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猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单克隆抗体的制备及生物学特性研究 被引量：4
1
作者 祁贤 张婉华 +1 位作者 叶向阳 朱永军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期189-191,共3页
通过差速离心和蔗糖密度梯度离心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪 1(PRRSV_S1)株进行抗原纯化。免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0融合 ,用间接ELISA和有限稀释法 ,获得 2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株 ,分别命名为AG1、BD3。ELIS... 通过差速离心和蔗糖密度梯度离心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪 1(PRRSV_S1)株进行抗原纯化。免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0融合 ,用间接ELISA和有限稀释法 ,获得 2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株 ,分别命名为AG1、BD3。ELISA交叉试验和阻断试验表明 ,2株单抗具有高度特异性。AG1可与PRRSV_S1,欧洲株LV ,美洲株VR_2 332反应 ,而BD3与美洲株VR_2 332反应较弱 ,2株单抗对猪细小病毒 (PPV)、猪伪狂犬病病毒 (PRV)、猪乙型脑炎病毒 (JEV)均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是 1∶2 5 6～ 1∶5 12 ,腹水效价分别在 1∶10 3 ～ 1∶10 5之间。AG1和BD3各有 10 0条染色体 ,琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b ,BD2属于IgM。 展开更多
关键词 猪繁殖 呼吸综合征病毒s1株 单克隆抗体 生物学特性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单抗AG1的生物学特性及夹心ELISA诊断方法的建立 被引量：5
2
作者 祁贤 张婉华 +1 位作者 叶向阳 朱永军 《上海农业学报》 CSCD 2002年第3期87-91,共5页
用纯化的猪繁殖呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-SI）病毒液作抗原,免疫BALB/C小鼠,获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明,AGI具有高度特异性。AGI可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应... 用纯化的猪繁殖呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-SI）病毒液作抗原,免疫BALB/C小鼠,获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明,AGI具有高度特异性。AGI可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应,对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是1:256～512,腹水效价在1:10-3～10-5之间。AG1有100条染色体,琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b。Western blotting试验表明 AG1是针对 N蛋白抗原表位的特异性单抗。以AG1为捕捉抗原抗体和酶标抗体,建立了快速检测PRRSV抗原的单抗夹心ELISA法,该方法具有快速、灵敏、准确、广谱等特点。 展开更多
关键词 生物学特性 诊断方法 繁殖呼吸综合征病毒 单克隆抗体 s1株 夹心ELIsA 猪
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猪繁殖与呼吸综合征病毒SH1/2022株的分离鉴定及基因组特征分析
3
作者 刘瑞琳 黄世静 +9 位作者 于家荣 蒋霁捷 朱钧锐 孙祁 姜一峰 高飞 童武 童光志 温永俊 周艳君 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期32-40,共9页
