肺癌噬菌体展示肽库的构建及肺癌早期检测分子标志的筛选 被引量：3

1

作者 赵晋丰 吴玲玲 +5 位作者 常文军 黄盛东 余永伟 赵立军 陈祎佳 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1157-1161,共5页

目的:构建肺癌噬菌体展示肽库,筛选出肺癌早期检测的分子标志群。方法:取30例第二军医大学长海医院手术后立即冻存的肺癌组织标本构建肺癌噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集肺癌组及非肿瘤对照组血浆中的抗体进行5轮... 目的:构建肺癌噬菌体展示肽库,筛选出肺癌早期检测的分子标志群。方法:取30例第二军医大学长海医院手术后立即冻存的肺癌组织标本构建肺癌噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集肺癌组及非肿瘤对照组血浆中的抗体进行5轮亲和筛选,富集肺癌特异性的相关肽;随机挑取5轮筛选后的500个噬菌体克隆,用ELISA法进一步筛选肺癌/对照D比值大于2.0的肺癌特异标志物克隆,进行基因序列测定和蛋白功能预测。结果:(1)该噬菌体展示肽库的滴度为3.0×106pfu,库容9.0×106pfu,随机挑选20个噬菌斑经PCR鉴定其重组率为60%。(2)共筛选出19个有意义的噬菌体,测序后,预测其蛋白质功能,9个与癌症相关,8个功能未知,2个与癌症不相关。结论:筛选出的噬菌体克隆所表达的抗原很可能是早期诊断肺癌的标志物。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库 肺肿瘤 分子标志

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噬菌体展示肽库技术应用的研究进展 被引量：7

2

作者 李芳秋 朱扣军 武建国 《医学研究生学报》 CAS 2004年第9期843-846,共4页

噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术 ,它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面 ,使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要... 噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术 ,它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面 ,使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要用途。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库 蛋白质相互作用 肿瘤靶肽

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利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位 被引量：3

3

作者 张扬 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 高崧 张如宽 刘秀梵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期60-63,共4页

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛... 目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。 结论　实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。 展开更多

关键词 沙门氏菌 O9抗原 模拟表位 噬菌体展示肽库

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从噬菌体展示肽库中筛选与人精子蛋白17结合的短肽序列 被引量：3

4

作者 李芳秋 吴玲 +1 位作者 王卫萍 金洁 《医学研究生学报》 CAS 2007年第7期675-677,681,共4页

目的:随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17(Sp17)特异性结合的短肽序列,并进行鉴定。方法:以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛。富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DN... 目的:随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17(Sp17)特异性结合的短肽序列,并进行鉴定。方法:以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛。富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DNA测序分析。结果:随机挑出20个噬菌体克隆进行鉴定,ELISA显示其中5个克隆与Sp17有较强结合活性,其氨基酸序列分别为QLMSNIHRRM II、RKMMNQTKRHLP、NTMKTMR IMMTR、RRRLLLMQRRMKR和SPRPMMRR IRKQ。结论:从噬菌体展示肽库中筛选鉴定出5个与人Sp17结合的12肽序列。 展开更多

关键词 精子蛋白17结合短肽 噬菌体展示肽库 酶标记免疫吸附分析法

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噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽 被引量：1

5

作者 唐波 黄定德 +2 位作者 郑磊 任浩 李前伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期10-14,共5页

目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确... 目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力。结果成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPAC1受体结合。结论通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽。 展开更多

关键词 VPAC1 稳定转染 噬菌体展示肽库 十二肽 分子探针

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从噬菌体展示肽库中筛选PreS1抗原的结合肽 被引量：2

6

作者 陈青青 郑慧敏 郭葆玉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期783-785,共3页

目的:从噬菌体随机七肽库中筛选能与PreS1抗原特异性结合的多肽。方法:利用噬菌体展示技术,以PreS1抗原为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和筛选,ELISA鉴定阳性克隆。结果:对肽库进行3轮筛选后,通过ELISA和竞争抑制ELISA,获得了特异性... 目的:从噬菌体随机七肽库中筛选能与PreS1抗原特异性结合的多肽。方法:利用噬菌体展示技术,以PreS1抗原为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和筛选,ELISA鉴定阳性克隆。结果:对肽库进行3轮筛选后,通过ELISA和竞争抑制ELISA,获得了特异性的结合肽,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列。结论:利用噬菌体展示技术成功筛选到了PreS1抗原的结合肽,为乙肝的治疗和诊断探索新的途径。 展开更多

