大鼠GLUT3基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定 被引量：1

1

作者 郑传宜 杨堃 +2 位作者 李军亮 白恩琪 李方成 《海南医学院学报》 CAS 2012年第5期577-581,共5页

目的:克隆大鼠葡萄糖转运体3(glucose transporter 3,GLUT3)基因启动子区,并构建其萤火虫荧光素酶报告基因载体。方法:在对大鼠GLUT3基因5′侧翼区进行详尽生物信息学特征分析后,设计相应引物,用PCR的方法从大鼠基因组中扩增出GLUT3基因... 目的:克隆大鼠葡萄糖转运体3(glucose transporter 3,GLUT3)基因启动子区,并构建其萤火虫荧光素酶报告基因载体。方法:在对大鼠GLUT3基因5′侧翼区进行详尽生物信息学特征分析后,设计相应引物,用PCR的方法从大鼠基因组中扩增出GLUT3基因5′侧翼区-1037～155bp段长为1 292bp的启动子区(以翻译起始点ATG为+1),再用定向克隆的方法将这一启动子区片段定向重组入专门用于启动子活性研究的萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-basic)中,构建出包含大鼠GLUT3基因启动子区的萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-GLUT3),电泳与测序鉴定,最后再将pGL 3-GLUT3与内参pRL-TK用脂质体转染的方法瞬时共转染PC12和原代培养的神经元中,通过双荧光素酶报告基因检测系统鉴定pGL 3-GLUT3的启动子活性,并用独立样本t检验方法进行统计分析。对照组共转染pGL3-basic与内参pRL-TK。结果:构建出荧光素酶报告基因载体pGL3-GLUT3。与转染空质粒pGL3-basic组相比,原代神经细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性升高(5.182 9±0.264 8 vs 2.893 1±0.775 4,P=0.008),在PC12细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性也升高(2.797 7±0.512 0 vs 1.179 8±0.312 5,P=0.010)。结论:成功克隆GLUT3基因启动子区,并构建出包含GLUT3基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体,并且在PC12和原代培养的神经元中pGL 3-GLUT3可以表现出启动子活性。这为后续大鼠GLUT3基因转录调控研究提供研究素材。 展开更多

关键词 启动子 大鼠 葡萄糖转运体3(GLUT3) 荧光素酶报告基因载体

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美洲棉铃虫CYP321 A1基因启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体的构建及活性测定 被引量：1

2

作者 张春妮 张雅林 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第3期87-91,共5页

【目的】构建美洲棉铃虫细胞色素P450基因CYP321 A1启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体,为探索CYP321 A1基因的转录调控机制奠定基础。【方法】设计合成PCR引物,从美洲棉铃虫基因组DNA中扩增并克隆CYP321 A1基因的启动子区;将克隆的启... 【目的】构建美洲棉铃虫细胞色素P450基因CYP321 A1启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体,为探索CYP321 A1基因的转录调控机制奠定基础。【方法】设计合成PCR引物,从美洲棉铃虫基因组DNA中扩增并克隆CYP321 A1基因的启动子区;将克隆的启动子片段插入载体pGL3-basic构建萤火虫荧光素酶报告基因载体p(-1 470/+64);用p(-1 470/+64)转染美洲棉铃虫脂肪体细胞系BCIRL-HzFB33,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析该启动子活性。【结果】p(-1 470/+64)经双酶切、PCR鉴定及DNA测序分析鉴定准确无误;通过转染细胞和荧光素酶活性分析,证实所构建的重组载体p(-1 470/+64)可以反映CYP321 A1启动子活性;黄酮、花椒毒素处理极显著地增强了重组载体p(-1 470/+64)的荧光活性。【结论】成功构建了美洲棉铃虫细胞色素P450基因CYP321 A1启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体,CYP321A1启动子活性可以被植物次生物质黄酮、花椒毒素高度诱导。 展开更多

关键词 美洲棉铃虫 细胞色素P450 CYP321 A1 启动子 荧光素酶报告基因载体

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牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因载体构建与活性检测 被引量：4

3

作者 段美艳 李安宁 +2 位作者 赵志东 王明明 昝林森 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第8期39-45,共7页

