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基于巨噬细胞极化探究唾液酸转移酶Ⅰ(ST6GalⅠ)对肾透明细胞癌生长及免疫功能的影响
1
作者
李前进
王玉杰
+2 位作者
刘强
马双钰
拜合提亚·阿扎提
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第16期1927-1934,共8页
目的:研究α-2,6-唾液酸转移酶Ⅰ(ST6GalⅠ)对巨噬细胞极化的影响并探究其对肾透明细胞癌的作用。方法:免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR检测肾透明细胞癌中ST6GalⅠ表达,利用脂质体法转染siRNA-ST6GalⅠ至THP-1细胞,50 ng/ml PMA与20...
目的:研究α-2,6-唾液酸转移酶Ⅰ(ST6GalⅠ)对巨噬细胞极化的影响并探究其对肾透明细胞癌的作用。方法:免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR检测肾透明细胞癌中ST6GalⅠ表达,利用脂质体法转染siRNA-ST6GalⅠ至THP-1细胞,50 ng/ml PMA与20 ng/ml IL-4诱导转染后的THP-1细胞,实时荧光定量PCR和流式细胞术检测巨噬细胞极化情况。建立巨噬细胞与786-O细胞共培养体系,MTT法和流式细胞术检测细胞的存活与凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移变化,ELISA检测细胞上清液中炎症相关因子含量,Western blot检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-1(TIM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:肾透明细胞癌组织中ST6GalⅠ表达较癌旁组织明显升高(P<0.01);与对照组比较,siRNA-ST6GalⅠ组THP-1细胞中ST6GalⅠmRAN和蛋白相对表达量均显著下降(P<0.05);与对照组比较,THP-1细胞经诱导后Arg-1 mRNA表达升高,iNOS mRNA表达下降,CD206表达升高(P<0.05),而转染siRNA-ST6GalⅠ后进行诱导处理的THP-1细胞Arg-1 mRNA表达下降,iNOS mRNA表达升高,CD206表达下降(P<0.05);786-O细胞与诱导的THP-1细胞共培养后,细胞存活率升高,迁移能力增强,凋亡率下降,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量下降,IL-10、TGF-β1含量升高,TIM-1蛋白表达下降,VEGF蛋白表达升高(P<0.05);而786-O细胞与下调ST6GalⅠ且诱导的THP-1细胞共培养后,细胞存活率下降,迁移能力降低,凋亡率增加,同时,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高,IL-10、TGF-β1含量下降,TIM-1蛋白表达升高而VEGF蛋白表达下降(P<0.05)。结论:下调ST6GalⅠ表达可抑制THP-1细胞向M2型巨噬细胞极化,进而抑制肾透明细胞癌细胞的生长与迁移,并调控炎症因子与免疫相关蛋白TIM-1、VEGF的表达。
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关键词
肾透明细胞癌
唾液转移酶ⅰ
巨噬细胞
免疫功能
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职称材料
鸡α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ基因的克隆和真核表达载体的构建
被引量：
3
2
作者
刘媛媛
王俊亚
+6 位作者
张晓娟
陈礼朋
岳旭龙
高文明
李双亮
崔保安
李新生
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第1期21-24,共4页
试验利用Trizol法从鸡肠道组织提取总RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增出α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(α-2,3-sialyltransferaseⅠ,ST3GALⅠ)基因的cDNA片段,并将其克隆至pGEM-T easy载体,获得阳性重组质粒,再以阳性重组质粒为模板亚克隆ST3...
