结合
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突变肽库的构建及其应用——噬菌体展示短肽的改造
16
作者 刘北一 富宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期60-61,共2页
关键词 噬菌体展示技术 突变 PDT 抗原 靶分子 相互作用 单链抗体 序列
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噬菌体表面展示技术筛选胰高血糖样肽1受体N端片段的Exendin-4亲和位点
17
作者 高蔚丰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16775-16777,共3页
[目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP... [目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP-1R与Exendin-4结合活性。[结果]nGLP-1R第30位、第46位和第92位氨基酸是其与Exendin-4结合的潜在位点。[结论]关键位点单个氨基酸残基的突变可以改变nGLP-1R蛋白质的生物学活性。 展开更多
关键词 胰高血糖素样1受体 EXENDIN-4 易错PCR 噬菌体表面展示
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利用T7噬菌体展示技术构建人舌鳞癌细胞多肽文库 被引量:2
18
作者 王景涛 季平 +4 位作者 邓诚 伍明毅 刘凯 孙守娟 邹波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1687-1689,共3页
目的:本研究拟构建人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为进一步筛选和鉴定与舌鳞癌相关的蛋白或多肽打下基础。方法:人舌癌细胞株Tca8113,QiaGen法提取细胞mRNA,逆转录合成双链cDNA后与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩... 目的:本研究拟构建人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为进一步筛选和鉴定与舌鳞癌相关的蛋白或多肽打下基础。方法:人舌癌细胞株Tca8113,QiaGen法提取细胞mRNA,逆转录合成双链cDNA后与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到T7噬菌体展示多肽文库。结果:构建了人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,原始文库重组滴度为鳞癌1.7×106 pfu,扩增后滴度为3×1010 pfu/mL。随机从文库中抽取10个克隆PCR扩增插入片断,电泳结果显示构建的文库中均有插入片段,文库插入率高达100%。所构建的文库插入片断大小在(0.4~1.0)kbp之间。结论:成功构建了人舌癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为下一步筛选和鉴定与舌癌相关的蛋白或多肽奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示 人舌鳞癌 TCA8113
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从噬菌体展示肽库中筛选PreS1抗原的结合肽 被引量:2
19
作者 陈青青 郑慧敏 郭葆玉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期783-785,共3页
目的:从噬菌体随机七肽库中筛选能与PreS1抗原特异性结合的多肽。方法:利用噬菌体展示技术,以PreS1抗原为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和筛选,ELISA鉴定阳性克隆。结果:对肽库进行3轮筛选后,通过ELISA和竞争抑制ELISA,获得了特异性... 目的:从噬菌体随机七肽库中筛选能与PreS1抗原特异性结合的多肽。方法:利用噬菌体展示技术,以PreS1抗原为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和筛选,ELISA鉴定阳性克隆。结果:对肽库进行3轮筛选后,通过ELISA和竞争抑制ELISA,获得了特异性的结合肽,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列。结论:利用噬菌体展示技术成功筛选到了PreS1抗原的结合肽,为乙肝的治疗和诊断探索新的途径。 展开更多
关键词 PRES1抗原 噬菌体展示 结合 乙型肝炎
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噬菌体展示随机十五肽库的构建 被引量:1
20
作者 王筱蒙 邱郑 +1 位作者 张芳 王旻 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期242-246,共5页
为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编... 为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编码随机十五肽的基因。将扩增后的目的基因经过SfiΙ,NotΙ两个限制性内切酶双酶切后,与经同样双酶切的5'去磷酸化的噬菌粒载体连接,将重组产物电转入大肠埃希菌TG1感受态细胞。集合菌落后进行库容和多样性检验。所建肽库库容可达5×108。随机挑取20个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机十五肽库。 展开更多
关键词 噬菌体展示 随机十五
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