【目的】构建牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其在C2C12细胞系中的表达活性。【方法】从牛外周血中提取基因组DNA,通过PCR方法从牛基因组DNA中克隆获得牛ATP5B基因的5′端转录调控区的1 898bp目的片段,通过设计引... 【目的】构建牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其在C2C12细胞系中的表达活性。【方法】从牛外周血中提取基因组DNA,通过PCR方法从牛基因组DNA中克隆获得牛ATP5B基因的5′端转录调控区的1 898bp目的片段,通过设计引物逐段缺失后获得7个亚克隆,将其纯化后经SmaⅠ和KpnⅠ双酶切与pGL3-Basic载体连接,连接产物转化感受态细胞DH5α,得到牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,经脂质体基因转染法转染C2C12细胞系后,检测7个重组质粒的荧光素酶活性;运用在线软件Gen-omatix和TFSEARCH对ATP5B启动子区序列进行分析。【结果】成功克隆获得7个系列缺失的牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒pATP5B-1898、pATP5B-1607、pATP5B-1293、pATP5B-992、pATP5B-678、pATP5B-462和pATP5B-145;通过转染细胞和荧光素酶活性分析,可知构建的重组质粒均有启动子活性,且重组质粒pATP5B-678和pATP5B-462与空载体pGL3-Basic的荧光素酶活性差异极显著。软件分析结果显示,ATP5B基因启动子区域-763^-85bp存在多个重要转录调控元件。【结论】成功构建了7个系列缺失的牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,且证实-763^-230bp为牛ATP5B基因的核心启动子区域。 展开更多

关键词 牛~ATP5B基因启动子 双荧光素酶报告基因载体

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2个水稻PLT基因启动子的克隆及其表达分析 被引量：1

4

作者 张晨 王利凯 +3 位作者 包亮 龙湍 陈春丽 须健 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期147-151,共5页

为研究水稻中PLT基因的表达及功能,利用同源序列分析,在水稻基因数据库中检索到2个与拟南芥PLT基因高度同源的基因序列,命名为OsPLT7和OsPLT11。根据进一步预测的PLT启动子序列设计引物,以水稻品种中花11的基因组DNA为模板,用PCR方法扩... 为研究水稻中PLT基因的表达及功能,利用同源序列分析,在水稻基因数据库中检索到2个与拟南芥PLT基因高度同源的基因序列,命名为OsPLT7和OsPLT11。根据进一步预测的PLT启动子序列设计引物,以水稻品种中花11的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到PLT7、PLT11的启动子片段,克隆至含有报告基因的表达载体上并转化水稻。通过GUS染色观察T1代转基因阳性植株,发现OsPLT7和OsPLT11在水稻根部干细胞小生境和中柱部位表达,表达模式类似于其同源基因在拟南芥中的表达谱。 展开更多

关键词 水稻 拟南芥 干细胞 PLT 启动子报告基因融合载体

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乳酸菌启动子探针载体的构建及其功能验证 被引量：4

5

作者 张维 姚璐 +2 位作者 张世湘 罗云波 郝彦玲 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2010年第11期4-6,29,共4页

以β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因,在乳酸菌表达载体pMG36e基础上,利用平滑化技术删除表达载体自带启动子P32,构建了乳酸菌启动子探针载体pMGPP。将已知的嗜酸乳杆菌S-layer蛋白基因启动子slpA插入到pMGPP无启动子的gusA基因上游... 以β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因,在乳酸菌表达载体pMG36e基础上,利用平滑化技术删除表达载体自带启动子P32,构建了乳酸菌启动子探针载体pMGPP。将已知的嗜酸乳杆菌S-layer蛋白基因启动子slpA插入到pMGPP无启动子的gusA基因上游验证其功能,GUS染色结果表明:pMGPP在大肠杆菌KW1和植物乳杆菌WQ0815中皆具有启动子探针载体的功能。因此,具有自主知识产权的启动子探针载体pMGPP的构建不仅为筛选乳酸菌启动子提供了有效的工具,同时为高效乳酸菌表达载体的构建奠定基础。 展开更多

关键词 乳酸菌 启动子探针载体 报告基因gusA 功能验证

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以Insig-2基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立 被引量：1

6

作者 张琴 杨发建 +1 位作者 何芸 杨俊霞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期140-143,共4页

