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重组慢病毒载体pLKO-1-EGFP-puro的构建
被引量：
2
1
作者
宋波
韩志强
+4 位作者
吴少璞
刘景伟
蔡晓辉
杨靖
许予明
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2010年第6期926-928,共3页
目的:构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标记及嘌呤霉素(puro)抗性的重组慢病毒载体。方法:改建慢病毒载体质粒pLKO-1-puro的多克隆位点(MCS),以质粒pEGFP-C3为模板扩增出CMV-EGFP并与pLKO-1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-pu...
目的:构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标记及嘌呤霉素(puro)抗性的重组慢病毒载体。方法:改建慢病毒载体质粒pLKO-1-puro的多克隆位点(MCS),以质粒pEGFP-C3为模板扩增出CMV-EGFP并与pLKO-1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro,后者与包装质粒Δ8.2和包膜蛋白质粒VSV-G在293T细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒,感染非洲绿猴肾细胞Vero细胞,观察GFP的表达。结果:成功改建了慢病毒载体质粒pLKO-1-puro并插入了CMV-EGFP,形成了新型慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro。3质粒共转染293T细胞产生的重组慢病毒颗粒感染Vero细胞后高表达绿色荧光。结论:成功构建了高效的带GFP报告基因及嘌呤霉素抗性的慢病毒载体。
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关键词
神经系统遗传病
慢病毒载体
绿色荧光蛋白
嘌呤霉素抗性
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职称材料
基于Cre-LoxP系统的新型慢病毒表达载体pLOX-CMV-E/P的构建与鉴定
2
作者
高文勇
夏景波
+4 位作者
陈卓莹
吴彩红
王健欢
龙颖妍
齐绪峰
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期160-167,共8页
目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ire...
目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ires TK慢病毒载体为模板,用Spe I与Kpn I进行双酶切,去除TERT-ires TK片段,然后与人工设计合成的多克隆位点片段连接,构建p LOX-MCS表达载体.同时,以p B513载体为模板扩增EF1α-EGFP-Puro表达框(带有Bam HI及Kpn I酶切位点),然后与经过Bam HI及Kpn I双酶切的p LOX-MCS载体连接,进而构建p LOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro(简称p LOX-CMV-E/P)载体.将p LOX-CMV-E/P载体与慢病毒包装载体p CMVR8.74及p MD2.G共转染293T细胞,包装病毒进行报告基因的功能分析.结果:菌落聚合酶链式反应(PCR)、酶切鉴定及测序结果均与预期结果一致,绿色荧光蛋白及抗药性基因均有较好的活性与功能.结论:成功构建了p LOX-MCS及p LOX-CMV-E/P慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒表达系统.
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关键词
慢病毒表达载体
CRE-LOXP
系统
绿色荧光蛋白基因
嘌呤霉素抗性
基因
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职称材料
题名
重组慢病毒载体pLKO-1-EGFP-puro的构建
被引量：
2
1
作者
宋波
韩志强
吴少璞
刘景伟
蔡晓辉
杨靖
许予明
机构
郑州大学第一附属医院神经内科
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2010年第6期926-928,共3页
基金
河南省教育厅自然科学基础研究计划基金资助项目2007310016
文摘
目的:构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标记及嘌呤霉素(puro)抗性的重组慢病毒载体。方法:改建慢病毒载体质粒pLKO-1-puro的多克隆位点(MCS),以质粒pEGFP-C3为模板扩增出CMV-EGFP并与pLKO-1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro,后者与包装质粒Δ8.2和包膜蛋白质粒VSV-G在293T细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒,感染非洲绿猴肾细胞Vero细胞,观察GFP的表达。结果:成功改建了慢病毒载体质粒pLKO-1-puro并插入了CMV-EGFP,形成了新型慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro。3质粒共转染293T细胞产生的重组慢病毒颗粒感染Vero细胞后高表达绿色荧光。结论:成功构建了高效的带GFP报告基因及嘌呤霉素抗性的慢病毒载体。
关键词
神经系统遗传病
慢病毒载体
绿色荧光蛋白
嘌呤霉素抗性
Keywords
neurological genetic disease
lentiviral vector
green fluorescent protein
puromycin resistance
分类号
R741.05 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
基于Cre-LoxP系统的新型慢病毒表达载体pLOX-CMV-E/P的构建与鉴定
2
作者
高文勇
夏景波
陈卓莹
吴彩红
王健欢
龙颖妍
齐绪峰
机构
武汉市汉口医院神经内科
暨南大学再生医学教育部重点实验室
暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系
出处
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期160-167,共8页
基金
国家自然科学基金项目(81270183
81100079
+4 种基金
81211140351)
广东省自然科学基金项目(S2013010013598)
教育部留学回国人员科研启动基金项目(2013-693)
中央高校基本科研业务费专项资金项目(11614601)
广州市珠江科技新星专项(2014J2200002)
文摘
目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ires TK慢病毒载体为模板,用Spe I与Kpn I进行双酶切,去除TERT-ires TK片段,然后与人工设计合成的多克隆位点片段连接,构建p LOX-MCS表达载体.同时,以p B513载体为模板扩增EF1α-EGFP-Puro表达框(带有Bam HI及Kpn I酶切位点),然后与经过Bam HI及Kpn I双酶切的p LOX-MCS载体连接,进而构建p LOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro(简称p LOX-CMV-E/P)载体.将p LOX-CMV-E/P载体与慢病毒包装载体p CMVR8.74及p MD2.G共转染293T细胞,包装病毒进行报告基因的功能分析.结果:菌落聚合酶链式反应(PCR)、酶切鉴定及测序结果均与预期结果一致,绿色荧光蛋白及抗药性基因均有较好的活性与功能.结论:成功构建了p LOX-MCS及p LOX-CMV-E/P慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒表达系统.
关键词
慢病毒表达载体
CRE-LOXP
系统
绿色荧光蛋白基因
嘌呤霉素抗性
基因
Keywords
Lentiviral expression vector
Cre-LoxP system
EGFP
Puromycin resistance gene
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组慢病毒载体pLKO-1-EGFP-puro的构建
宋波
韩志强
吴少璞
刘景伟
蔡晓辉
杨靖
许予明
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于Cre-LoxP系统的新型慢病毒表达载体pLOX-CMV-E/P的构建与鉴定
高文勇
夏景波
陈卓莹
吴彩红
王健欢
龙颖妍
齐绪峰
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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