关键词 PRES1抗原 噬菌体展示肽库 结合肽 乙型肝炎

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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建 被引量：8

7

作者 潘卫 戚中田 +2 位作者 贺祥 陈秋莉 潘欣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期857-860,共4页

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。 展开更多

关键词 噬菌体随机展示肽库 核心蛋白 丙型肝炎 HCV

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猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定 被引量：12

8

作者 徐和敏 王琴 +1 位作者 徐璐 范学政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期71-76,共6页

本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(... 本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(SM-E2库和HCLV-E2库)。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术,采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM-E2库和HCLV-E2库进行抗原表位筛选。结果共筛选到了5条与E2蛋白高度同源的序列,在E2蛋白上的同源区域分别为TAVSPTTLR、YYEP、TTWKEYSH、GGQ(V)VK和PDGLPHY。结果表明,TAVSPTTLR、YYEP和TTWKEYSH序列与目前已知E2蛋白表位一致,说明它们是E2蛋白上的优势表位;GGQ(V)VK和PDGLPHY序列与预测表位一致,推测是E2蛋白上潜在的抗原表位。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 噬菌体展示多肽库

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运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽 被引量：4

9

作者 杨海捷 段光杰 +3 位作者 刘友生 陈锐 余德文 杨宇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期2262-2266,共5页

目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步... 目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证。挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析。结果经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽)。检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点。结论通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。 展开更多

关键词 内毒素 噬菌体展示随机肽库 多肽 生物信息学

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庚型肝炎病毒全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建与鉴定 被引量：2

10

作者 吴晓兰 潘卫 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期842-845,共4页

目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。 方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,... 目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。 方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,并用原位杂交、限制性酶切及 DNA测序等方法鉴定所建文库的随机性和完整性。 结果 :所建肽库的容量为5 .34× 10 4个菌落形成单位 ,滴度为 1.41× 10 1 4 TU/ ml。原位杂交结果证明在 HGV基因组的不同区域均有阳性菌落 ,酶切鉴定和 DNA测序结果显示插入片段的长度和片段来源区域具有随机性。结论 :所建肽库具有良好的完整性、随机性及实用性 ,为进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体随机肽展示肽库 庚型肝炎 HGV CDNA

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从噬菌体展示随机肽库中筛选豌豆凝集素的结合肽

11

作者 周翔 詹金彪 +1 位作者 毛献荣 王克夷 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第5期412-416,共5页

目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合... 目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽。方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法);③选择性地合成了3条6肽ARMWSF、RYDYSY、LRLRQL,用不同浓度的6肽对PSA、ConA与HRP的结合进行竞争抑制实验。结果:经过三轮筛选后,这些噬菌体展示肽有明显的富集,从第三轮挑选的22个克隆的插入氨基酸序列可分为三大类;点印迹结果表明,这些噬菌体展示肽能与PSA特异结合,而α-甲基-D-甘露糖苷不同程度地抑制这种结合;LRLRQL不溶于水,ARMWSF和RYDYSY对PSA和HRP的结合有抑制,而对ConA和HRP的结合没有明显抑制。结论:人工合成的2条6肽和PSA的结合部位与α-甲基-D-甘露糖苷和PSA结合的部位并非相同。 展开更多

关键词 噬菌体 肽库 肽类/分离提纯 模拟肽 外源凝集素类/遗传学 植物 噬菌体展示随机肽库 豌豆凝集素 亲和筛选 结合肽

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从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质配基 被引量：1

12

作者 俞海青 董晓燕 孙彦 《天津大学学报（自然科学与工程技术版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期193-195,共3页

为了研究噬菌体展示技术的应用,以溶菌酶为靶分子从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质的高亲和力噬菌体配体,所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达0.634.通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为基元HWWW是肽段与酶分... 为了研究噬菌体展示技术的应用,以溶菌酶为靶分子从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质的高亲和力噬菌体配体,所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达0.634.通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为基元HWWW是肽段与酶分子发生亲和的必需序列.此外,由于靶分子和高亲和性展示肽的等电点分别为11.2和6.74,因此在亲和环境中携带异种电荷,利于亲和吸附的发生,而此时低亲和性展示肽与靶分子携带同种电荷,阻碍了亲和吸附.同时,高亲和性肽段HWWPAS和与其有较高同源性的肽段HWTWWNL都有适中的疏水性,这有利于肽与靶分子表面的疏水位点相互作用从而产生亲和吸附. 展开更多