目的通过双荧光素酶报告基因检测系统建立以胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)启动子为靶点的药物筛选模型。方法将人Insig-2基因启动子序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建重组质粒pGL3-Insig-2并与内参质... 目的通过双荧光素酶报告基因检测系统建立以胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)启动子为靶点的药物筛选模型。方法将人Insig-2基因启动子序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建重组质粒pGL3-Insig-2并与内参质粒pRL-TK瞬时共转染工具细胞,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化反映Insig-2基因启动子启动转录的活性,并对共转染质粒比例、工具细胞选择等条件进行探索和优化,相关药物处理进行验证。结果成功构建了重组质粒pGL3-Insig-2;确认pGL3-Insig-2:pRL-TK共转染比例为4∶1,确定3T3-L1细胞为工具细胞;1,25-(OH)2D3、小檗碱和姜黄素均能明显增强Insig-2基因启动子活性。结论成功建立了以Insig-2基因启动子为靶点的药物筛选模型,为筛选新型调脂药奠定基础。 展开更多

关键词 Insig-2 启动子 药物筛选 报告基因载体 调脂药 荧光素酶法

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粘虫中肠胰蛋白酶基因启动子的克隆及其功能分析 被引量：1

7

作者 王丹 刘骉 +3 位作者 胡兆农 吴文君 肖新敏 师宝君 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第6期141-147,154,共8页

【目的】通过克隆粘虫Mythimna separata(Walker)(Lepidoptera:Noctuidae)中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列,并分析启动子功能,为进一步探索昆虫胰蛋白酶活性调控机制奠定基础。【方法】利用Genome Walking方法克隆粘虫中肠胰蛋白... 【目的】通过克隆粘虫Mythimna separata(Walker)(Lepidoptera:Noctuidae)中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列,并分析启动子功能,为进一步探索昆虫胰蛋白酶活性调控机制奠定基础。【方法】利用Genome Walking方法克隆粘虫中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列,运用在线分析软件NNPP v.2.2和数据库JASPAR进行序列分析,构建由胰蛋白酶基因启动子驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体,通过转染草地贪夜蛾sf21细胞系,瞬时表达后用双荧光素酶报告基因检测系统分析该启动子活性。【结果】克隆得到粘虫中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列1 863bp,其中含TATA框、CAAT框等启动子核心序列及GATA、STAT、C/EBP等转录调控元件。双荧光素酶报告基因检测系统分析表明,相对于空载体pGL3-Basic,所构建的重组载体p(-1 673/+25)具有明显的启动子活性。【结论】克隆得到的启动子片段明显具有启动报告基因表达的能力,可用于在胰蛋白酶基因启动子水平和转录因子水平研究杠柳新苷活性化合物的激活机理。 展开更多

关键词 粘虫 胰蛋白酶 染色体步移 启动子 荧光素酶报告基因载体

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NF-κB抑制剂和IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性的影响

8

作者 袁宏香 王跃国 +4 位作者 吴信华 倪红兵 浦江 申娴娟 鞠少卿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期111-114,共4页

目的:探讨IFN-γ和NF-κB抑制剂对人BAFF-R基因启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR方法扩增得到BAFF-R基因转录起始点上游5’端-1562^+261 bp的片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic连接构建8个序列缺失质粒。将重... 目的:探讨IFN-γ和NF-κB抑制剂对人BAFF-R基因启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR方法扩增得到BAFF-R基因转录起始点上游5’端-1562^+261 bp的片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic连接构建8个序列缺失质粒。将重组质粒瞬时转染人多发性骨髓瘤细胞株KM3,通过检测荧光素酶的相对活性,确定启动子活性最强的区域;分别用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)和IFN-γ对活性最强的启动子进行干预,测定并比较荧光素酶的相对活性;同时RT-PCR检测干预前后BAFF-R基因mRNA的表达水平。结果:IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性有促进作用并且可以上调BAFF-R mRNA的表达,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)对BAFF-R基因启动子活性有抑制作用并且可以下调BAFF-R mRNA的表达。结论:IFN-γ和NF-κB信号通路参与了BAFF-R基因的转录调控,为进一步研究BAFF-R的调节机制提供了基本的依据。 展开更多

关键词 BAFF-R 启动子 荧光素酶报告基因载体 IFN-Γ NFΚ-B

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Klotho基因启动子区域定位及活性分析

9

作者 宋双双 王虎林 司良毅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期707-710,共4页

目的构建含不同长度klotho基因启动子片段的报告基因载体,研究其在不同细胞系中的转录活性。方法以人全血基因组DNA为模板,克隆长短不同的klotho基因启动子片段,命名为klothoⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ;分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic... 目的构建含不同长度klotho基因启动子片段的报告基因载体,研究其在不同细胞系中的转录活性。方法以人全血基因组DNA为模板,克隆长短不同的klotho基因启动子片段,命名为klothoⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ;分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建真核表达载体;采用Lipofectamine 2000将重组质粒分别和pRL-TK共转染HEK293和HeLa细胞,分析不同长度的klotho基因启动子片段在细胞内的转录活性。结果双酶切和测序鉴定均显示表达载体构建成功;klotho基因的核心启动子区域位于-504～-6;双荧光素酶活性检测显示klothoⅢ在2种细胞中的转录活性明显高于klothoⅠ、Ⅱ(P<0.05),而klothoⅣ的转录活性在HEK293细胞中能维持高水平,在HeLa细胞中显著下降(P<0.01)。结论 klotho基因启动子在不同细胞中的转录活性不同,-973～-504区域可能是导致HeLa细胞中klothoⅣ转录活性下降的原因。 展开更多

