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兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体的制备和应用
被引量：
1
1
作者
袁露
徐文华
+5 位作者
葛婷婷
周慧萍
杨玲
杨凡
牛长敏
郑英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期846-851,共6页
目的 制备兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体并检测IQUB在小鼠睾丸中的表达情况。方法将IQUB蛋白编码序列全长插入pET-30a(+)载体,构建pET-30a-IQUB原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫...
目的 制备兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体并检测IQUB在小鼠睾丸中的表达情况。方法将IQUB蛋白编码序列全长插入pET-30a(+)载体,构建pET-30a-IQUB原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。利用组氨酸融合蛋白纯化柱纯化蛋白,使用梯度浓度的尿素复性原核蛋白。蛋白复性后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。免疫完成后ELISA测定多克隆抗体效价,应用Western blot及免疫荧光染色分析多克隆抗体的有效性与特异性。结果 成功构建了pET-30a-IQUB重组质粒,并通过IPTG诱导成功表达了原核蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶1 000 000,制备的多克隆抗体能识别成年野生型小鼠睾丸组织中的内源性IQUB蛋白,IQUB在成年小鼠睾丸的各级生精细胞表达,在成熟精子中定位于顶体及鞭毛。结论 成功制备出高特异性的兔抗小鼠IQUB多克隆抗体,可用于Western blot及免疫荧光组织化学染色。
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关键词
含
iq
基序及
泛素
结构域
蛋白
(
iqub
)
多克隆抗体
精子发生
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职称材料
题名
兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体的制备和应用
被引量：
1
1
作者
袁露
徐文华
葛婷婷
周慧萍
杨玲
杨凡
牛长敏
郑英
机构
扬州大学医学院组织学与胚胎学教研室
江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期846-851,共6页
基金
国家自然科学基金(82071696)
江苏省高校自然科学研究重大项目(20KJA310002)。
文摘
目的 制备兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体并检测IQUB在小鼠睾丸中的表达情况。方法将IQUB蛋白编码序列全长插入pET-30a(+)载体,构建pET-30a-IQUB原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。利用组氨酸融合蛋白纯化柱纯化蛋白,使用梯度浓度的尿素复性原核蛋白。蛋白复性后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。免疫完成后ELISA测定多克隆抗体效价,应用Western blot及免疫荧光染色分析多克隆抗体的有效性与特异性。结果 成功构建了pET-30a-IQUB重组质粒,并通过IPTG诱导成功表达了原核蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶1 000 000,制备的多克隆抗体能识别成年野生型小鼠睾丸组织中的内源性IQUB蛋白,IQUB在成年小鼠睾丸的各级生精细胞表达,在成熟精子中定位于顶体及鞭毛。结论 成功制备出高特异性的兔抗小鼠IQUB多克隆抗体,可用于Western blot及免疫荧光组织化学染色。
关键词
含
iq
基序及
泛素
结构域
蛋白
(
iqub
)
多克隆抗体
精子发生
Keywords
iq
and ub
iq
uitin-ike domain-containing protein(
iqub
)
polyclonal antibody
spermatogenes
分类号
Q954.434 [生物学—动物学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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1
兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体的制备和应用
袁露
徐文华
葛婷婷
周慧萍
杨玲
杨凡
牛长敏
郑英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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