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题名油菜油体钙蛋白基因BnClo1的克隆和表达
被引量：12
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作者
丁勇
陈庆波
徐春雷
常玮
甘莉
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机构
华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室
西南林学院资源学院
中国科学院昆明植物研究所
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出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期1921-1928,共8页
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基金
国家自然科学基金项目(30170600)
湖北省自然科学基金项目(2001ABD113)
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文摘
应用同源序列克隆法设计同源简并引物,结合RT-PCR和RACE-PCR技术,从甘蓝型油菜中分离克隆了编码28.1kD油体钙蛋白(caleosin)的基因BnClo1。其全长1058bp的BnClo1 mRNA(GenBank中序列号为AY966447)包含完整的开放阅读框和3′末端Poly(A)尾巴结构,染色体DNA结构上含6个外显子和5个内含子。Northern杂交结果表明,油菜中BnClo1在种子形成中期开始丰富表达,在种子形成后期,即种子开始脱水成熟时期,高量稳定地表达。半定量PCR结果显示,BnClo1在油菜种子吸水膨胀后前2d的茎中明显表达。证明在油菜种子发育期间,BnClo1对mRNA的转录表达是由胚胎发育来调控的,具有显著的时空特性,并与油体的形成和积累密切有关。推测的caleosin蛋白为245个氨基酸残基(GenBank中序列号为AAY40837)组成的两性蛋白质,主要含3个结构域即由N末端1～16位氨基酸残基组成的α-螺旋和17～61位氨基酸残基组成的强亲水性的随机卷曲构成的N-末端亲水性结构域;由80～120位氨基酸残基组成的中间疏水性结构域和C-末端亲水性结构域。N-末端亲水性结构域包含一个潜在的结合Ca2+的EF-手结构。中间疏水性结构域包含一个潜在的脯氨酸-结(proline-knot)模体,在92～114位氨基酸残基组成的α-螺旋跨膜区域,推测在caleosin蛋白与单层磷脂层和油体锚定结合上及增加种子油体的稳定性上起着重要的作用。
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关键词
油体钙蛋白
RACE
基因克隆
同源简并引物
序列分析
NORTHERN杂交
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Keywords
Caleosin
RACE
Gene cloning
Homology-degenerate primer
Sequence analysis
Northern blotting
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分类号
S565.4
[农业科学—作物学]
Q785
[生物学—分子生物学]
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