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风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库的构建和分析
被引量：
1
1
作者
李运雄
孟锦绣
+3 位作者
朱平
卢聪
郑少忆
余细勇
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2012年第9期1398-1400,共3页
目的:构建风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库。方法:外科手术治疗中取风湿性心脏病患者新鲜心耳组织,用QIAGEN试剂盒提取RNA,用逆转录酶合成cDNA第一链,用长距离PCR合成双链cDNA,SfiⅠ酶切cDNA后过柱分级收集,用T4 DNA连接酶重组...
目的:构建风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库。方法:外科手术治疗中取风湿性心脏病患者新鲜心耳组织,用QIAGEN试剂盒提取RNA,用逆转录酶合成cDNA第一链,用长距离PCR合成双链cDNA,SfiⅠ酶切cDNA后过柱分级收集,用T4 DNA连接酶重组连接入λTripl Ex2载体,最后用λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:构建了风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/mL,重组率为99%,81.25%外源重组片段大于1kb。结论:成功构建了高质量的风湿性心脏病患者心肌组织噬菌体表达文库,为风湿性心脏病的分子机制寻找新的研究策略奠定了实验基础。
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关键词
风湿性心脏病
噬菌体表达文库
构建
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职称材料
一种新的乙型肝炎病毒表面抗原结合蛋白的筛选、表达及其生物学活性的初步研究
被引量：
7
2
作者
陈媛媛
朱乃硕
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期53-60,共8页
为了研究乙肝病毒侵染肝细胞过程中的功能蛋白 ,通过印迹免疫分析技术从人肝cDNA噬菌体表达库中筛选出一株编码乙肝表面抗原结合蛋白 (hepatitisBsurfaceantigenbindingprotein ,HBsAg BP)的cDNA克隆 .基因测序结果表明 ,该cDNA具有独...
为了研究乙肝病毒侵染肝细胞过程中的功能蛋白 ,通过印迹免疫分析技术从人肝cDNA噬菌体表达库中筛选出一株编码乙肝表面抗原结合蛋白 (hepatitisBsurfaceantigenbindingprotein ,HBsAg BP)的cDNA克隆 .基因测序结果表明 ,该cDNA具有独立的开放阅读框架 ,编码 1个由 344个氨基酸残基构成的可溶性蛋白分子 ,属于免疫球蛋白超家族成员 .将该基因克隆到原核表达载体pTriplEx后 ,在E .coliXL1 Blue菌株中获得 4 4kD的重组蛋白 .重组蛋白经Western印迹和ELISA实验证明具有与乙肝表面抗原特异性结合的能力 .进一步经流式细胞仪实验显示 ,在纯化的重组蛋白存在的情况下 ,天然的HBsAg与肝细胞株HepG2的亲和力显著增高 .结果显示 ,该乙肝表面抗原结合蛋白可能是介导乙肝病毒对肝细胞亲和侵染的可溶性辅助受体 .
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关键词
肝cDNA
噬菌体表达文库
乙肝表面抗原
乙肝表面抗原结合蛋白
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职称材料
题名
风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库的构建和分析
被引量：
1
1
作者
李运雄
孟锦绣
朱平
卢聪
郑少忆
余细勇
机构
广东省人民医院
广东省人民医院
广东省人民医院
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2012年第9期1398-1400,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:30700327)
广东省自然科学基金资助项目(编号:7300047)
+1 种基金
广东省科技计划项目(编号:2008658)
广东省医学科研基金项目(编号:A2010046)
文摘
目的:构建风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库。方法:外科手术治疗中取风湿性心脏病患者新鲜心耳组织,用QIAGEN试剂盒提取RNA,用逆转录酶合成cDNA第一链,用长距离PCR合成双链cDNA,SfiⅠ酶切cDNA后过柱分级收集,用T4 DNA连接酶重组连接入λTripl Ex2载体,最后用λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:构建了风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/mL,重组率为99%,81.25%外源重组片段大于1kb。结论:成功构建了高质量的风湿性心脏病患者心肌组织噬菌体表达文库,为风湿性心脏病的分子机制寻找新的研究策略奠定了实验基础。
关键词
风湿性心脏病
噬菌体表达文库
构建
Keywords
Rheumatic heart disease
Phage library
Construction
分类号
R541.2 [医药卫生—心血管疾病]
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职称材料
题名
一种新的乙型肝炎病毒表面抗原结合蛋白的筛选、表达及其生物学活性的初步研究
被引量：
7
2
作者
陈媛媛
朱乃硕
机构
复旦大学生命科学学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期53-60,共8页
基金
国家自然科学基金 (No .3 0 13 1160 73 3 )
香港RGC资助项目
复旦大学Med X基金资助项目~~
文摘
为了研究乙肝病毒侵染肝细胞过程中的功能蛋白 ,通过印迹免疫分析技术从人肝cDNA噬菌体表达库中筛选出一株编码乙肝表面抗原结合蛋白 (hepatitisBsurfaceantigenbindingprotein ,HBsAg BP)的cDNA克隆 .基因测序结果表明 ,该cDNA具有独立的开放阅读框架 ,编码 1个由 344个氨基酸残基构成的可溶性蛋白分子 ,属于免疫球蛋白超家族成员 .将该基因克隆到原核表达载体pTriplEx后 ,在E .coliXL1 Blue菌株中获得 4 4kD的重组蛋白 .重组蛋白经Western印迹和ELISA实验证明具有与乙肝表面抗原特异性结合的能力 .进一步经流式细胞仪实验显示 ,在纯化的重组蛋白存在的情况下 ,天然的HBsAg与肝细胞株HepG2的亲和力显著增高 .结果显示 ,该乙肝表面抗原结合蛋白可能是介导乙肝病毒对肝细胞亲和侵染的可溶性辅助受体 .
关键词
肝cDNA
噬菌体表达文库
乙肝表面抗原
乙肝表面抗原结合蛋白
Keywords
liver cDNA phage expression library , hepatitis B surface antigen(HBsAg), hepatitis B surface antigen binding protein(HBsAg-BP)
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库的构建和分析
李运雄
孟锦绣
朱平
卢聪
郑少忆
余细勇
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
一种新的乙型肝炎病毒表面抗原结合蛋白的筛选、表达及其生物学活性的初步研究
陈媛媛
朱乃硕
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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