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甘薯叶绿体表达载体构建及其融合基因在叶绿体中的瞬间表达
被引量：
7
1
作者
王玉华
张秀海
+3 位作者
吴忠义
王永勤
黄丛林
贾敬芬
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期1747-1755,共9页
利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoeabatatas)叶绿体基因组中克隆了2个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),并以此作为定点整合外源基...
利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoeabatatas)叶绿体基因组中克隆了2个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体基因组的强启动子Prrn和Rps-bA-pro分别驱动选择标记基因aadA及phaC-gfp融合基因,构建成表达盒prrn-aadA-TpsbA-ter与RpsbA-pro-phaC-gfp-RpsbA-ter,然后将这2个表达盒串联在一起克隆进甘薯叶绿体同源片段中,获得甘薯叶绿体定点整合表达载体pSC-GFP。酶切分析证明,所构建的载体符合预期设计;采用该载体对甘薯叶片进行基因枪转化,结果显示,phaC-gfp融合基因可在叶绿体特异启动子和终止子的调控下在甘薯幼嫩叶片中瞬间表达,证明构建的载体pSC-GFP可用于甘薯叶绿体转化。
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关键词
甘薯
叶绿体
同源片段
叶绿体表达载体
瞬间
表达
中长链聚羟基脂肪酸酯
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职称材料
玉米叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测
被引量：
2
2
作者
赵彤
黄丛林
+3 位作者
张秀海
于荣
王永勤
吴忠义
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2008年第4期72-76,共5页
Tps1是生物保护物质海藻糖的关键合酶基因。构建含Tps1的玉米叶绿体表达载体,首先从玉米叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段;然后将编码酵母海藻糖合酶基因Tps1表达盒(Prrn-Tps1-TpsbA-ter)、草丁膦抗性基因...
Tps1是生物保护物质海藻糖的关键合酶基因。构建含Tps1的玉米叶绿体表达载体,首先从玉米叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段;然后将编码酵母海藻糖合酶基因Tps1表达盒(Prrn-Tps1-TpsbA-ter)、草丁膦抗性基因Bar表达盒(RpsbApro-Bar-RpsbAter)、卡那霉素抗性基因Npt II和绿色荧光蛋白基因Gfp构建的融和基因表达盒(Prrn-Npt II/Gfp-RrbcLter)一起克隆到定点整合同源片段之间,构建了玉米叶绿体的稳定表达载体mTKGB。通过基因枪轰击法将mTKGB转化到玉米幼嫩叶片中,培养2 d后,在激光扫描共聚焦显微镜下观测到玉米一些细胞的叶绿体中有很强的GFP绿色荧光,结果表明构建的载体可在玉米叶绿体中表达。
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关键词
玉米
叶绿体表达载体
瞬时
表达
GFP荧光
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职称材料
一个新型原核诱导表达系统的建立
3
作者
刘征
高双成
+3 位作者
杨尚君
孙宁
杜蕊
赵彦宏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期145-149,共5页
群体感应是细菌依赖于种群密度进行信息交流、协调群体行为并调控基因表达的一种方式。海洋发光弧菌Vibriofischeri利用该机制合成化学物质N-酰基-高丝氨酸内酯(AHLs),与LuxR蛋白结合,随后驱动下游生物荧光基因的高量表达。基于植物叶...
