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glmU基因单功能敲除对大肠杆菌生产氨基葡萄糖的影响
被引量：
2
1
作者
董瑞真
李丕武
+2 位作者
石凤
李康
汪俊卿
《中国酿造》
CAS
北大核心
2018年第4期23-27,共5页
大肠杆菌中的glmU是葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶/葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶双功能基因。同源单交换方法敲除大肠杆菌中葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶单结构域基因glmU,即利用重叠PCR将葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶结构域内603bp序列与抗性基因amp...
大肠杆菌中的glmU是葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶/葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶双功能基因。同源单交换方法敲除大肠杆菌中葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶单结构域基因glmU,即利用重叠PCR将葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶结构域内603bp序列与抗性基因ampR连接,经过末端单酶切(HindⅢ)后电转化至大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞中,经同源臂单交换,将抗性基因ampR整合至glmU基因内部,实现该结构域功能失活的同时,保留葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶功能域活性。通过发酵实验分析glmU单结构域缺失在大肠杆菌中对氨基葡萄糖生产的影响。结果表明,发酵20h后重组菌的氨基葡萄糖产量为1 049.6mg/L,为原始菌E.coliBL21氨基葡萄糖产量103.34mg/L的10.2倍。表明glmU是影响大肠杆菌产生氨基葡萄糖的关键基因,敲除glmU基因可增加氨基葡萄糖积累。
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关键词
氨基葡萄糖
glmU基因
大肠杆菌
单
功能基因敲除
同源单交换
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职称材料
热带假丝酵母ctfat1p基因在吸收脂肪族化合物中的功能研究
被引量：
1
2
作者
石莹
杨晓慧
+4 位作者
马春玲
王腾飞
肖静
王瑞明
汪俊卿
《中国酿造》
CAS
北大核心
2017年第3期132-137,共6页
以热带假丝酵母(Candida tropicalis)1798中的ctfat1p基因为研究对象,利用重叠PCR将ctfat1p基因内约500 bp片段与G418抗性基因(kan^r)相连接,经末端单酶切后电转化至C.tropicalis 1798感受态细胞中,通过一次同源单交换,将抗性基因kan^r...
以热带假丝酵母(Candida tropicalis)1798中的ctfat1p基因为研究对象,利用重叠PCR将ctfat1p基因内约500 bp片段与G418抗性基因(kan^r)相连接,经末端单酶切后电转化至C.tropicalis 1798感受态细胞中,通过一次同源单交换,将抗性基因kan^r插入至ctfat1p基因内部,实现目的基因的敲除,并通过发酵实验分析Ctfat1p在热带假丝酵母脂肪酸跨膜转运过程中的功能。结果表明,经过G418抗性筛选和基因组PCR鉴定,成功获得ctfat1p基因缺失菌株C.tropicalis 1798△ctfat1p;分析发现ctfat1p基因敲除对C.tropicalis 1798以油脂为底物培养12h后重组菌OD_(600nm)值仅为野生型菌株的47.9%,表明ctfat1p基因敲除后影响C.tropicalis 1798对油脂吸收利用。通过基因敲除手段构建ctfat1p基因缺失菌株,可以减弱细胞对长链脂肪酸的摄取,验证了ctfat1p基因为热带假丝酵母油脂吸收和利用的关键基因。
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关键词
ctfat1p基因
热带假丝酵母
基因敲除
同源单交换
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职称材料
鱼腥藻PCC7120基因alr0267敲除及其功能的初步研究
被引量：
1
3
作者
曹必溥
傅雪琳
+1 位作者
蔡晓丹
何平
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2016年第6期157-166,共10页
【目的】敲除鱼腥藻PCC7120的alr0267基因，并对其功能进行初步研究。[方法】克隆获得鱼腥藻PCC7120alr0267基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻PCC7120中的alr0267基因敲除，并对敲除体...