关键词 七肽噬菌体展示库 蛋白质配基 溶菌酶 配体 亲和层析

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利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮的模拟表位 被引量：13

13

作者 何庆华 刘仁荣 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期241-243,共3页

目的:利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)模拟表位。方法:以抗ZEN单克隆抗体为配体,利用噬菌体七肽库淘选ZEN的模拟表位,采用了逐轮减少抗体包被浓度,交换使用封阻液中蛋白质种类的方法,经三轮淘选后,随机挑取20个克隆测... 目的:利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)模拟表位。方法:以抗ZEN单克隆抗体为配体,利用噬菌体七肽库淘选ZEN的模拟表位,采用了逐轮减少抗体包被浓度,交换使用封阻液中蛋白质种类的方法,经三轮淘选后,随机挑取20个克隆测序并以ELISA方法及竞争ELISA实验,以确定阳性克隆。结果:获得10种序列,ELISA显示其中两种序列为阳性克隆,抑制率达90%以上,其氨基酸序列分别为DAVILLM,HHCHWWH。结论:噬菌体展示技术可淘选到ZEN的模拟表位,淘选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学检测方法。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库:玉米赤霉烯酮:模拟表位:单克隆抗体

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应用噬菌体展示技术筛选缺氧诱导因子-1α相关肽 被引量：1

14

作者 张爱霞 王斌 肖继皋 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期193-195,202,共4页

目的:应用噬菌体展示12肽库筛选低氧诱导因子-1α(HIF-1α)相关肽。方法:以抗HIF-1α单克隆抗体(HIF-1αmAb)为配基,采用亲和免疫法从随机12肽库中筛选与抗体特异结合的噬菌体。在筛选过程中,逐轮提高HIF-1α mAb的稀释度并增强洗脱强度... 目的:应用噬菌体展示12肽库筛选低氧诱导因子-1α(HIF-1α)相关肽。方法:以抗HIF-1α单克隆抗体(HIF-1αmAb)为配基,采用亲和免疫法从随机12肽库中筛选与抗体特异结合的噬菌体。在筛选过程中,逐轮提高HIF-1α mAb的稀释度并增强洗脱强度。3轮筛选后,随机挑取10个克隆测序。通过膜斑点印迹(Dot-ELISA)进行特异性结合鉴定。结果:经过3轮筛选后,特异性结合的噬菌体得到有效的富集,并且Dot-ELISA反应阳性逐轮增强。测序后发现有4个克隆的序列完全相同,其12肽氨基酸序列为GPHHYWYHLRLP。结论:噬菌体展示肽库技术可以用于筛选HIF-1相关肽,并为后续的活性鉴定打下基础。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子-1Α 噬菌体展示肽库 相关肽 亲和筛选 测序

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从噬菌体7肽库中筛选的哇巴因结合肽对血管内皮细胞的保护作用 被引量：1

15

作者 徐忠伟 徐瑞成 +1 位作者 陈小义 刘英富 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期870-874,共5页

目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略。方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选。经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和... 目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略。方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选。经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和基因测序分析。委托合成筛选获得哇巴因结合肽,采用放射配基受体结合法检测其结合活性;MTT法检测血管内皮细胞的增殖抑制率,Hoechst33342/PI双荧光染色检测细胞形态学变化;利用RT-PCR和细胞免疫荧光检测钠泵α1、β1的表达水平;荧光探针检测细胞内游离Na+浓度变化。结果:筛选获得14个阳性克隆,基因测序显示:哇巴因结合肽一致率达64.3%(9/14)。委托合成肽(Arg-Cys-Met-Thr-Ser-Arg-Ser)。放射性配基受体结合法检测显示,合成的哇巴因结合肽能够与哇巴因结合。哇巴因结合肽+哇巴因的EAhy926细胞组增殖抑制率小于哇巴因组(P<0.05);Hoechst33342/PI双荧光染色显示细胞死亡数量减少;RT-PCR和免疫细胞化学检测钠泵α1、β1亚单位转录和翻译水平,显示哇巴因结合肽能拮抗哇巴因所引起钠泵α1亚单位表达的上调、β1亚单位的下调作用;荧光探针显示哇巴因结合肽能够拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用。结论:哇巴因特异性结合肽能够阻抑哇巴因对血管内皮细胞的抑制增殖和诱导死亡作用,为研究哇巴因与钠泵的相互作用机制及进一步研究抗哇巴因的分子药物奠定基础。 展开更多