关键词 KLOTHO 基因 启动子 报告基因载体 转录活性

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白血病细胞中不同启动子驱动外源基因表达能力差异分析 被引量：3

10

作者 周雁 黄秋花 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期879-885,共7页

为了分析不同启动子在白血病细胞中驱动外源基因表达能力的差异,文章选择了4种含不同启动子EF1α、PGK、Ubiquitin和CMV驱动的GFP报告基因的慢病毒载体,用以感染4种不同的白血病细胞株——NB4、HL60、Kasumi和THP1,利用荧光显微镜、流... 为了分析不同启动子在白血病细胞中驱动外源基因表达能力的差异,文章选择了4种含不同启动子EF1α、PGK、Ubiquitin和CMV驱动的GFP报告基因的慢病毒载体,用以感染4种不同的白血病细胞株——NB4、HL60、Kasumi和THP1,利用荧光显微镜、流式细胞仪和荧光定量PCR的方法检测其GFP表达效率,发现EF1α启动子驱动GFP表达的能力最强,CMV最弱,PGK和Ubiquitin则介于两者之间。该结果提示在白血病细胞中研究基因功能时,应根据不同的研究需求选择最为合适的启动子。 展开更多

关键词 启动子 GFP报告基因 慢病毒载体 白血病细胞

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乙型肝炎病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达

11

作者 谢娜 王晓燕 张琼 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期353-353,共1页

为研究乙型肝炎病毒（HBV）启动子（含增强子）调控下的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因在肝癌细胞中的表达。用聚合酶链反应（PCR）技术分别扩增出HBV的4个启动子，载入T载体，测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1。构建出HB... 为研究乙型肝炎病毒（HBV）启动子（含增强子）调控下的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因在肝癌细胞中的表达。用聚合酶链反应（PCR）技术分别扩增出HBV的4个启动子，载入T载体，测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1。构建出HBV不同启动子调控的EGFP基因表达载体，经酶切、测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将4种构建好的载体转染肝癌细胞株HepG2，用倒置荧光显微镜观察各重组体转染细胞中EGFP的表达。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 增强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 启动子 肝癌细胞株HEPG2 调控 聚合酶链反应(PCR) GFP报告基因 基因表达载体 脂质体介导法

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启动子捕获技术及其研究进展 被引量：5

12

作者 魏小慧 郑肖兰 郑服丛 《江西农业学报》 CAS 2009年第4期66-68,共3页

启动子捕获技术是一种产生大规模随机插入突变体库的有力手段,对于揭示大量基因序列所对应的基因功能具有重要的应用价值。阐述了启动子捕获技术的基本原理、研究方法及其在分子生物学领域的研究进展。

关键词 启动子 捕获 载体 报告基因 功能基因组学

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靶向HIV-1启动子的药物筛选系统的建立 被引量：1

13

作者 郭文涛 马云云 +4 位作者 刘慧涛 李敏 靳静 马晶 赵国强 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期94-97,共4页

目的:建立靶向HIV-1启动子的药物筛选系统。方法:将HIV-1启动子核心序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL4.17中,构建重组质粒pGL4.17-HIV-1P并转染H9细胞;分别用杜仲、黄芩、苦参及双黄连灌胃大鼠后采血,将含药血清分别作用于转染的H9细... 目的:建立靶向HIV-1启动子的药物筛选系统。方法:将HIV-1启动子核心序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL4.17中,构建重组质粒pGL4.17-HIV-1P并转染H9细胞;分别用杜仲、黄芩、苦参及双黄连灌胃大鼠后采血,将含药血清分别作用于转染的H9细胞,检测H9细胞荧光素酶活性。以灌胃生理盐水的大鼠血清处理的转染细胞为对照,以转染空质粒pGL4.17的H9细胞为空白对照。结果:6组荧光素酶活性差异有统计学意义(F=1820.333,P<0.001)。双黄连组转染细胞荧光素酶活性降低(P<0.05),杜仲、黄芩及苦参组转染细胞荧光素酶活性增高(P<0.05)。结论:初步构建了靶向HIV-1启动子的药物筛选系统,并推测双黄连具有抗HIV-1作用。 展开更多

