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题名人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库的构建及质量分析
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作者
孟锦绣
李运雄
朱平
卢聪
郑少忆
余细勇
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机构
广东省人民医院/广东省医学科学院医学研究中心
广东省心血管病研究所
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出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1868-1872,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(No.30700327)
广东省自然科学基金资助项目(No.7300047)
+1 种基金
广东省科技计划资助项目(No.2008658)
广东省医学科学基金资助项目(No.A2010046)
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文摘
目的:各种病因引起的心脏瓣膜纤维化是导致心脏瓣膜功能丧失的主要原因,样本来源有限和不可重获性是其分子机制研究的瓶颈。本研究旨在成功获取患者纤维化瓣膜的遗传信息物质,为探明瓣膜病变的分子机制提供直接证据。方法:心脏换瓣手术中取纤维化瓣膜组织,提取高质量RNA,用SMART技术合成cDNA第1链,再用长距离PCR合成双链cDNA,经Sfi I酶切后过柱分级收集长片段cDNA,经T4 DNA连接酶催化连接入λTriplEx2载体,最后经λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:成功构建了纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,原始文库滴度为8×109 pfu/L,重组率为99%,外源基因片段大小在500到3 000 bp之间,其中81.25%片段大于1 000 bp。结论:成功构建了高质量的人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,该文库的库容量足够代表人类基因的复杂性,高重组率能保障功能筛选的高效性,长片段更有助于全长基因的获得和表达。
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关键词
心脏瓣膜
纤维化
噬菌体文库构建
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Keywords
Heart valves
Fibrosis
Phage library construction
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分类号
R363
[医药卫生—病理学]
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