2022年末上海某猪场保育猪群出现持续发热等临床症状,为了确定该猪群的发病原因,本研究采集了发病猪临床样品进行了病原检测,结果显示,12份样品中有11份呈PRRSV阳性,并利用Marc-145细胞分离获得了1株病毒,经过RT-PCR和IFA等鉴定,证实该... 2022年末上海某猪场保育猪群出现持续发热等临床症状,为了确定该猪群的发病原因,本研究采集了发病猪临床样品进行了病原检测,结果显示,12份样品中有11份呈PRRSV阳性,并利用Marc-145细胞分离获得了1株病毒,经过RT-PCR和IFA等鉴定,证实该毒株为PRRSV,将其命名为SH1/2022。对分离株SH1/2022进行全基因组测序和分析,结果显示,该毒株基因组全长为15317 bp(不含poly A),与HP-PRRSV-like亲缘关系较近。重组分析结果表明,分离株SH1/2022是以谱系8的HP-PRRSV-like作为亲本毒株和谱系5的RespPRRS MLV疫苗毒株作为次要亲本毒株,发生谱系间重组而产生的毒株,基因组中含有两个重组断点nt9460和nt11398,分别位于Nsp9和Nsp11基因区域。我们推测造成该养猪场发病的原因可能是由谱系间毒株发生重组所致,提示该重组毒株仍然具有一定的致病性,有必要持续监测养猪场中PRRSV的流行动态。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离株sH1/2022 重组分析
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1株多谱系重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及遗传进化分析
4
作者 高艺 余蕊 +2 位作者 杨玉艾 张恒 孙永科 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期30-39,共10页
【目的】了解重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传进化特征。【方法】从安徽省某疑似发生重组猪繁殖与呼吸综合征疫情的猪场采集发病猪血液及病死猪肺脏组织,通过RT-PCR、间... 【目的】了解重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传进化特征。【方法】从安徽省某疑似发生重组猪繁殖与呼吸综合征疫情的猪场采集发病猪血液及病死猪肺脏组织,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验、病毒生长曲线和生物信息学软件进行病毒分离鉴定与基因序列分析。【结果】在Marc-145细胞上分离得到1株PRRSV,将其命名为AH1,其基因组全长15022 bp,与美国NADC30毒株的核苷酸同源性最高,达90.0%;病毒滴度为105.67 mL−1。基于全基因组的系统进化分析表明:AH1与NADC30-like毒株处于遗传进化树的同一分支,且在NSP2区具有与NADC30-like毒株相似的氨基酸特征性插入或缺失。在AH1毒株的毒力相关氨基酸位点中,GP2蛋白的第10位氨基酸由L10突变为S10。重组分析提示:AH1是以NADC30-like毒株为骨架,由CH-1a、JXA1和QYYZ毒株提供重组片段的重组毒株。【结论】AH1毒株由PRRSV谱系1、谱系3和谱系8之间的多重重组而产生,并出现与毒力相关的新氨基酸突变位点。研究结果为PRRSV重组毒株在中国的流行分布和遗传变异研究提供了参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NADC30-like 重组毒株 分离鉴定 遗传进化
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一株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及致病力分析
5
作者 李明桃 刘云涛 +4 位作者 邹立宏 柳珊 刘茜 焦玉兰 郁宏伟 《中国畜禽种业》 2025年第2期104-111,共8页
该研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30流行毒株的感染模型评价其致病性。从广西某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株类NADC30毒株(RP-1株),为探究其对仔猪的致病性,将其作为感染毒株接种易感染猪只,其中感染组3头猪,对照组1头猪,... 该研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30流行毒株的感染模型评价其致病性。从广西某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株类NADC30毒株(RP-1株),为探究其对仔猪的致病性,将其作为感染毒株接种易感染猪只,其中感染组3头猪,对照组1头猪,感染后每日观察临床症状,测量直肠温度,并采集血液、口腔拭子、肛拭子以检测病毒血症与排毒情况,试验结束后进行病理剖检,观察大体病理变化。结果显示,感染组在感染后体温升高,第7天1头猪出现发热,第9天1头猪直肠温度达到峰值41.16℃;感染后第2天出现病毒血症及排毒,持续至感染后第21天;病理剖检发现肺部呈暗红色,局部发生实质性病变,未感染对照组未出现上述情况。可见,RP-1株可引起易感染猪只发病,并表现出明显的临床症状,但未致死,是一株中等毒力毒株,可为疫苗效力的评价提供毒株来源。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30毒株 病毒分离 致病力
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30毒株鉴别诊断荧光RT-PCR检测方法的建立
6
