用微束激光穿刺技术将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入马铃薯的研究 被引量：11

1

作者 傅道林 王兰岚 +1 位作者 张海燕 陈正华 《光子学报》 EI CAS CSCD 2000年第11期970-974,共5页

以马铃薯 (Solanum tuberosum L.)品种“津引 8号”微薯切片作为外植体 ,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白 (PAP) c DNA的导入、整合与表达 .实验首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生苗 ,庆大霉素筛选浓度为 80 mg/ L ,共得到 65... 以马铃薯 (Solanum tuberosum L.)品种“津引 8号”微薯切片作为外植体 ,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白 (PAP) c DNA的导入、整合与表达 .实验首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生苗 ,庆大霉素筛选浓度为 80 mg/ L ,共得到 65株庆大霉素抗性苗 ,全部移栽成活 .PCR扩增和 PCR-Southern杂交分析表明 ,PAP c DNA已经稳定整合到马铃薯基因组 .攻毒实验发现 ,多数转基因植株生长健康 ,对供试病毒 PVX具有高度抗性 . 展开更多

关键词 马铃薯 微束激光穿刺技术 商陆抗病毒蛋白基因

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商陆抗病毒蛋白体外抑制HBV的实验研究 被引量：5

2

作者 潘延凤 贺永文 +1 位作者 王萍 郭劲松 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期80-82,共3页

探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、... 探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、HBVDNA水平的变化。PAP -S处理HepG2 2 15后 72h发现 ,PAP -S在 >1μg/ml时有明显的抗HBV效应 ,在所试验浓度范围 (1- 10 ) μg/ml内 ,倒置显微镜下未发现明显的细胞毒性 ,PAP -S为 5 0 μg/ml时 ,发现部分细胞脱壁。PAP -S对HBsAg、HBeAg、HBVDNA呈剂量时间依赖性。PAP 展开更多

关键词 商陆抗病毒蛋白 体外抑制 HBV 实验 乙型肝炎病毒 核糖体失活蛋白

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商陆抗病毒蛋白基因导入玉米幼胚愈伤组织研究初报 被引量：5

3

作者 孙晓丽 郑霞 +4 位作者 陈定虎 季良越 胡彦民 汤继华 周广和 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期6-9,共4页

以87 1自交系,87 1×综3,郑22×87 1,郑22×HI(A×B)4个基因型的玉米幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将商陆抗病毒蛋白(PAP)基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式导入玉米胚性愈伤组织,然后在含有25～40mg·... 以87 1自交系,87 1×综3,郑22×87 1,郑22×HI(A×B)4个基因型的玉米幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将商陆抗病毒蛋白(PAP)基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式导入玉米胚性愈伤组织,然后在含有25～40mg·L-1G418培养基上筛选愈伤组织并分化得到再生植株.PCR和Southern杂交结果表明,PAP基因已经转入由抗性愈伤组织再生出的玉米植株中. 展开更多

关键词 商陆抗病毒蛋白 基因导入 玉米 幼胚 愈伤组织 基因枪法 PAP基因 筛选基因

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商陆抗病毒蛋白在植物抗病上的应用 被引量：1

4

作者 陈国菊 雷建军 曹必好 《长江蔬菜》 2009年第10X期5-8,共4页

商陆抗病毒蛋白是指商陆属植物中的核糖体失活蛋白。阐述了商陆抗病毒蛋白的研究历史、意义、种类和理化性质,对病原菌的抗性、抗病机理及其在植物抗病上的应用情况等,并对它的应用前景作了展望。

关键词 商陆抗病毒蛋白 抗病 基因分离 转基因

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核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究

5

作者 徐翠莲 胡文明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第35期11416-11417,11419,共3页

综述了几种常见核糖体失活蛋白在植物抗病毒基因工程中的研究,并对核糖体失活蛋白的发展前景进行了展望。

关键词 核糖体失活蛋白 商陆抗病毒蛋白 天花粉蛋白 玉米核糖体失活蛋白 抗病毒研究

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转基因烟草的pap基因表达及其抗病毒生理的初步研究 被引量：1