关键词 哇巴因 噬菌体展示肽库 结合肽 血管内皮细胞 细胞死亡 钠泵亚单位

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从噬菌体肽库中筛选并鉴定CD13特异性结合肽

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作者 张勇 吕毅 +8 位作者 张谞丰 于良 刘昌 张妮 王浩华 万真 谢占涛 胡良硕 展翰翔 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期827-830,833,共5页

目的筛选并鉴定可和单核细胞表面CD13分子特异性结合的特异性短肽。方法以CD13为靶分子,用噬菌体展示十二肽库进行筛选,通过亲和富集法筛选表达有特异性结合肽的噬菌体,ELISA鉴定所挑选噬菌体和CD13的亲和力,根据噬菌体基因序列推导出... 目的筛选并鉴定可和单核细胞表面CD13分子特异性结合的特异性短肽。方法以CD13为靶分子,用噬菌体展示十二肽库进行筛选,通过亲和富集法筛选表达有特异性结合肽的噬菌体,ELISA鉴定所挑选噬菌体和CD13的亲和力,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列。对筛选到的并经比对分析认为有生物学特性的多肽进行人工合成,通过免疫荧光技术检测多肽和THP-1细胞的结合情况、位置及WM15对多肽和细胞结合的阻断作用。结果经过四轮筛选,与CD13特异性结合的噬菌体得到有效富集并最终接近饱和状态。第4轮筛选后回收率与第1轮相比,富集了30倍。挑取的20个噬菌体单克隆中,经ELISA鉴定有10个和CD13的亲和力较高,有阳性意义。经比对得到2个有生物学功能的多肽序列P9、P7,它们分别和人巨细胞病毒(HCMV)UL38、UL105基因编码的相应氨基酸序列有83%、100%相似性。免疫荧光检测可见多肽P9、P7和THP-1细胞的结合位于细胞膜表面,WM15可以不同程度的阻断多肽和细胞的结合。结论成功筛选出了2条可和CD13特异性结合的短肽P9、P7,而且P9、P7可以和THP-1细胞膜表面的CD13分子特异性结合。 展开更多

关键词 CD13 人巨细胞病毒 噬菌体展示肽库

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桃拉综合征病毒CP2蛋白的克隆表达及其结合肽的噬菌体肽库筛选 被引量：1

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作者 黄新新 陆承平 +1 位作者 孔繁德 蔡强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1155-1160,共6页

目的：克隆表达出桃拉综合征病毒（TSV）主要衣壳蛋白CP2蛋白,并通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CP2蛋白结合的相关多肽,以探讨CP2蛋白与配体作用的特异位点。方法：根据重组质粒pMD-CP2的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,扩增TSV ... 目的：克隆表达出桃拉综合征病毒（TSV）主要衣壳蛋白CP2蛋白,并通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CP2蛋白结合的相关多肽,以探讨CP2蛋白与配体作用的特异位点。方法：根据重组质粒pMD-CP2的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,扩增TSV CP2基因高变区376~1 371 bp,扩增片段插入pET-32构建成原核表达载体pET-CP2。该重组载体在IPTG诱导下进行可溶性表达,SDS-PAGE电泳检测表达的CP2蛋白。以纯化的CP2蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示12肽库进行亲和淘选。结果：原核表达出56 kD大小的CP2蛋白,对噬菌体12肽库4轮＂吸附-洗脱-扩增＂淘洗后,所得的噬菌体回收率逐步提高,由6.4×10-5上升到2.8×10-2,显示淘选过程对随机肽库有很好的富集效果。随机挑选第4轮淘筛后的36个单克隆噬菌体,ELISA鉴定有24个单克隆（66.6%）为强阳性。将这24个阳性克隆扩增、测序,推导随机多肽的氨基酸序列。分析发现,有7个克隆（克隆号2、6、7、9、18、20、33）完全一致,序列为HTSFCSTHLCLI,其它的几个克隆如克隆3及28序列为HCSNLFCSLDLP;克隆5为HCSHTLCALHVM;克隆26为HCNSWLCPLITD也与该7个克隆有相似的序列,经比对核心序列为HCS及LCL。结论：首次用重组的TSV CP2蛋白从噬菌体随机12肽库中筛选到特异结合的肽序列,其共有结构特征为明确CP2与结合蛋白的相互作用位点提供支持。 展开更多

