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基于同源重组的CRISPR精准基因编辑技术及其在农作物育种中的应用被引量：4: 1; 作者江桐欣李晓琳 +5 位作者朱庆锋张琪张爱霞刘勤坚于洋刘文华《广东农业科学》 CAS 2022年第11期119-127,共9页; 随着CRISPR基因编辑技术的出现,几乎在任何动植物细胞基因组的特定目标位点,DNA大片段的“无缝”插入或替换,均可在CRISPR核酸酶产生双链切口后,在供体DNA存在的情况下,诱导同源定向修复来实现。目前,这种基于同源重组的CRISPR精准基因... 展开更多; 关键词 CRISPR DNA双链切口同源重组同源定向修复基因编辑; 在线阅读下载PDF 职称材料

MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率: 2; 作者欧浩李国玲 +5 位作者王豪强黄广燕蔡更元李紫聪吴珍芳张献伟《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期327-336,共10页; 基因组DNA发生双链断裂(double strand break, DSB)后主要通过同源定向修复(homologous-directed repair, HDR)和非同源末端连接(nonhomologous end joining, NHEJ)两种途径进行修复,其中单链寡聚核苷酸(single-stranded oligodeoxyribo... 展开更多; 关键词 MEK抑制剂同源定向修复(hdr) PD0325901 基因编辑; 在线阅读下载PDF 职称材料

不同CRISPR/Cas9供体适配基因编辑系统的比较及优化研究: 3; 作者马宝霞杨森 +6 位作者吕明王昱人常立业韩艺帆王建刚郭杨徐坤《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期466-477,共12页; 在哺乳动物细胞中进行基因敲入通常采用同源定向修复(homology-directed repair,HDR)机制将外源DNA模板整合到目标基因组靶点中。然而HDR效率往往较低,其中外源DNA模板与目标基因组靶点的共定位是关键限制因素之一。为提高CRISPR/Cas9... 展开更多; 关键词基因编辑基因敲入 CRISPR/Cas9 供体适配同源定向修复; 在线阅读下载PDF 职称材料