作者 覃国喜 米树运 +3 位作者 孙竹筠 刘德清 罗婷婷 熊炜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期84-90,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的危害生猪养殖业的重要传染病之一。NADC30毒株是PRRSV的一种新毒株,其Nsp2存在131个不连续氨基酸缺失。该毒株在临床流行中致病力不同,且常规PRRSV疫苗免疫无法有效预... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的危害生猪养殖业的重要传染病之一。NADC30毒株是PRRSV的一种新毒株,其Nsp2存在131个不连续氨基酸缺失。该毒株在临床流行中致病力不同,且常规PRRSV疫苗免疫无法有效预防其感染,给养殖企业防控PRRSV带来困难。本研究基于TaqMan探针技术,针对经典型PRRSV保守基因序列及PRRSV NADC30缺失区域保守序列,设计不同荧光标记探针,建立双重实时荧光RT-PCR鉴别方法,可区分经典型PRRSV与PRRSV NADC30毒株。结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可快速区分经典型PRRSV毒株与PRRSV NADC30毒株,对PRRSV经典型疫苗毒株及临床NADC30毒株样本检测效果良好,适用于猪场临床样品中PRRSV NADC30毒株的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NDAC30毒株 双重实时荧光RT-PCR
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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α原核表达及其多克隆抗体的制备
7
作者 张铭芳 任佳慧 +4 位作者 张亚慈 位雪丹 申艾娟 张昂克 段红 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第5期838-848,共11页
【目的】制备非结构蛋白1α(non-structural protein 1α,NSP1α)多克隆抗体,为深入研究NSP1α蛋白功能提供物质基础,并为猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)防控靶点的选择提供新思路。【方法】... 【目的】制备非结构蛋白1α(non-structural protein 1α,NSP1α)多克隆抗体,为深入研究NSP1α蛋白功能提供物质基础,并为猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)防控靶点的选择提供新思路。【方法】以pCAGGS-NSP1α-HA质粒为模板,聚合酶链式反应扩增NSP1α基因,利用相关生物信息学在线软件分析PRRSV SD16毒株NSP1α基因和其他PRRSV毒株NSP1α基因序列同源性、蛋白的理化性质、氨基酸亲-疏水性、跨膜结构域、信号肽序列、磷酸化位点、二级和三级结构。通过EcoR I和Xho I酶切位点将NSP1α克隆至pET-28a-His原核表达载体。测序正确的pET-28a-NSP1α-His质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达感受态细胞,将诱导表达、纯化复性后的NSP1α蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定制备的多克隆抗体的反应原性,通过Western blot和激光共聚焦分析NSP1α蛋白亚细胞分布。【结果】信息学分析结果表明,SD16毒株NSP1α蛋白有501个氨基酸,为不稳定的疏水性蛋白,其序列与HLJ毒株序列同源性最高,与I型PRRSV序列同源性最低;NSP1α蛋白无信号肽序列,无跨膜结构域,存在13个磷酸化位点;二级结构主要包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲。将获得的高纯度并且有活性的NSP1α蛋白进行小鼠免疫,检测其血清抗体效价可达1∶64000。Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体特异性识别PRRSV NSP1α蛋白。Western blot和激光共聚焦结果显示,NSP1α蛋白主要定位在细胞核内。【结论】成功表达、纯化了PRRSV NSP1α蛋白并制备了鼠源多克隆抗体,该多克隆抗体与PRRSV NSP1α蛋白具有良好的反应活性和特异性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白1α 原核表达 多克隆抗体 生物学特性
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2013—2021年云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行与混合感染状况调查 被引量：6
8
作者 邓珺文 毕峻龙 +4 位作者 李永能 程美玲 沈学文 杨贵树 尹革芬 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期95-100,共6页
