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乳酸菌启动子探针载体的构建及其功能验证 被引量:4
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作者 张维 姚璐 +2 位作者 张世湘 罗云波 郝彦玲 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2010年第11期4-6,29,共4页
以β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因,在乳酸菌表达载体pMG36e基础上,利用平滑化技术删除表达载体自带启动子P32,构建了乳酸菌启动子探针载体pMGPP。将已知的嗜酸乳杆菌S-layer蛋白基因启动子slpA插入到pMGPP无启动子的gusA基因上游... 以β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因,在乳酸菌表达载体pMG36e基础上,利用平滑化技术删除表达载体自带启动子P32,构建了乳酸菌启动子探针载体pMGPP。将已知的嗜酸乳杆菌S-layer蛋白基因启动子slpA插入到pMGPP无启动子的gusA基因上游验证其功能,GUS染色结果表明:pMGPP在大肠杆菌KW1和植物乳杆菌WQ0815中皆具有启动子探针载体的功能。因此,具有自主知识产权的启动子探针载体pMGPP的构建不仅为筛选乳酸菌启动子提供了有效的工具,同时为高效乳酸菌表达载体的构建奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子探针载体 报告基因gusA 功能验证
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用海洋蓝细菌启动子构建的启动子探针载体进行外源基因表达
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作者 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1997年第2期51-51,共1页
关键词 海洋蓝细菌 启动子探针载体 外源基因表达
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鸟枪法筛选枯草芽孢杆菌基因强启动子及对黄牛GHRL基因的表达 被引量:4
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作者 张爱玲 张丽 +2 位作者 杨明明 张良志 陈宏 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期92-96,共5页
利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 41... 利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽孢杆菌基因启动子的保守序列,并确定其转录活性区域位于5~333 bp,为yxiE基因的调控序列.将黄牛GHRL基因导入到启动子亚克隆序列下游,使该基因在枯草芽孢杆菌中得到了表达. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌 启动子探针载体 GHRL基因 鸟枪法
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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中启动子P_(aziU1)的克隆及表达 被引量:1
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作者 周俊 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期26-31,共6页
为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1... 为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1的启动子活性进行了定性和定量分析。PaziU1在3种不同的链霉菌Streptomyces sahachiroi、Streptomyces lividans ZX1和Streptomyces albus中均表现出启动子活性。PaziU1的启动子活性在初始培养的36h略低于PermE*,在培养48h后,PaziU1的表达活性高于PermE*。结果表明,Pazi U1与PermE*一样,是一个可以在链霉菌中组成型表达的强启动子。 展开更多
关键词 STREPTOMYCES sahachiroi ATCC 33158 PermE* 启动子探针载体 PaziU1 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 组成型强启动子
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米根霉AS 3.819基因启动子片段的克隆及功能鉴定
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作者 张旻 姜绍通 +4 位作者 郑志 潘丽军 李兴江 罗水忠 吴学凤 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期71-78,共8页
从L-乳酸生产菌米根霉(Rhizopus oryzae)菌株AS 3.819基因组DNA中分别扩增得到了乳酸脱氢酶基因(ldh A)、丙酮酸脱氢酶基因(pdc A)、淀粉糖化酶基因(amy A)以及磷酸甘油酸酯激酶基因(pgk1)的启动子片段,并构建启动子探针载体p UKMR,以β... 从L-乳酸生产菌米根霉(Rhizopus oryzae)菌株AS 3.819基因组DNA中分别扩增得到了乳酸脱氢酶基因(ldh A)、丙酮酸脱氢酶基因(pdc A)、淀粉糖化酶基因(amy A)以及磷酸甘油酸酯激酶基因(pgk1)的启动子片段,并构建启动子探针载体p UKMR,以β-内酰胺酶基因(bla)为报告基因在大肠杆菌JM109中对这些启动子片段进行筛选及启动活性检测。结果表明:4种启动子片段成功启动报告基因表达;在非底物诱导情况下,ldh A和pgk1启动子启动活性较强;在有合适碳源底物诱导情况下pdc A和amy A启动子拥有更高的启动活性;ldh A基因的启动子启动活性随着启动子片段长度的增加有一定提高,而在长度为500 bp以上时,其启动活性变化不明显。本研究为Rhizopus oryzae提供了一种快速简便的启动子捕获分离及启动活性检测方法。 展开更多
关键词 米根霉 大肠杆菌 启动子探针载体 Β-内酰胺酶 乳酸脱氢酶
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