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一种酿酒酵母同源重组载体的筛选: 1; 作者郑文岭江晓曦 +2 位作者崔东赵慧马文丽《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期89-92,共4页; 将携有mTn-3xHA/LacZ转座子的酿酒酵母文库质粒pHSS6转化大肠杆菌DH5α,挑取单菌落并提取其质粒.将纯化质粒分别用Not I酶切后,转化尿嘧啶缺陷型(ura-)酿酒酵母菌株INVSc1,使其同源重组到酿酒酵母基因组中,于SC/ura-平板上筛选.取长有... 展开更多; 关键词酿酒酵母同源重组转座子化学转化同源重组载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测: 2; 作者王英泽王巧兰 +4 位作者曹晴晴付育刘畅王晨晨杜朝《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期25-30,共6页; 为了构建能够灵活用于CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的供体质粒,利用pcDNA3.1(+)-HA-His为模板,分别扩增了其AmpR-ori片段和NeoR片段,然后连接,构建了一个简易型同源重组载体pAmpR-NeoR。载体的正选择标记NeoR基因两侧分别引入了BamHⅠ和... 展开更多; 关键词基因编辑同源重组载体同尾酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立被引量：2: 3; 作者魏明敏邱德文 +3 位作者曾洪梅黄建新杨秀芬袁京京《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期91-94,102,共5页; 构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用... 展开更多; 关键词嗜线虫致病杆菌同源重组载体重叠延伸引物PCR法结合转移; 在线阅读下载PDF 职称材料

含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建被引量：3: 4; 作者桂慕燕叶向群 +1 位作者吴春旭熊秀芳《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期628-633,共6页; 以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG35 0为出发质粒 ,插入增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体 pMD Fib IE EGFP ,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中 ,通过脂质体介... 展开更多; 关键词 EGFP 家蚕同源重组质粒载体增强型绿色荧光蛋白基因转基因蚕载体构建基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

变形链球菌luxS基因同源重组克隆载体的构建实验被引量：2: 5; 作者黄正蔚刘正《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期70-72,共3页; 目的构建luxS基因的同源重组克隆载体以备将来进行luxS基因同源重组knockout突变株的研究。方法利用高保真的pfuDNA聚合酶,通过嵌套式PCR的方法,分别扩增出变形链球菌luxS基因的上下游片段(Xup,Xdn)以及大肠杆菌pH1+质粒的卡那霉素抗性... 展开更多; 关键词变形链球菌 LUXS基因同源重组克隆载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑荷斯坦种公牛的无角Pc位点被引量：1: 6; 作者王欢朱化彬 +2 位作者李俊良邹惠影赵善江《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3343-3353,共11页; 试验旨在利用Tild-CRISPR/Cas9系统介导的同源重组技术制备纯合无角种公牛细胞系。针对控制无角性状的Pc靶位点设计sgRNA,T7E1酶切和测序检测突变效率;以pUC57为骨架连接Pc片段及其两侧约800 bp的同源序列左臂(L)和右臂(R),双酶切获得... 展开更多; 关键词荷斯坦奶牛无角 Pc位点 Tild-CRISPR/Cas9 同源重组载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种酿酒酵母同源重组载体的筛选: 1; 作者郑文岭江晓曦崔东赵慧马文丽; 机构华南理工大学生物工程系广州军区肿瘤分子生物学研究所第一军医大学分子生物学研究所; 出处《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期89-92,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(39880044 39880032) 广州市重点科技攻关项目(99-Z-022-01); 文摘将携有mTn-3xHA/LacZ转座子的酿酒酵母文库质粒pHSS6转化大肠杆菌DH5α,挑取单菌落并提取其质粒.将纯化质粒分别用Not I酶切后,转化尿嘧啶缺陷型(ura-)酿酒酵母菌株INVSc1,使其同源重组到酿酒酵母基因组中,于SC/ura-平板上筛选.取长有单菌落酵母的平板进一步筛选重组后上游有强启动子酿酒酵母文库质粒,用近300个质粒转化酵母菌株INVSc1,最终得到2株前端有强启动子的酿酒酵母质粒,这2个质粒可作为酿酒酵母同源重组载体广泛应用.; 关键词酿酒酵母同源重组转座子化学转化同源重组载体; Keywords Saccharomyces cerevisiae homologous recombination transposon chemical transfection homologous recombinant vector; 分类号 Q815 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测: 2; 作者王英泽王巧兰曹晴晴付育刘畅王晨晨杜朝; 机构河北科技大学生物科学与工程学院; 出处《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期25-30,共6页; 基金国家自然科学基金面上项目(81171455) 国家自然科学基金青年项目(31100715 +4 种基金 81402305) 中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室开放课题资助项目(NSKF201605); 文摘为了构建能够灵活用于CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的供体质粒,利用pcDNA3.1(+)-HA-His为模板,分别扩增了其AmpR-ori片段和NeoR片段,然后连接,构建了一个简易型同源重组载体pAmpR-NeoR。载体的正选择标记NeoR基因两侧分别引入了BamHⅠ和XhoⅠ作为克隆位点,用于左、右同源臂的克隆。利用这一载体,构建了针对小鼠FasL基因的供体质粒。结果显示靶序列发生基因编辑。pAmpR-NeoR以同尾酶作为多克隆位点,这使其具有良好的扩展性、灵活性和序列通用性,便于根据需要进一步改造,以满足具体试验的不同需求。