【目的】调查云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行规律和混合感染情况。【方法】采用分子生物学方法对2013—2021年间的3112份血液样品进行PRRSV核酸检测,并进一步分析其... 【目的】调查云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行规律和混合感染情况。【方法】采用分子生物学方法对2013—2021年间的3112份血液样品进行PRRSV核酸检测,并进一步分析其流行和混合感染情况。【结果】检测样品中,有801份样品为PPRSV阳性,阳性率为25.74%,二重、三重和四重混合感染率分别为41.20%、12.48%和1.87%;不同生长阶段猪群的PRRSV感染程度差异较大,生长育肥猪感染最严重(33.24%);相对于育肥场和散养户,种猪场的感染程度较轻,三者的感染率分别为27.94%、28.94%和14.29%。对不同毒株类型分析发现:高致病性毒株和经典毒株仍是主要的流行毒株,分别占毒株数的58.49%和22.64%,但占比呈逐年下降趋势。于2019年和2021年在云南省内分别发现了类NADC30毒株和类NADC34毒株,分别占毒株数的15.09%和3.77%,其感染率呈逐渐上升趋势。【结论】猪繁殖与呼吸综合征仍是影响云南省生猪产业健康发展最重要的疫病之一,表现形式以和其他疾病混合感染为主。随着新毒株的发现,云南省PRRSV基因更加多样,防控形势愈加复杂。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsV) 流行情况 混合感染 新发毒株
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猪繁殖与呼吸综合征病毒三重纳米RT-PCR检测方法的建立 被引量：1
9
作者 茹敏 高洁 +3 位作者 赵治钤 郑丹阳 赵谜 穆杨 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期18-25,共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪群中不断变异和传播,给世界养猪业造成严重的经济损失。将纳米颗粒与传统RT-PCR技术相结合,根据不同毒株Nsp2核苷酸序列,设计合成PRRSV特异性通用引物,在对退火温度、引物浓度、反应循环数等进行优化... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪群中不断变异和传播,给世界养猪业造成严重的经济损失。将纳米颗粒与传统RT-PCR技术相结合,根据不同毒株Nsp2核苷酸序列,设计合成PRRSV特异性通用引物,在对退火温度、引物浓度、反应循环数等进行优化后,建立了能鉴别经典、高致病性和NADC30样PRRSV毒株的三重纳米RT-PCR(Nano RT-PCR)检测方法。特异性试验结果显示,使用该方法检测猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒等病毒均无交叉反应。该方法对经典、高致病性和NADC30样PRRSV毒株的Nsp2重组质粒的检出限分别为3.32×10^(2)、6.18×10^(3)、3.26×10^(3)拷贝/μL,高于常规RT-PCR方法的灵敏度。对80份临床样本的检测结果显示,该方法可用于临床样品中PRRSV经典毒株、高致病性毒株和NADC30样毒株的鉴别检测,并可确定毒株类型,为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 经典毒株 高致病性毒株 NADC30样毒株 纳米RT-PCR
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10基因生物信息学分析 被引量：3
10
作者 周思旋 徐健 +1 位作者 周碧君 王开功 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期6-10,共5页
本研究旨在对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)贵州JL株Nsp10基因(GenBank登录号:EU886322)进行生物信息学分析,了解其生物学特征,为下一步Nsp10的表达和ELISA检测方法的建... 本研究旨在对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)贵州JL株Nsp10基因(GenBank登录号:EU886322)进行生物信息学分析,了解其生物学特征,为下一步Nsp10的表达和ELISA检测方法的建立奠定基础。应用BioEdit、DNAStar、PsortⅡ、SignalP、TMHMM、ProtFun、Clustal_1.81、Mega等软件对Nsp10蛋白的理化参数、信号肽、跨膜区域、亲水性、表面可及性、抗原性、二级结构、亚细胞定位及与其他PRRSV毒株相应片段同源性等进行分析和预测。该蛋白理论分子质量为26.38ku,pI为8.93,为稳定蛋白,不含信号肽,无跨膜结构,具有良好的形成抗原表位的条件。亚细胞定位结果表明,该蛋白极有可能位于细胞质,其编码氨基酸序列与参考毒株同源性为97.4%～100%。该蛋白保守性较高,是可溶性蛋白,有良好的抗原性,具备作为靶蛋白建立免疫方法的条件。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株 Nsp10基因 生物信息学分析
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猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：4
11
作者 杨小曼 时洪艳 +8 位作者 张燎原 张鑫 张记宇 刘大凯 冯廷帅 曾苗苗 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期608-613,共6页
