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可调控性鼠PLP-Ig嵌合体重组腺病毒载体的构建和表达
被引量：
1
1
作者
张燕
刘梦蕾
沈茜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期667-670,共4页
目的 :构建和表达可调控鼠蛋白脂质蛋白 (PLP) 免疫球蛋白重组腺病毒载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,从WT 1杂交瘤细胞中抽提总RNA ,克隆小鼠Ig重链Fc基因。将编码PLP13 9-151的DNA与信号肽设计在引物上 ,经两次克隆可形成可分泌...
目的 :构建和表达可调控鼠蛋白脂质蛋白 (PLP) 免疫球蛋白重组腺病毒载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,从WT 1杂交瘤细胞中抽提总RNA ,克隆小鼠Ig重链Fc基因。将编码PLP13 9-151的DNA与信号肽设计在引物上 ,经两次克隆可形成可分泌型PLP Ig。经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,鉴定后在HEK2 93细胞中包装。获得高滴度病毒后 ,用Westernblot鉴定目的基因的表达。结果 :PLP Ig重组腺病毒经测序、限制性内切酶酶切分析及PCR等鉴定 ,同预期结果相一致。Westernblot检测病毒感染的细胞 ,发现目的基因得到特异性表达且可被四环素调节。结论 :构建了可调控的小鼠PLP Ig重组腺病毒载体并得到正确表达 ,为进一步基因治疗实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)
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关键词
PLP-Ig
腺病毒
载体
可调控性载体
小鼠
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职称材料
人p27^(kipl)可调控性重组腺病毒载体的构建及其在PC-3细胞中的表达
2
作者
邱镇
孙颖浩
+6 位作者
许传亮
王元天
沈茜
钱松溪
顾正勤
李云
Chinlee Wu
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第11期1200-1203,共4页
目的:体外构建人p27kipl可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响。方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kipl cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kipl...
目的:体外构建人p27kipl可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响。方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kipl cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kipl基因腺病毒(Ad-p27kipl),在HEK293细胞包装、扩增,获得高滴度病毒,采用空斑试验测定病毒滴度,体外转染PC-3细胞,RT-PCR、Western杂交分别检测目的基因不同水平的表达,并通过MTT法观察转染前后细胞增殖力的变化。Ad-X-TRE-β gal病毒作为对照。结果:构建的Ad-p27kipl病毒滴度为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western杂交检测有特异的高表达,转染后对细胞的生长有抑制作用。结论:体外连接法成功地构建携带人p27kipl基因的可调控性重组腺病毒载体,在人前列腺癌细胞系PC-3中有高表达并对细胞生长有抑制作用。
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关键词
人p27^kip1
可调控
性
重组腺病毒
载体
PC-3细胞
前列腺癌
细胞生长
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职称材料
题名
可调控性鼠PLP-Ig嵌合体重组腺病毒载体的构建和表达
被引量：
1
1
作者
张燕
刘梦蕾
沈茜
机构
第二军医大学附属长海医院实验诊断科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期667-670,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 (No .39970 2 70 )
文摘
目的 :构建和表达可调控鼠蛋白脂质蛋白 (PLP) 免疫球蛋白重组腺病毒载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,从WT 1杂交瘤细胞中抽提总RNA ,克隆小鼠Ig重链Fc基因。将编码PLP13 9-151的DNA与信号肽设计在引物上 ,经两次克隆可形成可分泌型PLP Ig。经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,鉴定后在HEK2 93细胞中包装。获得高滴度病毒后 ,用Westernblot鉴定目的基因的表达。结果 :PLP Ig重组腺病毒经测序、限制性内切酶酶切分析及PCR等鉴定 ,同预期结果相一致。Westernblot检测病毒感染的细胞 ,发现目的基因得到特异性表达且可被四环素调节。结论 :构建了可调控的小鼠PLP Ig重组腺病毒载体并得到正确表达 ,为进一步基因治疗实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)
关键词
PLP-Ig
腺病毒
载体
可调控性载体
小鼠
Keywords
PLP-Ig
adenovirus vector
regulatable expression vector
mouse
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
人p27^(kipl)可调控性重组腺病毒载体的构建及其在PC-3细胞中的表达
2
作者
邱镇
孙颖浩
许传亮
王元天
沈茜
钱松溪
顾正勤
李云
Chinlee Wu
机构
第二军医大学长海医院泌尿外科
长海医院中心实验室
Department of Pathology
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第11期1200-1203,共4页
基金
国家自然科学基金重大国际合作研究项目(30110665)
全军医药科研"十五"规划重点课题(012067)
文摘
目的:体外构建人p27kipl可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响。方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kipl cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kipl基因腺病毒(Ad-p27kipl),在HEK293细胞包装、扩增,获得高滴度病毒,采用空斑试验测定病毒滴度,体外转染PC-3细胞,RT-PCR、Western杂交分别检测目的基因不同水平的表达,并通过MTT法观察转染前后细胞增殖力的变化。Ad-X-TRE-β gal病毒作为对照。结果:构建的Ad-p27kipl病毒滴度为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western杂交检测有特异的高表达,转染后对细胞的生长有抑制作用。结论:体外连接法成功地构建携带人p27kipl基因的可调控性重组腺病毒载体,在人前列腺癌细胞系PC-3中有高表达并对细胞生长有抑制作用。
关键词
人p27^kip1
可调控
性
重组腺病毒
载体
PC-3细胞
前列腺癌
细胞生长
Keywords
prostate cancer
p27kipl
adenovirus vector
PC-3 cell line
分类号
R737.25 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可调控性鼠PLP-Ig嵌合体重组腺病毒载体的构建和表达
张燕
刘梦蕾
沈茜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人p27^(kipl)可调控性重组腺病毒载体的构建及其在PC-3细胞中的表达
邱镇
孙颖浩
许传亮
王元天
沈茜
钱松溪
顾正勤
李云
Chinlee Wu
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
0
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