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茶树咖啡酸氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达
被引量：
7
1
作者
李小霞
余有本
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期139-143,共5页
以从茶树叶子中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR利用RACE技术,得到咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid o-methyltransferase,COMT)基因全长1 381bp,其开放阅读框为1 092bp,编码393个氨基酸,推测的蛋白分子量约为39.661 9ku,理论等电点为5.66...
以从茶树叶子中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR利用RACE技术,得到咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid o-methyltransferase,COMT)基因全长1 381bp,其开放阅读框为1 092bp,编码393个氨基酸,推测的蛋白分子量约为39.661 9ku,理论等电点为5.66,在GenBank的登录号为HM204933。其核苷酸序列与欧洲白桦、苎麻、中果咖啡和毛果杨的COMT基因相似性分别为80%、78%、77%、77%,氨基酸序列与毛果杨的COMT基因达100%。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明茶树COMT基因能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,电泳检测到一条大约60ku的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。
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关键词
茶树
咖啡酸氧甲基转移酶
RACE
原核表达
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职称材料
板栗咖啡酸氧甲基转移酶基因CmCOMT的克隆及原核表达
被引量：
6
2
作者
刘裕峰
朱天辉
+4 位作者
刘应高
李姝江
龙旭梅
余鹏举
韩珊
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第12期2332-2341,共10页
该研究根据板栗(Castanea mollissima Bl.)cDNA文库分析得到EST序列,采用RT-PCR技术,克隆板栗咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid O-methyltransferase,COMT)基因全长cDNA(CmCOMT),分析其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究,为板栗木...
该研究根据板栗(Castanea mollissima Bl.)cDNA文库分析得到EST序列,采用RT-PCR技术,克隆板栗咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid O-methyltransferase,COMT)基因全长cDNA(CmCOMT),分析其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究,为板栗木质素合成关键酶基因CmCOMT的生物学功能研究与应用奠定基础。结果表明:(1)CmCOMT基因(GenBank登录号为KU365322)具有一个1 098bp开放阅读框(ORF),共编码365个氨基酸,推测蛋白分子质量为39.684 9kD,理论等电点为5.83,具有植物SAM依赖甲基转移酶的典型特征。(2)CmCOMT核苷酸序列及其编码氨基酸序列与垂枝桦(Betula pendula)和白桦(Betula platyphylla)的相应序列一致性均在90%以上;同源建模表明,CmCOMT的3D模型与苜蓿(Medicago sativa)MsCOMT的蛋白结构相似,推测其可能与MsCOMT具有相似的功能;系统发育树分析显示,CmCOMT与其他植物COMTs具有相同的进化祖先,与桦木科植物物种亲缘关系最近。(3)SDS-PAGE电泳分析表明,CmCOMT蛋白最佳诱导表达条件为0.3mmol/L IPTG在25℃下诱导6h,蛋白分子量约为44kD,其主要以可溶性蛋白的形式存在。
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关键词
板栗
咖啡酸氧甲基转移酶
基因克隆
原核表达
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职称材料
题名
茶树咖啡酸氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达
被引量：
7
1
作者
李小霞
余有本
机构
西北农林科技大学园艺学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期139-143,共5页
基金
唐仲英育种基金
文摘
以从茶树叶子中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR利用RACE技术,得到咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid o-methyltransferase,COMT)基因全长1 381bp,其开放阅读框为1 092bp,编码393个氨基酸,推测的蛋白分子量约为39.661 9ku,理论等电点为5.66,在GenBank的登录号为HM204933。其核苷酸序列与欧洲白桦、苎麻、中果咖啡和毛果杨的COMT基因相似性分别为80%、78%、77%、77%,氨基酸序列与毛果杨的COMT基因达100%。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明茶树COMT基因能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,电泳检测到一条大约60ku的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。
关键词
茶树
咖啡酸氧甲基转移酶
RACE
原核表达
Keywords
Tea
Caffeic acid o-methyltransferase（COMT）
RACE
Prokaryotic expression
分类号
S571.1 [农业科学—茶叶生产加工]
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职称材料
题名
板栗咖啡酸氧甲基转移酶基因CmCOMT的克隆及原核表达
被引量：
6
2
作者
刘裕峰
朱天辉
刘应高
李姝江
龙旭梅
余鹏举
韩珊
机构
四川农业大学林学院
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第12期2332-2341,共10页
基金
国家自然科学基金(31400547)
文摘
该研究根据板栗(Castanea mollissima Bl.)cDNA文库分析得到EST序列,采用RT-PCR技术,克隆板栗咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid O-methyltransferase,COMT)基因全长cDNA(CmCOMT),分析其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究,为板栗木质素合成关键酶基因CmCOMT的生物学功能研究与应用奠定基础。结果表明:(1)CmCOMT基因(GenBank登录号为KU365322)具有一个1 098bp开放阅读框(ORF),共编码365个氨基酸,推测蛋白分子质量为39.684 9kD,理论等电点为5.83,具有植物SAM依赖甲基转移酶的典型特征。(2)CmCOMT核苷酸序列及其编码氨基酸序列与垂枝桦(Betula pendula)和白桦(Betula platyphylla)的相应序列一致性均在90%以上;同源建模表明,CmCOMT的3D模型与苜蓿(Medicago sativa)MsCOMT的蛋白结构相似,推测其可能与MsCOMT具有相似的功能;系统发育树分析显示,CmCOMT与其他植物COMTs具有相同的进化祖先,与桦木科植物物种亲缘关系最近。(3)SDS-PAGE电泳分析表明,CmCOMT蛋白最佳诱导表达条件为0.3mmol/L IPTG在25℃下诱导6h,蛋白分子量约为44kD,其主要以可溶性蛋白的形式存在。
关键词
板栗
咖啡酸氧甲基转移酶
基因克隆
原核表达
Keywords
Castanea mollissima Bl.
caffeic acid O methyltransferase (COMT)
gene cloning
prokaryotic expression
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
茶树咖啡酸氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达
李小霞
余有本
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
板栗咖啡酸氧甲基转移酶基因CmCOMT的克隆及原核表达
刘裕峰
朱天辉
刘应高
李姝江
龙旭梅
余鹏举
韩珊
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
6
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职称材料
已选择
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引证文献
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