6

作者 万多荣 殷娴 +3 位作者 江一希 陈晓博 张海燕 肖尊安 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期411-416,共6页

农杆菌介导将美洲商陆抗病毒蛋白基因(pap)导入烟草云烟87品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.利用RT-半定量法分析了Y1、Y2和Y3转基因株系的pap表达,以及攻毒前后叶片多酚氧化酶(PPO)、超氧物歧化酶(SOD)活性和可溶性... 农杆菌介导将美洲商陆抗病毒蛋白基因(pap)导入烟草云烟87品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.利用RT-半定量法分析了Y1、Y2和Y3转基因株系的pap表达,以及攻毒前后叶片多酚氧化酶(PPO)、超氧物歧化酶(SOD)活性和可溶性蛋白质含量.结果表明:pap在Y1和Y2植株中表达,Y3植株中未检测到pap表达;攻毒后,Y1和Y2叶片中可溶性蛋白质含量、PPO和SOD活性较高,而Y3叶片中可溶性蛋白质含量、PPO和SOD活性在三者中最低,与对照相似.讨论了转基因植株中pap表达与其生理变化和病毒抗性的关系. 展开更多

关键词 商陆抗病毒蛋白 烟草 多酚氧化酶 超氧物歧化酶 可溶性蛋白质

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GNA和α-PAP双抗表达载体的构建及对烟草的遗传转化 被引量：10

7

作者 柴红梅 张绍松 +2 位作者 万萌 赵永昌 黄兴奇 《西南农业学报》 CSCD 2002年第4期35-37,共3页

将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR... 将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,烟草基因组中含有这两个抗性基因。 展开更多

关键词 GNA α-PAP 双抗表达载体 烟草 遗传转化 雪花莲凝集素 商陆抗病毒蛋白 表达载体构建

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从中国商陆分离的PacPAP基因转化番茄对TMV的抗性研究 被引量：3

8

作者 陈国菊 赵爽 +2 位作者 雷建军 曹必好 曾国平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期422-425,共4页

以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因。采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50 d后统计发病情况。结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714 bp,与美洲... 以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因。采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50 d后统计发病情况。结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714 bp,与美洲商陆抗病毒蛋白基因的同源性为99.7%,GenBank登陆号为AY603353;得到PacPAP整合入番茄基因组中的阳性植株11株,检测的4个转基因番茄株系均达到抗病级别,对照为感病。 展开更多

关键词 中国商陆 商陆抗病毒蛋白基因 遗传转化 番茄

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PAP基因cDNA克隆及烟草转基因研究 被引量：6

9

作者 王燕萍 曹俊剑 +1 位作者 刘海礁 崔红 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期130-132,141,共4页

以美洲商陆(Phytolacca americanaL.)为材料,利用RT-PCR方法克隆商陆抗病毒蛋白(PAP)的cDNA,并构建双元植物表达载体pBinARpap.用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg.L-1Kan的MS+0.1 mg.L-1IAA+1.5... 以美洲商陆(Phytolacca americanaL.)为材料,利用RT-PCR方法克隆商陆抗病毒蛋白(PAP)的cDNA,并构建双元植物表达载体pBinARpap.用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg.L-1Kan的MS+0.1 mg.L-1IAA+1.5 mg.L-1BA的培养基上诱导植株分化,再生芽在附加30 mg.L-1Kan的MS培养基上生根,实现再生植株.Kan阳性植株经PCR-Sourthern检测筛选,得到PCR阳性植株,证明异源PAP基因在烟草基因组中的整合;经过RT-PCR检测,证明PAP基因在RNA转录水平上有表达;攻毒试验表明,转基因烟草植株对供试病毒TMV具有明显抗性. 展开更多

关键词 烟草 商陆抗病毒蛋白(PAP) CDNA克隆 基因转导 烟草花叶病

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商陆愈伤组织的筛选及其对TMV抗性的研究 被引量：2

10

作者 刘海礁 万瑞晨 +2 位作者 郭小玲 崔红 王燕萍 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期63-65,69,共4页