【目的】敲除鱼腥藻PCC7120的alr0267基因，并对其功能进行初步研究。[方法】克隆获得鱼腥藻PCC7120alr0267基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻PCC7120中的alr0267基因敲除，并对敲除体进行纯化和PCR鉴定，然后对alr0267敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计，同时采用实时荧光定量PCR，在培养不同时间（O，3，8，24h和10d）检测野生型和alr0267基因敲除体中与异形胞功能相关基因all0813、all2736、alr2887的相对表达量。【结果】鱼腥藻PCC7120alr0267基因被成功敲除；在缺氮条件下培养6-12d，敲除体异形胞营养细胞数的均值明显少于野生型；实时定量PCR分析表明，野生型中all0813、all2736、alr2887基因表达量均在培养24h达到最大，敲除体中这3个基因最大相对表达量的出现时间均有所延迟。【结论】alr0267基因敲除导致异形胞分化频率增加，同时影响异形胞的正常发育。
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关键词
鱼腥藻PCC
7120
alr0267基因
异形胞
单
交换
同源
重组
实时荧光定量PCR
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职称材料
题名
glmU基因单功能敲除对大肠杆菌生产氨基葡萄糖的影响
被引量：
2
1
作者
董瑞真
李丕武
石凤
李康
汪俊卿
机构
齐鲁工业大学生物工程学院山东省微生物工程重点实验室
出处
《中国酿造》
CAS
北大核心
2018年第4期23-27,共5页
基金
山东省自然科学基金(ZR2016CB04)
文摘
大肠杆菌中的glmU是葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶/葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶双功能基因。同源单交换方法敲除大肠杆菌中葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶单结构域基因glmU,即利用重叠PCR将葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶结构域内603bp序列与抗性基因ampR连接,经过末端单酶切(HindⅢ)后电转化至大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞中,经同源臂单交换,将抗性基因ampR整合至glmU基因内部,实现该结构域功能失活的同时,保留葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶功能域活性。通过发酵实验分析glmU单结构域缺失在大肠杆菌中对氨基葡萄糖生产的影响。结果表明,发酵20h后重组菌的氨基葡萄糖产量为1 049.6mg/L,为原始菌E.coliBL21氨基葡萄糖产量103.34mg/L的10.2倍。表明glmU是影响大肠杆菌产生氨基葡萄糖的关键基因,敲除glmU基因可增加氨基葡萄糖积累。
关键词
氨基葡萄糖
glmU基因
大肠杆菌
单
功能基因敲除
同源单交换
Keywords
glucosamine
gene glmU
Escherichia coli
single function knockout
homologous single exchange
分类号
TS201.1 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
热带假丝酵母ctfat1p基因在吸收脂肪族化合物中的功能研究
被引量：
1
2
作者
石莹
杨晓慧
马春玲
王腾飞
肖静
王瑞明
汪俊卿
机构
齐鲁工业大学生物工程学院山东省微生物工程重点实验室
出处
《中国酿造》
CAS
北大核心
2017年第3期132-137,共6页
基金
山东省自主创新及成果转化专项(No.201422CX02602)
文摘
以热带假丝酵母(Candida tropicalis)1798中的ctfat1p基因为研究对象,利用重叠PCR将ctfat1p基因内约500 bp片段与G418抗性基因(kan^r)相连接,经末端单酶切后电转化至C.tropicalis 1798感受态细胞中,通过一次同源单交换,将抗性基因kan^r插入至ctfat1p基因内部,实现目的基因的敲除,并通过发酵实验分析Ctfat1p在热带假丝酵母脂肪酸跨膜转运过程中的功能。结果表明,经过G418抗性筛选和基因组PCR鉴定,成功获得ctfat1p基因缺失菌株C.tropicalis 1798△ctfat1p;分析发现ctfat1p基因敲除对C.tropicalis 1798以油脂为底物培养12h后重组菌OD_(600nm)值仅为野生型菌株的47.9%,表明ctfat1p基因敲除后影响C.tropicalis 1798对油脂吸收利用。通过基因敲除手段构建ctfat1p基因缺失菌株,可以减弱细胞对长链脂肪酸的摄取,验证了ctfat1p基因为热带假丝酵母油脂吸收和利用的关键基因。
关键词
ctfat1p基因
热带假丝酵母
基因敲除
同源单交换
Keywords
gene ctfatlp
Candida tropicalis
gene knockout
homologous single exchange
分类号
Q815 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
鱼腥藻PCC7120基因alr0267敲除及其功能的初步研究
被引量：
1
3
作者
曹必溥
傅雪琳
蔡晓丹
何平
机构
华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室
华南农业大学农学院
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2016年第6期157-166,共10页
基金
广东省自然科学基金项目(S2013010013184)
公益性行业(农业)科研专项(201003021)
国家自然科学基金项目(50977041)
文摘
【目的】敲除鱼腥藻PCC7120的alr0267基因，并对其功能进行初步研究。[方法】克隆获得鱼腥藻PCC7120alr0267基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻PCC7120中的alr0267基因敲除，并对敲除体进行纯化和PCR鉴定，然后对alr0267敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计，同时采用实时荧光定量PCR，在培养不同时间（O，3，8，24h和10d）检测野生型和alr0267基因敲除体中与异形胞功能相关基因all0813、all2736、alr2887的相对表达量。【结果】鱼腥藻PCC7120alr0267基因被成功敲除；在缺氮条件下培养6-12d，敲除体异形胞营养细胞数的均值明显少于野生型；实时定量PCR分析表明，野生型中all0813、all2736、alr2887基因表达量均在培养24h达到最大，敲除体中这3个基因最大相对表达量的出现时间均有所延迟。【结论】alr0267基因敲除导致异形胞分化频率增加，同时影响异形胞的正常发育。
关键词
鱼腥藻PCC
7120
alr0267基因
异形胞
单
交换
同源
重组
实时荧光定量PCR
Keywords
Anabaena sp. PCC 7120
altO267 gene
heterocyst
single-crossover homologus integration
real-time PCR
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
glmU基因单功能敲除对大肠杆菌生产氨基葡萄糖的影响
董瑞真
李丕武
石凤
李康
汪俊卿
《中国酿造》
CAS
北大核心
2018
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
热带假丝酵母ctfat1p基因在吸收脂肪族化合物中的功能研究
石莹
杨晓慧
马春玲
王腾飞
肖静
王瑞明
汪俊卿
《中国酿造》
CAS
北大核心
2017
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
鱼腥藻PCC7120基因alr0267敲除及其功能的初步研究
曹必溥
傅雪琳
蔡晓丹
何平
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2016
1
在线阅读
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职称材料
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