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漆酶Lcc9在灰盖鬼伞菌中的同源过表达
1
作者
张晶娜
周刚
+2 位作者
刘娟娟
方泽民
肖亚中
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期47-51,共5页
为了高效制备漆酶Lcc9,克隆了Lcc9编码基因,利用酿酒酵母同源重组技术构建lcc9过表达载体并在Corprinopsis cinerea Okayama 7#130(OK7)和FA2222中进行同源过表达。经原生质体共转化、再生培养基初筛、最简培养基复筛,分别获得46株OK7...
为了高效制备漆酶Lcc9,克隆了Lcc9编码基因,利用酿酒酵母同源重组技术构建lcc9过表达载体并在Corprinopsis cinerea Okayama 7#130(OK7)和FA2222中进行同源过表达。经原生质体共转化、再生培养基初筛、最简培养基复筛,分别获得46株OK7和29株FA2222阳性转化子。摇瓶发酵结果显示,在Kjalke培养基中接种5%(体积分数),经37℃培养6~7 d后,OK7阳性菌株漆酶活力达到5.1~21.1 U/mL,FA2222阳性菌株漆酶活力达到3.7~12.3 U/mL,分别为野生型表达量的19.2和241.2倍。在3 L发酵罐中对FA2222阳性菌株进行漆酶的发酵制备,结果显示,经37℃、50 r/min培养108 h后菌株漆酶活力达59 U/mL,相比普通摇瓶发酵,漆酶活力进一步提高了4.8倍。
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关键词
漆酶
Lcc9
灰盖鬼伞
同源过表达
高密度发酵
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职称材料
同源过表达mhr2基因可提高嗜热毁丝霉纤维素酶活性
2
作者
龚艳芬
谢志臻
+1 位作者
赵胜明
王娟
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2017年第6期11-17,共7页
为寻找新型的与纤维素酶相关转录调控因子,以嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila ATCC42464)为研究材料,通过克隆嗜热毁丝霉mhr2基因序列,构建重组过表达载体,转化并筛选到转化子Mt O24中mhr2基因表达量比野生型菌株高204倍。蛋白...
为寻找新型的与纤维素酶相关转录调控因子,以嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila ATCC42464)为研究材料,通过克隆嗜热毁丝霉mhr2基因序列,构建重组过表达载体,转化并筛选到转化子Mt O24中mhr2基因表达量比野生型菌株高204倍。蛋白浓度及酶活测定的结果显示,诱导培养72 h,转化子胞外蛋白浓度和滤纸酶活分别是野生菌的1.58和1.30倍;非诱导培养144 h,转化子胞外蛋白浓度和滤纸酶活分别是野生菌的1.87和1.49倍。实时荧光定量PCR的结果表明,转化子中主要纤维素酶基因egl1、egl3和cbh1、cbh2的表达量均有显著提高。研究初步证实了mhr2基因具有调控纤维素酶基因表达的功能。
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关键词
嗜热毁丝霉
同源过表达
调控因子
纤维素酶
mhr2
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职称材料
题名
漆酶Lcc9在灰盖鬼伞菌中的同源过表达
1
作者
张晶娜
周刚
刘娟娟
方泽民
肖亚中
机构
安徽大学生命科学学院
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期47-51,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31870068)
安徽省自然科学基金杰出青年基金项目(2008085J12)。
文摘
为了高效制备漆酶Lcc9,克隆了Lcc9编码基因,利用酿酒酵母同源重组技术构建lcc9过表达载体并在Corprinopsis cinerea Okayama 7#130(OK7)和FA2222中进行同源过表达。经原生质体共转化、再生培养基初筛、最简培养基复筛,分别获得46株OK7和29株FA2222阳性转化子。摇瓶发酵结果显示,在Kjalke培养基中接种5%(体积分数),经37℃培养6~7 d后,OK7阳性菌株漆酶活力达到5.1~21.1 U/mL,FA2222阳性菌株漆酶活力达到3.7~12.3 U/mL,分别为野生型表达量的19.2和241.2倍。在3 L发酵罐中对FA2222阳性菌株进行漆酶的发酵制备,结果显示,经37℃、50 r/min培养108 h后菌株漆酶活力达59 U/mL,相比普通摇瓶发酵,漆酶活力进一步提高了4.8倍。
关键词
漆酶
Lcc9
灰盖鬼伞
同源过表达
高密度发酵
Keywords
Laccase
Lcc9
Coprinopsis cinerea
homologous overexpression
high-density fermentation
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
同源过表达mhr2基因可提高嗜热毁丝霉纤维素酶活性
2
作者
龚艳芬
谢志臻
赵胜明
王娟
机构
深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室
深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2017年第6期11-17,共7页
基金
深圳市科技计划基础研究项目(JYJC20140418091413587)
文摘
为寻找新型的与纤维素酶相关转录调控因子,以嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila ATCC42464)为研究材料,通过克隆嗜热毁丝霉mhr2基因序列,构建重组过表达载体,转化并筛选到转化子Mt O24中mhr2基因表达量比野生型菌株高204倍。蛋白浓度及酶活测定的结果显示,诱导培养72 h,转化子胞外蛋白浓度和滤纸酶活分别是野生菌的1.58和1.30倍;非诱导培养144 h,转化子胞外蛋白浓度和滤纸酶活分别是野生菌的1.87和1.49倍。实时荧光定量PCR的结果表明,转化子中主要纤维素酶基因egl1、egl3和cbh1、cbh2的表达量均有显著提高。研究初步证实了mhr2基因具有调控纤维素酶基因表达的功能。
关键词
嗜热毁丝霉
同源过表达
调控因子
纤维素酶
mhr2
Keywords
Myceliophthora thermophila
homologous overexpression
regulatory factor
cellulase
mhr2
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
漆酶Lcc9在灰盖鬼伞菌中的同源过表达
张晶娜
周刚
刘娟娟
方泽民
肖亚中
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
在线阅读
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职称材料
2
同源过表达mhr2基因可提高嗜热毁丝霉纤维素酶活性
龚艳芬
谢志臻
赵胜明
王娟
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2017
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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