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题名可视化细胞色素b5蛋白的显色核心片段解析
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作者
展恩玲
盛成旺
陈煜明
唐涛
赵春青
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机构
南京农业大学植物保护学院
湖南省农业科学院植物保护研究所
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出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期97-102,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(31501672,31871995)。
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文摘
[目的]本文旨在明确含Cyt-b 5类血红素/类固醇结合结构域(Cyt-b 5D)显色片段的最佳长度及其与原核表达载体的普适性,并筛出有效的可视化标签,以期提高载体构建的效率和便捷性。[方法]分析二化螟Cyt-b 5蛋白结构域,将其划分成含Cyt-b 5D的不同长度片段(OA、OB、OC等),并分别与3种原核表达载体pET-28a(+)、pET-41a(+)和pET-30a(+)进行连接和异源表达;将筛选的显色片段与二化螟RDL 1基因融合表达,比较不同表达时间菌液的显色反应和吸光值;用亲和层析法纯化显色片段表达以及与RDL 1表达的融合蛋白,然后进行Western blot检测。[结果]OA片段是最佳的显色片段,在3种原核表达载体中均可表达出红色的蛋白,且与RDL 1融合表达时显色稳定,表明其具有普适性。在420 nm波长下的特征吸收峰可用于实时监测显色菌液的生长状态,而层析柱中的红色变化可用于判断蛋白纯化过程。此外,利用Western blot可检测到目的蛋白,表明显色片段的存在并未干扰目的蛋白的准确鉴定。[结论]Cyt-b 5显色片段(OA)可作为原核表达系统的可视化标签,为蛋白表达和纯化等试验操作提供指示标记,从而提高其操作的便捷性和时效性。
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关键词
细胞色素b
5
载体构建
原核表达
Western
blot
可视化标签
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Keywords
cytochrome b 5
vector construction
prokaryotic expression
Western blot
visual tag
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分类号
S482.3
[农业科学—农药学]
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