关键词 桃拉综合征病毒(TSV) CP2蛋白 克隆表达 噬菌体展示肽库 配体

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利用十二肽库筛选心肌型脂肪酸结合蛋白特异性的亲和配体

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作者 张淑华 王立成 +2 位作者 王丽萍 于源华 李惟 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期140-143,共4页

采用噬菌体表面展示十二肽库对心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)特异性亲和配体进行筛选,经3轮筛选及序列比对后得到一个酶联免疫测定分析(ELISA)检测阳性特征序列:W-P-N-H-H-M-L-H-K-R-W-P.对此序列进行肽合成,并标记上荧光标记物芘,经高... 采用噬菌体表面展示十二肽库对心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)特异性亲和配体进行筛选,经3轮筛选及序列比对后得到一个酶联免疫测定分析(ELISA)检测阳性特征序列:W-P-N-H-H-M-L-H-K-R-W-P.对此序列进行肽合成,并标记上荧光标记物芘,经高效液相纯化、冻干及质谱确定其分子量后制成荧光肽探针检测急性心肌梗塞病人血样,结果均呈阳性.结果表明,所获得的肽探针具有较好的临床应用效果. 展开更多

关键词 心肌型脂肪酸结合蛋白 噬菌体表面展示十二肽库 亲和配体 酶联免疫测定分析

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Cry2Aa毒素结合十二肽的筛选与鉴定 被引量：2

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作者 武爱华 张霄 +5 位作者 刘媛 赵扬 赵岩岩 张存政 谢雅晶 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期929-941,共13页

利用Cry-2Aa毒素蛋白对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮筛选，并从第4轮筛选产物中随机挑选20个单克隆，进行单克隆ELISA、PCR扩增、DNA电泳及测序，鉴定这些克隆与Cry2Aa毒素的结合活性。结果显示，这20个克隆均能与c巧也Aa毒素发生特... 利用Cry-2Aa毒素蛋白对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮筛选，并从第4轮筛选产物中随机挑选20个单克隆，进行单克隆ELISA、PCR扩增、DNA电泳及测序，鉴定这些克隆与Cry2Aa毒素的结合活性。结果显示，这20个克隆均能与c巧也Aa毒素发生特异性结合，并推导出8条不同的序列。挑取阳性值最高的克隆GT（氨基酸序列为GTPWHHHRHLIV）建立了基于十二肽的Cry-2Aa毒蛋白的间接竞争ELISA检测方法。该方法的抑制中浓度（IC50）为1｜1390μg／ml，最低检测限IC10为O．0211μg／ml，线性检测范围为0．0478～22.691Oμg／ml（Y=23．09lgx＋48．692，R^2=0．9963）。噬菌体展示肽库筛选方法为快速、准确地检测Cry2Aa毒蛋白提供了新的途径。 展开更多

关键词 Cry2Aa毒素 噬菌体展示肽库:ELISA

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基于肺癌细胞特异性结合肽检测肺癌的免疫酶法 被引量：1

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作者 张云 王华素 +2 位作者 夏觅真 王怡 薛绍礼 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第9期1329-1333,共5页

以肺腺癌A549细胞为筛选靶标,人胚肺二倍体helf细胞作反相吸附细胞,从噬菌体随机十二肽库中筛选出与肺癌细胞特异性结合的噬菌体多肽,用其替代一抗,酶标抗噬菌体抗体作二抗,建立检测肺癌细胞的免疫酶染色法。对噬菌体随机十二肽库进行4... 以肺腺癌A549细胞为筛选靶标,人胚肺二倍体helf细胞作反相吸附细胞,从噬菌体随机十二肽库中筛选出与肺癌细胞特异性结合的噬菌体多肽,用其替代一抗,酶标抗噬菌体抗体作二抗,建立检测肺癌细胞的免疫酶染色法。对噬菌体随机十二肽库进行4轮筛选和ELISA鉴定后,用亲和力和特异性最好的5号噬菌体克隆建立了检测肺癌细胞的免疫酶法。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库 A549细胞 肺癌 免疫酶法

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