群体感应是细菌依赖于种群密度进行信息交流、协调群体行为并调控基因表达的一种方式。海洋发光弧菌Vibriofischeri利用该机制合成化学物质N-酰基-高丝氨酸内酯(AHLs),与LuxR蛋白结合,随后驱动下游生物荧光基因的高量表达。基于植物叶绿体起源于原始古细菌-蓝藻的假设以及叶绿体内的转录、翻译机制与原核生物高度近似,构建了luxR基因调控下游报告基因GFP表达的叶绿体遗传转化载体。将该载体转入大肠杆菌后,当无外加信号物质AHLs时,GFP不表达;而外加AHLs后,GFP大量表达,证明luxR和GFP基因的组合在大肠杆菌中是理想的化学诱导基因表达系统,可应用于大肠杆菌基因功能的研究。
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关键词
群体感应
LuxR基因
AHLs
化学诱导基因
表达
叶绿体表达载体
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职称材料
题名
甘薯叶绿体表达载体构建及其融合基因在叶绿体中的瞬间表达
被引量：
7
1
作者
王玉华
张秀海
吴忠义
王永勤
黄丛林
贾敬芬
机构
西北大学生命科学学院/陕西省生物技术重点实验室/西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室
北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期1747-1755,共9页
基金
国家自然科学基金(30900914)
陕西省教育厅专项(09JK777)
西北大学重点实验室开放基金资助
文摘
利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoeabatatas)叶绿体基因组中克隆了2个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体基因组的强启动子Prrn和Rps-bA-pro分别驱动选择标记基因aadA及phaC-gfp融合基因,构建成表达盒prrn-aadA-TpsbA-ter与RpsbA-pro-phaC-gfp-RpsbA-ter,然后将这2个表达盒串联在一起克隆进甘薯叶绿体同源片段中,获得甘薯叶绿体定点整合表达载体pSC-GFP。酶切分析证明,所构建的载体符合预期设计;采用该载体对甘薯叶片进行基因枪转化,结果显示,phaC-gfp融合基因可在叶绿体特异启动子和终止子的调控下在甘薯幼嫩叶片中瞬间表达,证明构建的载体pSC-GFP可用于甘薯叶绿体转化。
关键词
甘薯
叶绿体
同源片段
叶绿体表达载体
瞬间
表达
中长链聚羟基脂肪酸酯
Keywords
sweet potato
chloroplast homologous fragments
chloroplast expression vector
transient expression
medium-chain-length-polyhydroxybutyrates
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
玉米叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测
被引量：
2
2
作者
赵彤
黄丛林
张秀海
于荣
王永勤
吴忠义
机构
北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心
首都师范大学生命科学学院
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2008年第4期72-76,共5页
基金
北京市自然科学基金项目(5062012)
国家自然科学基金项目(30400228
30600318)
文摘
Tps1是生物保护物质海藻糖的关键合酶基因。构建含Tps1的玉米叶绿体表达载体,首先从玉米叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段;然后将编码酵母海藻糖合酶基因Tps1表达盒(Prrn-Tps1-TpsbA-ter)、草丁膦抗性基因Bar表达盒(RpsbApro-Bar-RpsbAter)、卡那霉素抗性基因Npt II和绿色荧光蛋白基因Gfp构建的融和基因表达盒(Prrn-Npt II/Gfp-RrbcLter)一起克隆到定点整合同源片段之间,构建了玉米叶绿体的稳定表达载体mTKGB。通过基因枪轰击法将mTKGB转化到玉米幼嫩叶片中,培养2 d后,在激光扫描共聚焦显微镜下观测到玉米一些细胞的叶绿体中有很强的GFP绿色荧光,结果表明构建的载体可在玉米叶绿体中表达。
关键词
玉米
叶绿体表达载体
瞬时
表达
GFP荧光
Keywords
Maize
Chloroplast expression vector
Transient expression
GFP
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
一个新型原核诱导表达系统的建立
3
作者
刘征
高双成
杨尚君
孙宁
杜蕊
赵彦宏
机构
河北大学生命科学学院
河南科技大学农学院
保定师范附属学校
鲁东大学农学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期145-149,共5页
基金
教育部留学回国人员科研启动基金项目[(2011)1139号]
河北大学引进人才项目(2010-185)
+1 种基金
山东省中青年科学家奖励基金项目(BS2009NY014)
国家自然科学基金项目(30800682)
文摘
群体感应是细菌依赖于种群密度进行信息交流、协调群体行为并调控基因表达的一种方式。海洋发光弧菌Vibriofischeri利用该机制合成化学物质N-酰基-高丝氨酸内酯(AHLs),与LuxR蛋白结合,随后驱动下游生物荧光基因的高量表达。基于植物叶绿体起源于原始古细菌-蓝藻的假设以及叶绿体内的转录、翻译机制与原核生物高度近似,构建了luxR基因调控下游报告基因GFP表达的叶绿体遗传转化载体。将该载体转入大肠杆菌后,当无外加信号物质AHLs时,GFP不表达;而外加AHLs后,GFP大量表达,证明luxR和GFP基因的组合在大肠杆菌中是理想的化学诱导基因表达系统,可应用于大肠杆菌基因功能的研究。
关键词
群体感应
LuxR基因
AHLs
化学诱导基因
表达
叶绿体表达载体
Keywords
Quorum sensing LuxRgene AHLs Chemical inducible gene expression Chloroplast transformation vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甘薯叶绿体表达载体构建及其融合基因在叶绿体中的瞬间表达
王玉华
张秀海
吴忠义
王永勤
黄丛林
贾敬芬
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
玉米叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测
赵彤
黄丛林
张秀海
于荣
王永勤
吴忠义
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2008
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
一个新型原核诱导表达系统的建立
刘征
高双成
杨尚君
孙宁
杜蕊
赵彦宏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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职称材料
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