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嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
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作者 油红捷 毋晓涛 +1 位作者 潘颖 王泽生 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期206-209,共4页
目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1... 目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。 展开更多
关键词 RT-PCR 颗粒蛋白B 基因表达
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嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究
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作者 油红捷 王泽生 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第6期699-702,共4页
目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列... 目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。 展开更多
关键词 颗粒蛋白B 热休克同源蛋白70 磷酸化修饰 细胞核转位
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一种抑制蛋白激酶CK_2活性的新多肽的分离和鉴别
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作者 王泽生 杨晓梅 +2 位作者 油红捷 杜毅峰 Etienne J.Nouwen 《首都医科大学学报》 CAS 2004年第4期450-453,共4页
从猪肾上腺髓质嗜铬细胞分泌颗粒裂解物中纯化出 3种新多肽 ,经N 末端降解分析和质谱测定 ,它们分别位于猪嗜铬颗粒蛋白A(CgA) 3 0 8— 3 2 4、3 0 8— 3 2 8及 3 0 8— 3 2 9肽段 ,具有相同N 端区 ,而C 端长度不同。合成的CgA 3 0 8— ... 从猪肾上腺髓质嗜铬细胞分泌颗粒裂解物中纯化出 3种新多肽 ,经N 末端降解分析和质谱测定 ,它们分别位于猪嗜铬颗粒蛋白A(CgA) 3 0 8— 3 2 4、3 0 8— 3 2 8及 3 0 8— 3 2 9肽段 ,具有相同N 端区 ,而C 端长度不同。合成的CgA 3 0 8— 3 2 4肽段 ,即GN 1 7在浓度低于 6μmol/L时即可竞争性抑制CK2 活性 ,IC50 为 5 0 μmol/L。 展开更多
关键词 嗜铬颗粒蛋白a 活性肽 质谱 蛋白激酶CK2
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血管抑制因子的心血管效应和病理生理意义 被引量:1
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作者 崔晓敬 孟磊 丁文惠 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期429-432,共4页
血管抑制因子是由嗜铬颗粒蛋白A的N端氨基酸序列经蛋白酶水解作用衍生而来的具有多种生物学活性的多肽。血管抑制因子可参与多个生理、病理过程,包括抑制血管收缩,拮抗肾上腺素能的心脏兴奋作用,保护心肌缺血/再灌注损伤,调节内皮屏障功... 血管抑制因子是由嗜铬颗粒蛋白A的N端氨基酸序列经蛋白酶水解作用衍生而来的具有多种生物学活性的多肽。血管抑制因子可参与多个生理、病理过程,包括抑制血管收缩,拮抗肾上腺素能的心脏兴奋作用,保护心肌缺血/再灌注损伤,调节内皮屏障功能,构成天然免疫防御屏障及调节血管新生等。血管抑制因子在心血管系统中的调节作用备受关注,但仍有诸多的未知,研究工作尚需继续。 展开更多
关键词 血管抑制因子 嗜铬颗粒蛋白a 心血管效应
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NGF和CgA对RWPE-1细胞内钙离子浓度变化的影响及其在慢性前列腺炎中的作用 被引量:3
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作者 丁华洋 樊松 +4 位作者 张力 郝宗耀 周骏 张翼飞 梁朝朝 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期173-180,共8页
目的探讨神经生长因子(NGF)和嗜铬颗粒蛋白A(CgA)处理后前列腺上皮细胞系RWPE-1细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]_i)的差异及NGF和CgA在慢性前列腺炎(CP)发病中的作用。方法不同浓度的NGF和CgA(50、200 ng/ml)刺激RWPE-1细胞,用激光共聚焦显... 目的探讨神经生长因子(NGF)和嗜铬颗粒蛋白A(CgA)处理后前列腺上皮细胞系RWPE-1细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]_i)的差异及NGF和CgA在慢性前列腺炎(CP)发病中的作用。方法不同浓度的NGF和CgA(50、200 ng/ml)刺激RWPE-1细胞,用激光共聚焦显微镜观察不同浓度的NGF和CgA刺激后细胞内[Ca^(2+)]_i变化,加入TRPV1受体拮抗剂后继续观察细胞内[Ca^(2+)]_i变化。然后,将正常细胞外液换成D-PBS,再加入NGF和CgA观察细胞内[Ca^(2+)]_i变化。结果 50 ng/ml NGF和CgA刺激细胞后,细胞内[Ca^(2+)]_i未见明显变化。200 ng/ml NGF和CgA刺激细胞后,细胞内[Ca^(2+)]_i明显增加,加入TRPV1受体拮抗剂后,细胞内[Ca^(2+)]_i未见明显变化。将正常细胞外液换成D-PBS,用NGF和CgA刺激后,细胞内[Ca^(2+)]_i未见明显改变。结论CP的发生可能是通过分泌和释放NGF和CgA,引起前列腺上皮细胞膜TRPV1通道开放,促使细胞内钙离子浓度增加,导致前列腺上皮分泌功能下降所致。 展开更多
关键词 前列腺炎 神经生长因子 嗜铬颗粒蛋白a RWPE-1细胞 钙离子
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