关键词 HIV-1启动子 药物筛选 中药 报告基因载体

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甘菊DFL::EGFP高效融合蛋白表达载体的构建

14

作者 王翊 付建新 戴思兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期102-108,共7页

增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5′端启始密码子前... 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5′端启始密码子前面,在pBI121载体的CaMV35S启动子的3′端后面插入一段多克隆位点,成功地构建了pBI-DFL-EGFP表达载体。通过设计特异引物,利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列,用粘性末端PCR技术将pBI-DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子,构建成了pLFY-DFL-EGFP表达载体。用含有pBI-DFL-EGFP和pLFY-DFL-EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下分别用蓝光激发,均观测到了荧光。这一结果表明,融合蛋白DFL∷EGFP表达载体构建成功,同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能。 展开更多

关键词 小片段克隆 粘性末端PCR 表达载体构建 LFY启动子 DFL∷EGFP融合蛋白

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用精子载体法向鲤鱼导入基因在日本首次成功

15

作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第12期8-8,共1页

东京水产大学教授隆岛史夫等将精子用作载体,成功地开发了将基因导入鱼卵的技术,于4月在东京召开的日本水产学会上发表了研究结果。鱼类的精子载体的基因导入,在匈牙利Agricultural Biotechnology Center用鲤鱼和非洲鲶鱼、已获成功。... 东京水产大学教授隆岛史夫等将精子用作载体,成功地开发了将基因导入鱼卵的技术,于4月在东京召开的日本水产学会上发表了研究结果。鱼类的精子载体的基因导入,在匈牙利Agricultural Biotechnology Center用鲤鱼和非洲鲶鱼、已获成功。在日本成功还是首次。一次能处理大量精子是精子载体法的优点。隆岛等首先将含有SV40启动子(结合了作为标记的CAT基因)的质粒溶解于淡水鱼用的林格氏液中(浓度2μg/ml)。接着,在电解强度3.5kv/cm,脉冲幅500μsec条件下。 展开更多

关键词 精子载体法 林格氏液 启动子 岛史 水产学会 BIOTECHNOLOGY 电激法 细胞融合 鲶鱼 微注射

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肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立

16

作者 杨春 朱洪伟 +3 位作者 刘宗岳 王桂武 杨福合 邢秀梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期145-149,共5页

试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ... 试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。 展开更多

关键词 CRE重组酶 肝脏特异性启动子 真核表达载体 三重融合PCR 细胞转染

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质粒研究与载体构建

17

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第8期21-26,共6页

关键词 载体构建 基因融合 穿梭载体 启动子调控 融合蛋白 复制起点 逆病毒载体 编码区 克隆载体 读码框

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质粒研究与载体构建

18

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第7期21-26,共6页

932157嗜热性梭菌的质粒[会,英]/Kalyuzhnyi,S.V.…//Appl.Biochem.Biotechno1.-1992,34-35.-383～389[译自 DBA,1993,12（2）,93-00629]为了应用目的讨论了一些梭菌,特别是热解糖梭菌 DSM571的质粒可用性及其特性。样本包括热纤梭菌的... 932157嗜热性梭菌的质粒[会,英]/Kalyuzhnyi,S.V.…//Appl.Biochem.Biotechno1.-1992,34-35.-383～389[译自 DBA,1993,12（2）,93-00629]为了应用目的讨论了一些梭菌,特别是热解糖梭菌 DSM571的质粒可用性及其特性。样本包括热纤梭菌的质粒 pCT₁、pFA₇、pFB₇、pFA₁ 展开更多

关键词 载体构建 融合蛋白 穿梭载体 克隆位点 启动子调控 基因克隆 梭菌 克隆载体 外源基因 表达载体

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质粒研究与载体构建

19

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第9期21-27,共7页

关键词 载体构建 质粒表达载体 启动子调控 酵母人工染色体 转座子 融合蛋白 表达系统 同源重组 穿梭载体 外源基因

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质粒研究与载体构建

20

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第2期22-26,共5页

关键词 载体构建 基因融合 启动子 多克隆位点 表达载体 乳酸乳球菌 穿梭载体 转座子 外源基因 限制性位点

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