为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析... 为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 s1蛋白 间接ELIsA方法 抗体检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株非结构基因的分子克隆及其基因特征的研究 被引量：31
12
作者 刘光清 薛强 +3 位作者 仇华吉 蔡雪晖 童光志 郭宝清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期81-87,共7页
对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因 (ORF1)和非编码区分别进行了克隆和测序 ,并对其基因特征作了分析。结果表明 ,CH_1a株ORF1全长 11882nt,其中ORF1a长 75 12nt、ORF1b长 4374nt。它们与VR2 332株的核苷酸同源性分别为 89%、92 % ;... 对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因 (ORF1)和非编码区分别进行了克隆和测序 ,并对其基因特征作了分析。结果表明 ,CH_1a株ORF1全长 11882nt,其中ORF1a长 75 12nt、ORF1b长 4374nt。它们与VR2 332株的核苷酸同源性分别为 89%、92 % ;与LV株的核苷酸同源性分别为 5 4%、6 3.3%。ORF1编码两个聚合蛋白 ,其中ORF1a编码的聚合蛋白经裂解后产生 6个成熟的非结构蛋白 (Nsp1α、Nsp1β、Nsp2_5 ) ,以Nsp2的变异性最为显著 ,它与LV株的氨基酸同源性为 41%。ORF1b编码的聚合蛋白经裂解后 ,产生 4个成熟的非结构蛋白 (RdRpCP2_4) ,其中RdRp为病毒的复制酶 ,CP4表现出较大的变异性 ,与LV株的氨基酸同源性为 48%。在ORF1a_ORF1b的衔接区有保守的庚核苷酸滑动序列和拟节结构 ,它们是核糖体移码翻译所必需的结构。在基因组末端存在非编码区 ,其中 5’NCR长 190nt,比LV株 5’NCR短 31nt,其核苷酸同源性为 6 1%。 3’NCR长 15 1nt,比LV株 3’NCR长 37nt,保守性稍高 ,其与VR2 332株和LV株的核苷酸同源性分别为 95 .4%和 78.2 %。在 3’NCR末端有一个poly(A)尾巴 ,长 2 0nt。在Poly(A)尾上游有保守的八核苷酸序列 ,是复制酶识别并结合的区域。 展开更多
关键词 猪 繁殖 呼吸综合征病毒 CH-1A株 非结构基因 分子克隆 基因特征 序列分析 非结构蛋白编码区
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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株核蛋白基因在原核系统中的高效表达与初步应用 被引量：14
13
作者 周艳君 童光志 +4 位作者 薛强 仇华吉 王云峰 赵永刚 王玫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期401-404,共4页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_1a株核蛋白基因克隆至原核表达载体pET30a的多克隆位点中 ,经鉴定后得到重组质粒pET30a_N ,将此重组质粒转化到受体菌BL2 1中 ,用诱导剂IPTG分别以不同浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做S... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_1a株核蛋白基因克隆至原核表达载体pET30a的多克隆位点中 ,经鉴定后得到重组质粒pET30a_N ,将此重组质粒转化到受体菌BL2 1中 ,用诱导剂IPTG分别以不同浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS_PAGE、Western_blot分析 ,并以此为包被抗原进行ELISA检测 ,结果发现以终浓度为 1mmol/L的IPTG进行诱导 ,4小时后表达可达到高峰 ,其大小约为 2 3kD ,薄层扫描结果表明该蛋白表达量约占菌体蛋白总量的 32 % ,该蛋白不仅与PRRSV阳性血清能发生特异性反应 ,而且可被PRRSV抗N蛋白单抗所识别 ,证实此大量表达的蛋白为核蛋白。将此表达产物应用ProBondTM纯化系统进行纯化 ,其纯度可达到 91% ,纯化后的蛋白以 5 0 μg/孔包被 96孔板 ,检测来自不同地区送检的猪血清 ,同时以全病毒ELISA为对照 ,结果发现二者的符合率高达 93.3% ,而应用该蛋白进行检测其反应更为敏感 ,且背景低 ,制备过程简单 ,这将为今后应用该蛋白作诊断抗原检测PRRSV奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 CH-1A株 核蛋白基因 原核系统 应用 PRRsV 繁殖呼吸综合征病毒 基因表达
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猪繁殖与呼吸综合征河南毒株Henan-1的分离及其NSP2、ORF3、ORF5的序列分析 被引量：13
14