; 关键词基因编辑同源重组载体同尾酶; Keywords Gene editing Homologous recombination vector Isocaudomers; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立被引量：2: 3; 作者魏明敏邱德文曾洪梅黄建新杨秀芬袁京京; 机构西北大学生命科学学院中国农业科学院植物保护研究所; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期91-94,102,共5页; 基金中国农业科学院植保所基本科研业务费用专项资金资助项目; 文摘构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用电激法将同源重组载体DNA转化到供体细菌,再利用二亲本结合转移方法将供体细菌中的载体转化到受体细菌CB6菌株。结果成功地扩增了Xna基因的左右同源臂及卡那抗性基因的全长融合片段、构建了Xna基因的同源重组载体,并建立了嗜线虫致病杆菌北京变种的遗传转化体系。; 关键词嗜线虫致病杆菌同源重组载体重叠延伸引物PCR法结合转移; Keywords Xenorhabdus nematophila Homologous recombinant vector Overlap extension PCR Conjugation; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建被引量：3: 4; 作者桂慕燕叶向群吴春旭熊秀芳; 机构厦门大学生命科学学院; 出处《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期628-633,共6页; 基金国家自然科学基金 (39870 410 ) 厦门大学校级自选课题 (Y0 70 14)资助项目; 文摘以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG35 0为出发质粒 ,插入增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体 pMD Fib IE EGFP ,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中 ,通过脂质体介导法转染胃癌细胞能发出很强的绿色荧光 ,表明该质粒能够在真核细胞中表达。; 关键词 EGFP 家蚕同源重组质粒载体增强型绿色荧光蛋白基因转基因蚕载体构建基因表达; Keywords enhanced green fluorescent protein transgenic silkworm plasmid vector; 分类号 S881.2 [农业科学—特种经济动物饲养] Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名变形链球菌luxS基因同源重组克隆载体的构建实验被引量：2: 5; 作者黄正蔚刘正; 机构上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科; 出处《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期70-72,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30400497) 上海市科委重点科研基金资助项目(04JC14066); 文摘目的构建luxS基因的同源重组克隆载体以备将来进行luxS基因同源重组knockout突变株的研究。方法利用高保真的pfuDNA聚合酶,通过嵌套式PCR的方法,分别扩增出变形链球菌luxS基因的上下游片段(Xup,Xdn)以及大肠杆菌pH1+质粒的卡那霉素抗性基因片段(Kana),依次采用相应的双酶切反应将这些片段连接入噬菌体载体pBluescriptS(K+)Phagemids,以构建目的质粒Xukd-pbsk重组载体。结果经酶切鉴定目的质粒各片段插入无误,插入片段的测序报告也显示碱基无错配,含目的质粒的菌株可在含30mg/L卡那霉素的LB培养基内生长良好,证明插入的卡那霉素抗性基因体外表达良好。结论本研究构建的变形链球菌luxS基因同源重组克隆载体正确,可用于今后对于变形链球菌luxS基因突变株构建的研究。; 关键词变形链球菌 LUXS基因同源重组克隆载体; Keywords Streptococcus mutans luxS gene allelic exchange plasmid; 分类号 R780.2 [医药卫生—口腔医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑荷斯坦种公牛的无角Pc位点被引量：1: 6; 作者王欢朱化彬李俊良邹惠影赵善江; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3343-3353,共11页; 基金中央级公益性科研院所基本科研业务费(2019-YWF-YB-03) 中央级公益性科研院所基本科研业务费(2020-YWF-YB-03) 中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS06)。; 文摘试验旨在利用Tild-CRISPR/Cas9系统介导的同源重组技术制备纯合无角种公牛细胞系。针对控制无角性状的Pc靶位点设计sgRNA,T7E1酶切和测序检测突变效率;以pUC57为骨架连接Pc片段及其两侧约800 bp的同源序列左臂(L)和右臂(R),双酶切获得同源重组片段后与sgRNA共同转染至荷斯坦种公牛耳缘成纤维细胞中,筛选获得单细胞克隆并鉴定。结果显示,试验成功构建了6个sgRNA(1-6),并筛选获得了突变效率最高的sgRNA1,其突变效率为32.6%;成功获得了长度为1901 bp基因序列完全正确的同源重组片段;共获得147个单细胞克隆,其中8个单细胞克隆发生正确的单等位Pc位点插入,1个单细胞克隆发生正确的双等位Pc位点插入。外源基因残留检测结果显示,单细胞克隆没有Cas9基因残留,可作为后续克隆生产优秀无角纯合胚胎的核供体细胞。本研究成功利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑的方法获得了Pc位点纯合插入的无外源Cas9基因残留的无角牛耳缘成纤维细胞系,为将来优秀无角体细胞克隆种公牛的培育以及主要功能基因研究提供了良好的材料储备和技术平台。; 关键词荷斯坦奶牛无角 Pc位点 Tild-CRISPR/Cas9 同源重组载体; Keywords Holstein dairy cows hornless Pc site Tild-CRISPR/Cas9 homologous recombinant vector; 分类号 S823.91 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	一种酿酒酵母同源重组载体的筛选	郑文岭江晓曦崔东赵慧马文丽	《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2004	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测	王英泽王巧兰曹晴晴付育刘畅王晨晨杜朝	《华北农学报》 CSCD 北大核心	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立	魏明敏邱德文曾洪梅黄建新杨秀芬袁京京	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建	桂慕燕叶向群吴春旭熊秀芳	《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2002	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	变形链球菌luxS基因同源重组克隆载体的构建实验	黄正蔚刘正	《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑荷斯坦种公牛的无角Pc位点	王欢朱化彬李俊良邹惠影赵善江	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料