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猪嗜血支原体OxaA基因的同义定点突变、克隆及在Vero细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
刘明明
贾立军
+2 位作者
薛书江
梁晚枫
张守发
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期592-594,共3页
为真核表达猪嗜血支原体(Mycoplasma suis)膜蛋白OxaA基因,本实验采用PCR技术扩增包含OxaA基因全长在内的1 561 bp序列,通过引物突变法对OxaA基因内部的两个编码蛋白障碍的碱基进行同义定点突变,应用Overlap PCR技术将3对引物扩增得到的...
为真核表达猪嗜血支原体(Mycoplasma suis)膜蛋白OxaA基因,本实验采用PCR技术扩增包含OxaA基因全长在内的1 561 bp序列,通过引物突变法对OxaA基因内部的两个编码蛋白障碍的碱基进行同义定点突变,应用Overlap PCR技术将3对引物扩增得到的OxaA片段进行拼接,获得能够正确翻译膜蛋白的OxaA基因序列,将鉴定正确的pVAX-OxaA重组质粒转染Vero细胞,应用IFA和western blot方法鉴定OxaA基因在Vero细胞中的表达。结果显示,突变的OxaA基因经Overlap PCR扩增获得长度为747 bp的基因片段,与GenBank中M.suis基因组的核苷酸序列同源性为98%,IFA检测OxaA基因在Vero细胞中获得瞬时表达,western blot分析表达蛋白的分子量为29 ku,具有较好的反应原性。本实验首次在真核细胞中表达了M.suis的QxaA基因,为M.suis基因疫苗的研究奠定了基础。
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关键词
猪嗜血支原体
OxaA基因
同义定点突变
真核表达
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职称材料
题名
猪嗜血支原体OxaA基因的同义定点突变、克隆及在Vero细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
刘明明
贾立军
薛书江
梁晚枫
张守发
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期592-594,共3页
基金
公益性行业(农业)科研专项(200903036-13)
文摘
为真核表达猪嗜血支原体(Mycoplasma suis)膜蛋白OxaA基因,本实验采用PCR技术扩增包含OxaA基因全长在内的1 561 bp序列,通过引物突变法对OxaA基因内部的两个编码蛋白障碍的碱基进行同义定点突变,应用Overlap PCR技术将3对引物扩增得到的OxaA片段进行拼接,获得能够正确翻译膜蛋白的OxaA基因序列,将鉴定正确的pVAX-OxaA重组质粒转染Vero细胞,应用IFA和western blot方法鉴定OxaA基因在Vero细胞中的表达。结果显示,突变的OxaA基因经Overlap PCR扩增获得长度为747 bp的基因片段,与GenBank中M.suis基因组的核苷酸序列同源性为98%,IFA检测OxaA基因在Vero细胞中获得瞬时表达,western blot分析表达蛋白的分子量为29 ku,具有较好的反应原性。本实验首次在真核细胞中表达了M.suis的QxaA基因,为M.suis基因疫苗的研究奠定了基础。
关键词
猪嗜血支原体
OxaA基因
同义定点突变
真核表达
Keywords
Mycoplasma suis
OxaA gene
synonymous site directed mutation
eukaryotic expression
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪嗜血支原体OxaA基因的同义定点突变、克隆及在Vero细胞中的表达
刘明明
贾立军
薛书江
梁晚枫
张守发
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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