商陆抗病毒蛋白(PAP)是一种广谱的植物抗病毒蛋白.本试验以商陆叶片为外植体,在附加0.5 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和0.5 mg/L 6-BA(6-苄氨基嘌呤)的MS培养基上诱导愈伤组织,通过继代筛选培养获得3个稳定的愈伤组织株系:黄色系(Y-型... 商陆抗病毒蛋白(PAP)是一种广谱的植物抗病毒蛋白.本试验以商陆叶片为外植体,在附加0.5 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和0.5 mg/L 6-BA(6-苄氨基嘌呤)的MS培养基上诱导愈伤组织,通过继代筛选培养获得3个稳定的愈伤组织株系:黄色系(Y-型)、粉色系(P-型)、红色系(R-型),不同株系具有不同的生长特性.Northern杂交结果证明不同株系中PAP基因转录水平有明显差异.离体烟草叶片摩擦接种实验表明,不同株系的蛋白提取液对TMV均具有显著抗性,其中黄色株系具有较明显的优势.商陆离体愈伤组织的研究为生产安全、高效的植物源抗病毒制剂提供了一定基础. 展开更多

关键词 美洲商陆 愈伤组织 商陆抗病毒蛋白 TMV

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光对商陆发状根生长和PAP基因表达的影响

11

作者 张华 冀浩 +3 位作者 翁梦苓 梁志敏 万瑞晨 崔红 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1588-1592,共5页

利用发根农杆菌菌株Ar1334与美洲商陆（Phytolacca americana）叶片外植体共培养转化体系,共获得58个发状根无性系（SL-1-58）.以发根农杆菌Ri质粒TL-DNA上的rol C基因设计特异引物,对发状根进行PCR检测,得到了预期的560 bp目的片段,表... 利用发根农杆菌菌株Ar1334与美洲商陆（Phytolacca americana）叶片外植体共培养转化体系,共获得58个发状根无性系（SL-1-58）.以发根农杆菌Ri质粒TL-DNA上的rol C基因设计特异引物,对发状根进行PCR检测,得到了预期的560 bp目的片段,表明Ri质粒T-DNA整合到发状根基因组中.将筛选出的株系SL-7接种在MS培养基上分别置于光、暗条件下进行培养.结果发现：SL-7在暗培养条件下呈乳白色,具有多分枝、多根毛、无向地性等典型的发状根特性;在光培养条件下,发根呈粉红色,少分支且生长缓慢;以商陆抗病毒蛋白（pokeweed antiviral protein,PAP）cDNA片段为探针,分别对光、暗条件下的发状根进行Northern blot检测,发现光对PAP基因的转录具有一定抑制作用;将发状根粗蛋白提取液与TMV病毒液混合后,摩擦接种于心叶烟（Nicotiana glutinosa）离体叶片,发现暗培养的发状根粗蛋白提取液对TMV抗性明显提高.表明商陆发状根的生长及PAP基因的表达都受到光的负向调控.该结果为商陆发状根的规模化培养和PAP蛋白的离体合成优化体系的建立奠定了基础. 展开更多

关键词 美洲商陆 发状根 商陆抗病毒蛋白 离体培养

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激光农业应用

12

《中国光学》 EI CAS 2001年第5期27-27,共1页

S123 2001053178用微束激光穿刺技术将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入马铃薯的研究=Introduction of PAP cDNA into potato by laser microbeam puncture techniques[刊,中]/傅道林,王兰岚,张海燕,陈正华(中科院遗传研究所705组.北京(1001... S123 2001053178用微束激光穿刺技术将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入马铃薯的研究=Introduction of PAP cDNA into potato by laser microbeam puncture techniques[刊,中]/傅道林,王兰岚,张海燕,陈正华(中科院遗传研究所705组.北京(100101))//光子学报.—2000,29(11).—970-974以马铃薯(Solamun tuberosum L.)品种"津引8号"微薯切片作为外植体,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA的导入、整合与表达。图7参19(李士范) 展开更多

关键词 微束激光穿刺技术 商陆抗病毒蛋白 马铃薯 遗传研究 农业应用 整合与表达 光子学 外植体 中科院 微薯

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