作者 张彩勤 王旭荣 +2 位作者 杨增岐 赵炳武 宋长绪 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期1-6,共6页
将2007年1月河南省某猪场送检的疑似高热病病料处理后接种于Marc-145细胞，出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物，RT-PCR扩... 将2007年1月河南省某猪场送检的疑似高热病病料处理后接种于Marc-145细胞，出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物，RT-PCR扩增目的基因并将其克隆入pMD18-T载体进行测序。并与国内外已发表的毒株的序列进行比较。结果表明：分离毒株Henan-1是美洲型PRRSV，而且NSP2基因发生30个AA的不连续缺失；Henan-1的NSP2、ORF3和ORF5基因与JXA1、JX0612、HZ-X、HB-1（sh）、CH-1a、HB-2（sh）、SP、ATCC VR-2332、Henan-HN1、Resp PRRS／Repro MLV、PA8、BJ-4等毒株等位基因的核苷酸同源性分别为83．0％～99．0%、88．3％～99．2％、88．6％～99．5％，推导的氨基酸同源性分别为66．7％～97．9％、84．7％～98．8％、87．1％～99．5％；而ORF3和ORF5基因与LV4．2．1等位基因核苷酸同源性分别为64．7％和64．2％，推导的氨基酸同源性分别为56．7％和61．0％。基因系统发育树分析表明：Henan-1与JXA1、JX0612株的亲缘关系很近，与HB-1（sh）亲缘关系较近，与HZ-X、CH-1a、HB-2（sh）、SP、RespPRRS／Repro MLV等毒株处于不同的分支。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Henan-1毒株 序列分析
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2016年我国3株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其全基因组特征分析 被引量：13
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作者 张洪亮 张晶 +13 位作者 张文立 相丽润 宋帅杰 刘春晓 李真 彭金美 陈家锃 冷超粮 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期513-517,共5页
2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性... 2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性为88.7%~88.9%,与基因2型代表株VR2332的核苷酸同源性为60.7%~60.8%。ORF3与ORF4推导氨基酸序列比对结果显示,ZD1株的ORF3提前26个氨基酸(aa)终止,这是首次报道基因1型PRRSV编码的结构蛋白存在提前终止现象,WK14株与WG9株在ORF3的245位存在1个氨基酸的缺失;3株PRRSV在ORF4的66位皆存在1个氨基酸的缺失。Simplot生物学重组软件分析表明,WK14株为重组病毒,供体病毒株为BJEU06-1,提供重组片段的病毒株为NVDC-FJ,重组位置位于第931~3 379位碱基处。ZD1株和WG9株未发现重组现象。本研究发现我国欧洲型PRRSV基因组在缺失、重组等方面正发生一些新的变化,有必要对该类病毒进行持续监测和深入研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因1型 缺失 重组
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猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)S_A毒株的分离与鉴定 被引量：11
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作者 张婉华 叶向阳 +2 位作者 祁贤 朱永军 陆鑫芳 《上海农业学报》 CSCD 2002年第2期76-79,共4页
从仔猪内脏分离到一株猪繁殖呼吸综合征病毒 (PRRSV)毒株 ,该毒株能在Marc 14 5细胞上增殖致细胞病变 ,该病变能被PRRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反... 从仔猪内脏分离到一株猪繁殖呼吸综合征病毒 (PRRSV)毒株 ,该毒株能在Marc 14 5细胞上增殖致细胞病变 ,该病变能被PRRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电镜观察到直径 5 5nm左右的病毒粒子 ,属RNA病毒 ,接种阴性仔猪未见临床症状异常 ,但血清学阳性。命名该分离毒为PRRSV SA 毒株。 展开更多
关键词 猪 繁殖呼吸综合征病毒 PRRsV sA毒株 分离 鉴定
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猪繁殖呼吸综合征病毒S3毒株的分离及其免疫特性研究 被引量：5
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作者 祁贤 张婉华 +2 位作者 叶向阳 朱永军 陆鑫芳 《动物医学进展》 CSCD 2002年第4期87-90,共4页
