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题名新型嗜热耐碱脂肪酶的纯化表征及应用
被引量：3
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作者
张昕怡
许蕊
王钰棋
张瑜
王飞
李迅
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机构
南京林业大学化学工程学院
江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室
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出处
《化工学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期5246-5255,共10页
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基金
国家重点研发计划(2019YFB1504002)。
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文摘
将来源于解脂嗜热互营杆菌(Thermosyntrophalipolytica)的脂肪酶(TlLipA)基因tll1导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过热处理和镍柱亲和层析获得纯酶,并对其酶学性质进行研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示TlLipA分子量为53×103,其最适反应温度为65℃,最适反应pH为8.0。在55~65℃范围内酶活较高且比较稳定;在pH7.0~11.0于室温保存1h后,残留相对酶活仍达80%以上。1mmol/L金属离子Zn2+、Fe3+和试剂SDS,0.05%(质量分数)Tween80,对酶活力具有强烈的抑制作用,残留相对酶活皆低于15%;1mmol/LMg2+、Mn2+对酶活力表现出轻微的激活作用。由底物专一性实验可得,该酶对辛酸对硝基苯酯(C8)和癸酸对硝基苯酯(C10)偏好明显。以棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)为底物,该酶动力学参数Km值为0.23mmol/L,Vmax为33.50mmol/(L·min),kcat为22.83S-1。以重组脂肪酶为催化剂在无溶剂体系中制备生物柴油,含水率20%,酶加量200U/g油,醇油比为4∶1的条件下,在55℃催化大豆油反应48h,收率可达91.75%。
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关键词
生物催化
生物柴油
生物燃料
脂肪酶
嗜热耐碱酶
酶学性质
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Keywords
biocatalysis
biodiesel
biofuel
lipase
thermo-alkaline enzyme
enzymatic properties
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分类号
Q81
[生物学—生物工程]
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