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嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
1
作者
油红捷
毋晓涛
+1 位作者
潘颖
王泽生
《首都医科大学学报》
CAS
2006年第2期206-209,共4页
目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1...
目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。
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关键词
RT-PCR
嗜铬颗粒蛋白b
基因表达
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职称材料
嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究
2
作者
油红捷
王泽生
《首都医科大学学报》
CAS
2005年第6期699-702,共4页
目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列...
目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。
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关键词
嗜铬颗粒蛋白b
热休克同源
蛋白
70
磷酸化修饰
细胞核转位
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职称材料
题名
嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
1
作者
油红捷
毋晓涛
潘颖
王泽生
机构
首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系
出处
《首都医科大学学报》
CAS
2006年第2期206-209,共4页
基金
北京市教委(KM200410025006)
教育部重点项目(204005)资助项目
文摘
目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。
关键词
RT-PCR
嗜铬颗粒蛋白b
基因表达
Keywords
RT-PCR
chromogranin
b
gene expression
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究
2
作者
油红捷
王泽生
机构
首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系
出处
《首都医科大学学报》
CAS
2005年第6期699-702,共4页
基金
教育部重点项目(204005)
北京市教委面上项目(KM20041025006)资助课题
文摘
目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。
关键词
嗜铬颗粒蛋白b
热休克同源
蛋白
70
磷酸化修饰
细胞核转位
Keywords
chromogranin
b
heat shock cognate protein 70
phosphorylation
nuclear translocation
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
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1
嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
油红捷
毋晓涛
潘颖
王泽生
《首都医科大学学报》
CAS
2006
0
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职称材料
2
嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究
油红捷
王泽生
《首都医科大学学报》
CAS
2005
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职称材料
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