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同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
1
作者
石禹
包小峰
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025年第2期113-119,共7页
目的利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用。方法根据Gen Bank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物...
目的利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用。方法根据Gen Bank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物进行纯化,质粒载体进行质粒抽提、质粒酶切、胶回收等处理。采用同源重组法将基因片段插入到目的载体进行片段融合构建cRNAP各亚基表达质粒,融合产物转化后用特异性引物进行PCR验证和测序。构建好的融合产物转化入大肠埃希菌化学感受态细胞表达蛋白。结果成功构建cRNAP各亚基质粒并成功表达cRNAP各亚基蛋白,研究了衣原体转录调节因子GrgA与cRNAP的直接相互作用是GrgA与cRNAP的α、β′亚基有结合,与β亚基无结合。两者可以作为衣原体感染治疗和预防的药物作用新靶点。结论同源重组法可用于构建cRNAP各亚基质粒并成功表达相应蛋白,并用于研究转录调节因子GrgA与cRNAP各亚基蛋白的结合位点,为衣原体感染治疗和预防药物作用新靶点的研究提供参考信息。
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关键词
同源重组法
衣原体
cRNAP
亚基
质粒载体
融合蛋白
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职称材料
人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
被引量：
1
2
作者
王晓军
王爱民
+6 位作者
张忠荣
吴思宇
郭庆山
吴军
贺伟峰
汤守营
张全顺
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2005年第2期167-170,共4页
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携...
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs) 进行感染。采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度。结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功, 病毒滴度可达2．5×108pfu／ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含 hOPG重组腺病毒载体。
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关键词
人骨保护素
基因
重组
腺病毒载体
adEasy系统
大鼠骨髓基质细胞
细菌内
同源重组法
基因工程技术
293细胞
PCR方
法
载体质粒
基因片段
大肠杆菌
骨架质粒
基因转染
酶切鉴定
病毒滴度
感染能力
G基因
hOP
计数
法
检测
荧光
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职称材料
美国《化学文摘》收录《眼科新进展》2006年论文目录(七)
3
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2010年第3期236-236,共1页
131 赵海生，王一．细菌内同源重组法构建LEDGFp52基因腺病毒载体及其体外表达[J]．眼科新进展，2006，26（12）：900-903． 132 龙华，姜发纲．MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义[J]．眼科新进展，2006，26（12）：908—910．
关键词
《眼科新进展》
《化学文摘》
细菌内
同源重组法
视网膜母细胞瘤
目录
论文
收录
美国
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职称材料
题名
同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
1
作者
石禹
包小峰
机构
南通大学附属南通第三医院药学部
南通大学药学院
出处
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025年第2期113-119,共7页
基金
国家自然科学基金(31370209)
南通市卫生健康委员会面上指令课题(MS2022064)。
文摘
目的利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用。方法根据Gen Bank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物进行纯化,质粒载体进行质粒抽提、质粒酶切、胶回收等处理。采用同源重组法将基因片段插入到目的载体进行片段融合构建cRNAP各亚基表达质粒,融合产物转化后用特异性引物进行PCR验证和测序。构建好的融合产物转化入大肠埃希菌化学感受态细胞表达蛋白。结果成功构建cRNAP各亚基质粒并成功表达cRNAP各亚基蛋白,研究了衣原体转录调节因子GrgA与cRNAP的直接相互作用是GrgA与cRNAP的α、β′亚基有结合,与β亚基无结合。两者可以作为衣原体感染治疗和预防的药物作用新靶点。结论同源重组法可用于构建cRNAP各亚基质粒并成功表达相应蛋白,并用于研究转录调节因子GrgA与cRNAP各亚基蛋白的结合位点,为衣原体感染治疗和预防药物作用新靶点的研究提供参考信息。
关键词
同源重组法
衣原体
cRNAP
亚基
质粒载体
融合蛋白
Keywords
homologous recombination method
chlamydia
cRNAP
subunit
plasmid vector
fusion protein
分类号
R374 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
被引量：
1
2
作者
王晓军
王爱民
张忠荣
吴思宇
郭庆山
吴军
贺伟峰
汤守营
张全顺
机构
第三军医大学大坪附属医院野战外科研究所全军战创中心骨创伤科
第三军医大学西南医院烧伤研究所
解放军第
出处
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2005年第2期167-170,共4页
文摘
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs) 进行感染。采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度。结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功, 病毒滴度可达2．5×108pfu／ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含 hOPG重组腺病毒载体。
关键词
人骨保护素
基因
重组
腺病毒载体
adEasy系统
大鼠骨髓基质细胞
细菌内
同源重组法
基因工程技术
293细胞
PCR方
法
载体质粒
基因片段
大肠杆菌
骨架质粒
基因转染
酶切鉴定
病毒滴度
感染能力
G基因
hOP
计数
法
检测
荧光
Keywords
Osteoporotegerin
Adenovirus
Homogenous recombination
Gene therapy
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
美国《化学文摘》收录《眼科新进展》2006年论文目录(七)
3
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2010年第3期236-236,共1页
文摘
131 赵海生，王一．细菌内同源重组法构建LEDGFp52基因腺病毒载体及其体外表达[J]．眼科新进展，2006，26（12）：900-903． 132 龙华，姜发纲．MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义[J]．眼科新进展，2006，26（12）：908—910．
关键词
《眼科新进展》
《化学文摘》
细菌内
同源重组法
视网膜母细胞瘤
目录
论文
收录
美国
分类号
R77-55 [医药卫生—眼科]
R-55 [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
石禹
包小峰
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
王晓军
王爱民
张忠荣
吴思宇
郭庆山
吴军
贺伟峰
汤守营
张全顺
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2005
1
在线阅读
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职称材料
3
美国《化学文摘》收录《眼科新进展》2006年论文目录(七)
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2010
0
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职称材料
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