试验利用Trizol法从鸡肠道组织提取总RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增出α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(α-2,3-sialyltransferaseⅠ,ST3GALⅠ)基因的cDNA片段,并将其克隆至pGEM-T easy载体,获得阳性重组质粒,再以阳性重组质粒为模板亚克隆ST3GALⅠ基因的完整ORF区,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,进行PCR、限制性酶切和DNA序列分析鉴定。结果表明,ST3GALⅠ基因全长1029bp,测序结果同GenBank数据库收录的序列一致,无任何密码子缺失与突变,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上的目的基因大小方向均正确。本研究成功构建了pcDNA3.1(+)-ST3GALⅠ真核表达载体,为下一步的真核表达及对ST3GALⅠ基因的功能研究奠定了基础。
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关键词
禽流感病毒
受体
α-2
3-
唾液
酸
转移
酶
ⅰ
真核表达载体
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职称材料
题名
基于巨噬细胞极化探究唾液酸转移酶Ⅰ(ST6GalⅠ)对肾透明细胞癌生长及免疫功能的影响
1
作者
李前进
王玉杰
刘强
马双钰
拜合提亚·阿扎提
机构
新疆医科大学第一附属医院泌尿外科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第16期1927-1934,共8页
基金
吴阶平医学基金会临床科研专项资助基金(320.6750.19094-43)资助。
文摘
目的:研究α-2,6-唾液酸转移酶Ⅰ(ST6GalⅠ)对巨噬细胞极化的影响并探究其对肾透明细胞癌的作用。方法:免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR检测肾透明细胞癌中ST6GalⅠ表达,利用脂质体法转染siRNA-ST6GalⅠ至THP-1细胞,50 ng/ml PMA与20 ng/ml IL-4诱导转染后的THP-1细胞,实时荧光定量PCR和流式细胞术检测巨噬细胞极化情况。建立巨噬细胞与786-O细胞共培养体系,MTT法和流式细胞术检测细胞的存活与凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移变化,ELISA检测细胞上清液中炎症相关因子含量,Western blot检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-1(TIM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:肾透明细胞癌组织中ST6GalⅠ表达较癌旁组织明显升高(P<0.01);与对照组比较,siRNA-ST6GalⅠ组THP-1细胞中ST6GalⅠmRAN和蛋白相对表达量均显著下降(P<0.05);与对照组比较,THP-1细胞经诱导后Arg-1 mRNA表达升高,iNOS mRNA表达下降,CD206表达升高(P<0.05),而转染siRNA-ST6GalⅠ后进行诱导处理的THP-1细胞Arg-1 mRNA表达下降,iNOS mRNA表达升高,CD206表达下降(P<0.05);786-O细胞与诱导的THP-1细胞共培养后,细胞存活率升高,迁移能力增强,凋亡率下降,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量下降,IL-10、TGF-β1含量升高,TIM-1蛋白表达下降,VEGF蛋白表达升高(P<0.05);而786-O细胞与下调ST6GalⅠ且诱导的THP-1细胞共培养后,细胞存活率下降,迁移能力降低,凋亡率增加,同时,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高,IL-10、TGF-β1含量下降,TIM-1蛋白表达升高而VEGF蛋白表达下降(P<0.05)。结论:下调ST6GalⅠ表达可抑制THP-1细胞向M2型巨噬细胞极化,进而抑制肾透明细胞癌细胞的生长与迁移,并调控炎症因子与免疫相关蛋白TIM-1、VEGF的表达。
关键词
肾透明细胞癌
唾液转移酶ⅰ
巨噬细胞
免疫功能
Keywords
Renal clear cell carcinoma
Salivary transferase
ⅰ
Macrophages
Immune function
分类号
R737.11 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
鸡α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ基因的克隆和真核表达载体的构建
被引量：
3
2
作者
刘媛媛
王俊亚
张晓娟
陈礼朋
岳旭龙
高文明
李双亮
崔保安
李新生
机构
河南农业大学牧医工程学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第1期21-24,共4页
基金
河南省科技成果转化项目"禽类重大疫病多联疫苗的中试与转化"(122201110027)
文摘
试验利用Trizol法从鸡肠道组织提取总RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增出α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(α-2,3-sialyltransferaseⅠ,ST3GALⅠ)基因的cDNA片段,并将其克隆至pGEM-T easy载体,获得阳性重组质粒,再以阳性重组质粒为模板亚克隆ST3GALⅠ基因的完整ORF区,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,进行PCR、限制性酶切和DNA序列分析鉴定。结果表明,ST3GALⅠ基因全长1029bp,测序结果同GenBank数据库收录的序列一致,无任何密码子缺失与突变,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上的目的基因大小方向均正确。本研究成功构建了pcDNA3.1(+)-ST3GALⅠ真核表达载体,为下一步的真核表达及对ST3GALⅠ基因的功能研究奠定了基础。
关键词
禽流感病毒
受体
α-2
3-
唾液
酸
转移
酶
ⅰ
真核表达载体
Keywords
avain influenza virus
receptor
α-2
3-sialyltransferase
ⅰ
eukaryotic expression vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于巨噬细胞极化探究唾液酸转移酶Ⅰ(ST6GalⅠ)对肾透明细胞癌生长及免疫功能的影响
李前进
王玉杰
刘强
马双钰
拜合提亚·阿扎提
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鸡α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ基因的克隆和真核表达载体的构建
刘媛媛
王俊亚
张晓娟
陈礼朋
岳旭龙
高文明
李双亮
崔保安
李新生
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013
3
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职称材料
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