提高CRISPR/Cas9介导的动物基因组精确插入效率研究进展被引量：4: 4; 作者李国玲杨善欣 +1 位作者吴珍芳张献伟《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期641-656,共16页; 基因编辑技术是指通过人为方式在基因组插入、缺失或替换特定碱基,对遗传物质进行精确修饰和定向编辑的一种技术。近年来,锌指核酸内切酶(zinc-finger endonuclease, ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like ef... 展开更多; 关键词基因编辑 CRISPR/Cas9 精确插入同源定向修复非同源末端连接; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于同源重组的CRISPR精准基因编辑技术及其在农作物育种中的应用被引量：4: 1; 作者江桐欣李晓琳朱庆锋张琪张爱霞刘勤坚于洋刘文华; 机构广东省农业科学院农业生物基因研究中心/广东省农作物种质资源保存与利用重点实验室仲恺农业工程学院农业与生物学院; 出处《广东农业科学》 CAS 2022年第11期119-127,共9页; 基金广东省基础与应用基础研究区域联合基金-重点项目(2019B515120061) 广东省重点领域研发计划项目(2018B020202006) +1 种基金广东省科技计划项目(2020B121201013)。; 文摘随着CRISPR基因编辑技术的出现,几乎在任何动植物细胞基因组的特定目标位点,DNA大片段的“无缝”插入或替换,均可在CRISPR核酸酶产生双链切口后,在供体DNA存在的情况下,诱导同源定向修复来实现。目前,这种基于同源重组的CRISPR精准基因编辑在农作物基因功能分析和新技术育种中正发挥着越来越重要的作用。围绕在植物细胞中高效实现同源重组介导的CRISPR精准编辑这一目标,简述CRISPR精准编辑依赖的两种主要的基于同源重组的细胞修复机制,即合成依赖的链退火修复机制和非同源末端连接辅助的单链退火修复机制;在此基础上,详述产生DNA双链切口并诱导同源重组定向修复的CRISPR核酸酶和供体DNA/RNA,主要包括Cas9/12及其融合蛋白、sgRNA/crRNA及其修饰物、供体DNA/RNA及其修饰物;进而总结在植物遗传转化中为保障DNA双链切口和供体DNA/RNA发生的时空一致性以提高同源重组效率,而通常采用的CRISPR组分及供体DNA/RNA细胞递送方式;最后从功能基因组学研究和农作物新技术育种等方面,展望基于同源重组的CRISPR精准基因编辑技术的应用前景。; 关键词 CRISPR DNA双链切口同源重组同源定向修复基因编辑; Keywords CRISPR DNA double-strand break homologous recombination homology-directed repair gene editing; 分类号 S182 [农业科学—农业基础科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率: 2; 作者欧浩李国玲王豪强黄广燕蔡更元李紫聪吴珍芳张献伟; 机构华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心温氏食品集团股份有限公司; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期327-336,共10页; 基金国家自然科学基金项目(编号:31772555) 国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)资助~~; 文摘基因组DNA发生双链断裂(double strand break, DSB)后主要通过同源定向修复(homologous-directed repair, HDR)和非同源末端连接(nonhomologous end joining, NHEJ)两种途径进行修复,其中单链寡聚核苷酸(single-stranded oligodeoxyribonucleotide, ssODN)介导的同源定向修复是动物基因组常用的基因组定点修饰技术,具有较大的科研和应用价值。为提高猪基因组ssODN介导HDR效率,本研究以猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts, PFFs)为研究对象,利用丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase, MEK)抑制剂PD0325901培养细胞,研究其对HDR效率的影响及作用分子机理。结果显示,PD0325901能显著提高PFFs的G_2期和S期细胞群百分比,减少G_1期细胞群比率,促进HDR修复因子的表达。在最适浓度250 nmol/L时,PD0325901使ssODN介导的GFP报告载体的修复效率提高了58.8%;同时使PFFs基因组位点DMD和ROSA26定点修饰效率分别提高了48.16%和17.64%。本研究表明,MEK抑制剂PD0325901能显著提高猪基因组ssODN介导的同源定向修复效率,为高效制备定点基因修饰动物模型提供了新思路。; 关键词 MEK抑制剂同源定向修复(hdr) PD0325901 基因编辑; Keywords MEK inhibitor homologous-directed repair (hdr) PD0325901 gene editing; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] R-332 [医药卫生]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名不同CRISPR/Cas9供体适配基因编辑系统的比较及优化研究: 3; 作者马宝霞杨森吕明王昱人常立业韩艺帆王建刚郭杨徐坤; 机构西北农林科技大学动物科技学院新疆维吾尔自治区畜牧总站; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期466-477,共12页; 基金科技创新2030−农业生物育种重大项目(编号:2023ZD04074,2023ZD04051)资助。; 文摘在哺乳动物细胞中进行基因敲入通常采用同源定向修复(homology-directed repair,HDR)机制将外源DNA模板整合到目标基因组靶点中。然而HDR效率往往较低,其中外源DNA模板与目标基因组靶点的共定位是关键限制因素之一。为提高CRISPR/Cas9系统介导的HDR效率,本团队及前人研究将不同接头蛋白与SpCas9蛋白融合表达,利用其与特异性DNA序列结合的特性,构建了多种CRISPR/SpCas9供体适配基因编辑系统。为了便于比较、优化不同CRISPR/Cas9供体适配系统,本研究利用这些系统在HEK293T细胞GAPDH和ACTB基因末位外显子3′-端进行了eGFP基因敲入,并采用了优化的供体DNA模板设计方式,通过PCR和Sanger测序检测敲入的准确性,流式细胞分析进行敲入效率的检测。结果表明,将yGal4BD、hGal4BD、hLacI、hTHAP11和N57等接头蛋白与SpCas9蛋白C-端融合对其活性均无显著性影响;在GAPDH位点上,SpCas9融合yGal4BD、hGal4BD、hLacI和hTHAP11的供体适配系统等均能显著提高敲入效率;在ACTB位点上,SpCas9融合yGal4BD和hGal4BD能显著提高敲入效率;且增加供体DNA模板中的结合序列(binding sequence,BS)数量,有利于提高SpCas9-hTHAP11系统介导的敲入效率。总之,本研究比较并优化了不同的CRISPR/Cas9供体适配基因编辑系统,为后续相关的基因编辑应用研究提供了参考和借鉴。; 关键词基因编辑基因敲入 CRISPR/Cas9 供体适配同源定向修复; Keywords gene editing gene knock-in CRISPR/Cas9 donor adapting homology-directed repair; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名提高CRISPR/Cas9介导的动物基因组精确插入效率研究进展被引量：4: 4; 作者李国玲杨善欣吴珍芳张献伟; 机构华南农业大学动物科学学院温氏食品集团股份有限公司; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期641-656,共16页; 基金国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)资助。; 文摘基因编辑技术是指通过人为方式在基因组插入、缺失或替换特定碱基,对遗传物质进行精确修饰和定向编辑的一种技术。近年来,锌指核酸内切酶(zinc-finger endonuclease, ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)、成簇规律间隔短回文重复序列及其相关系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9, CRISPR/Cas9)等基因编辑技术的出现,使特异性靶向修饰动物基因组序列成为可能。虽然利用CRISPR/Cas9等基因编辑工具可以在细胞基因组高效产生双链断裂(double-strand breaks, DSB),但利用同源定向修复(homology directed repair, HDR)介导的精确插入(knock in, KI)效率却十分低下。本文结合当前基因编辑技术的发展现状,对目前提高CRISPR/Cas9介导的动物基因组KI策略进行了综述,以期为人类疾病模型制备、基因治疗和家畜遗传改良等提供借鉴。; 关键词基因编辑 CRISPR/Cas9 精确插入同源定向修复非同源末端连接; Keywords gene editing CRISPR/Cas9 knock in homology directed repair non-homologous end joining; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于同源重组的CRISPR精准基因编辑技术及其在农作物育种中的应用	江桐欣李晓琳朱庆锋张琪张爱霞刘勤坚于洋刘文华	《广东农业科学》 CAS	2022	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率	欧浩李国玲王豪强黄广燕蔡更元李紫聪吴珍芳张献伟	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2019	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	不同CRISPR/Cas9供体适配基因编辑系统的比较及优化研究	马宝霞杨森吕明王昱人常立业韩艺帆王建刚郭杨徐坤	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	提高CRISPR/Cas9介导的动物基因组精确插入效率研究进展	李国玲杨善欣吴珍芳张献伟	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2020	4	在线阅读下载PDF 职称材料