从某猪场仔猪体内分离到一株 PPRSV毒株 ,该毒株能在 Marc-1 4 5细胞上增殖产生致细胞病变 ,该病变能被 PPRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型 PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电... 从某猪场仔猪体内分离到一株 PPRSV毒株 ,该毒株能在 Marc-1 4 5细胞上增殖产生致细胞病变 ,该病变能被 PPRSV美洲型阳性血清所抑制 ,不被乙脑病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制 ,经美洲型 PPRSV荧光抗体染色呈阳性反应 ,电镜观察到直径 55～ 60 nm的病毒粒子 ,接种阴性仔猪未见临床症状异常 ,但抗体检测阳性。命名该分离毒为 PPRSV-S3毒株。在 S3弱毒株分离鉴定的基础上 ,进一步在猪体上对其致病性和免疫力进行研究。S3毒株接种仔猪后 ,仔猪不表现任何症状 ,也不向外排毒。4～ 5周龄的仔猪接种 S3株后可产生坚强的免疫力 ,免疫后 4～ 6个月能抵抗强毒攻击。后备母猪配种前 2～ 3周免疫接种 S3株 ,怀孕 90～95d攻强毒 ,未发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍现象。结果表明 ,S3是一株自然分离的弱毒株 ,且具有良好的安全性和免疫力。 展开更多
关键词 猪 繁殖呼吸综合征病毒 s3毒株 分离 免疫特性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1R株致弱过程中ORF5基因遗传变异分析 被引量：5
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作者 吴国军 蔡雪辉 +6 位作者 刘永刚 王洪峰 王淑杰 石文达 马平 张琪 李成君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期665-670,共6页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行R... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行RFLP分析,发现了一个特异性的内切酶酶切位点-TspEⅠ。根据该酶切位点,可以区分CH-1R株、CH-1a株、其它野生型毒株和参考毒株。ORF5基因的变异分析显示,该致弱毒株与CH-1a株以及其它8株参考毒株存在着差异,并且它们的氨基酸同源性在88.5%～97.0%之间。系统进化树研究表明该弱毒株仍属于CH-1a亚支。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 CH—1R株 ORF5 变异分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株的仔猪回归试验及病毒在体内的分布研究 被引量：8
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作者 颜其贵 郭万柱 +6 位作者 李彬 欧洋 赖维莉 张传斌 肖雪 张焕容 袁孟伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第3期21-22,共2页
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 回归试验 仔猪 PRRsV 重庆地区 传染性疾病 分离株
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猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株与NSP2变异株二重PCR诊断方法的建立及应用 被引量：6
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作者 何丹 龙剑明 +4 位作者 傅薇 冯淑萍 胡晓静 付建 刘棋 《广西农业科学》 CAS CSCD 2009年第1期84-87,共4页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株VR2332保守序列与近年PRRSV自然变异株序列分析研究,设计合成了2对特异引物,分别扩增出225、427bp两条特异型基因片段,通过优化RT-PCR条件,建立了可同时检测PRRSV标准株和NSP2变异株的二... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株VR2332保守序列与近年PRRSV自然变异株序列分析研究,设计合成了2对特异引物,分别扩增出225、427bp两条特异型基因片段,通过优化RT-PCR条件,建立了可同时检测PRRSV标准株和NSP2变异株的二重PCR诊断方法。应用该方法分别对广西不同地区的16份病、死猪的血液、肺等组织进行检测,结果15份PRRSV阳性,其中1份为标准株,14份为变异株。试验结果表明,PRRSV标准株与变异株二重PCR诊断方法具有高度特异性、敏感性和实用性,可用于临床诊断,为目前流行的猪高热病病原研究及广西PRRS的防制提供了一定科学依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异株 二重PCR
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