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毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测被引量：21: 1; 作者范丙友胡诗宇 +1 位作者陆海蒋湘宁《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期1-8,共8页; 为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性，构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60kD，与预测值一致．对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系... 展开更多; 关键词毛白杨 4-香豆酸辅酶A连接酶可溶性原核表达酶活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定被引量：27: 2; 作者孙健伟韩洪彦 +7 位作者徐文琳王春丽王航雁徐淑玲杨建萍张家洁于凤琴张成岗《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期751-756,共6页; 脑红蛋白 (NGB)是新发现的脑特异的携氧蛋白 .为了对其功能进行深入的研究 ,应用已构建大鼠NGB基因编码区原核表达载体pGEX 4T 2 NGB转化的大肠杆菌BL2 1 ,获得可溶性表达产物 .用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化后作为抗原 ,免... 展开更多; 关键词大鼠脑红蛋白原核可溶性表达单克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

可溶性TAT PTD-Ngb融合蛋白的原核表达、鉴定与纯化及其对皮质神经元的跨膜转导被引量：1: 3; 作者周国钰胡学强 +4 位作者胡骏陆正齐楼之茵朱灿胜熊洁萍《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期146-151,共6页; 【目的】构建含蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)与脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)融合基因的表达质粒,原核表达可溶性TATPTD-Ngb,并鉴定、纯化,检测TATPTD-Ngb对皮质神经元的跨膜转导功能。【方法】提取SD大鼠脑组织总RNA,通过... 展开更多; 关键词蛋白转导域脑红蛋白可溶性原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

促伪狂犬病毒gD蛋白可溶性表达标签的筛选及融合蛋白生物学活性的检测被引量：3: 4; 作者王智豪张冬萱 +3 位作者乔岩赵肖肖范松杰张超《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期614-620,共7页; 为筛选有助于伪狂犬病病毒(PRV)gD蛋白可溶性表达的标签,并检测其融合蛋白的生物学活性,本研究通过PCR扩增PRV gD基因后,分别连接携带MBP、SUMO、NusA和GST 4个不同促溶标签的原核表达载体,构建重组质粒pET21b-MBP-gD、pET21b-SUMO-gD、... 展开更多; 关键词伪狂犬病毒 gD蛋白可溶性原核表达生物学活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性被引量：6: 5; 作者朱卫霞袁万哲 +3 位作者李丽敏宋勤叶孙泰然李潭清《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1561-1566,共6页; 应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表... 展开更多; 关键词猪流行性腹泻病毒 N蛋白可溶性原核表达抗原活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

PRRSV变异株ORF5全基因的可溶性表达与重组蛋白的纯化: 6; 作者任颖超黄娟单虎《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期30-32,共3页; 为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株可溶性糖基化囊膜蛋白(GP5),从p MD18-T-ORF5(V)重组质粒中PCR扩增得到PRRSV变异株LX13(1)结构蛋白ORF5全基因编码区,并克隆至原核表达载体p Cold TF DNA上,得到重组表达质粒p Cold-TF-GP5(... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 ORF5基因可溶性原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测被引量：21: 1; 作者范丙友胡诗宇陆海蒋湘宁; 机构北京林业大学生物科学与技术学院国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室; 出处《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期1-8,共8页; 基金 "973"国家重大基础研究项目(G1999016005); 文摘为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性，构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60kD，与预测值一致．对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化，确定IPTG的最佳浓度为0．4mmol／L，诱导时的菌液密度OD600为0．3-0．5，最佳表达时间为2h．37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在，没有生物学活性．当表达温度从37℃降低为28℃时，可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功，表达量达11％．以耦联有Ni^2＋-NTA的琼脂糖为亲和层析填料，金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白，4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为：4-香豆酸3949．0pkat／mg，咖啡酸2214．0pkat／mg，阿魏酸715．0pkat／mg，肉桂酸84．9pkat／mg，而对芥子酸没有生物活性．; 关键词毛白杨 4-香豆酸辅酶A连接酶可溶性原核表达酶活性; Keywords Populus tomentosa, 4-coumarate： coenzyme A ligase, soluble prokaryotic expression, enzyme activity; 分类号 S792.117 [农业科学—林木遗传育种]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定被引量：27: 2; 作者孙健伟韩洪彦徐文琳王春丽王航雁徐淑玲杨建萍张家洁于凤琴张成岗; 机构军事医学科学院放射医学研究所中国人民解放军总医院小儿内科河南省郑州市妇幼保健院; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期751-756,共6页; 基金国家自然科学基金重大研究计划 (No .90 2 0 80 17) 国家海外青年学者合作研究基金 (No .3 0 12 80 10 ) +3 种基金 No .3 990 0 0 41 No.3 990 0 0 74) 北京市自然科学基金 (No .70 0 2 0 3 0 )资助~~; 文摘脑红蛋白 (NGB)是新发现的脑特异的携氧蛋白 .为了对其功能进行深入的研究 ,应用已构建大鼠NGB基因编码区原核表达载体pGEX 4T 2 NGB转化的大肠杆菌BL2 1 ,获得可溶性表达产物 .用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化后作为抗原 ,免疫Balb c小鼠 .通过传统的细胞融合方法制备了抗大鼠NGB的单克隆抗体 ,并对全部 4株单抗进行了亚类和亚型、效价和特异性鉴定 .; 关键词大鼠脑红蛋白原核可溶性表达单克隆抗体; Keywords rat, neuroglobin, prokaryotic soluble expression, monoclonal antibody, preparation and characterization; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名可溶性TAT PTD-Ngb融合蛋白的原核表达、鉴定与纯化及其对皮质神经元的跨膜转导被引量：1: 3; 作者周国钰胡学强胡骏陆正齐楼之茵朱灿胜熊洁萍; 机构中山大学附属第三医院神经病学科中山医学院药理教研室; 出处《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期146-151,共6页; 基金广东省教育厅"211工程"专项基金资助项目(4209601); 文摘【目的】构建含蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)与脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)融合基因的表达质粒,原核表达可溶性TATPTD-Ngb,并鉴定、纯化,检测TATPTD-Ngb对皮质神经元的跨膜转导功能。【方法】提取SD大鼠脑组织总RNA,通过RT-PCR法构建编码TATPTD-Ngb的融合基因,克隆入pET28b原核表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析及可溶性鉴定,利用所表达的目的蛋白上的6个组蛋白用Ni-NTA琼脂进行亲和层析纯化,将不同浓度纯化的融合蛋白与原代培养皮质神经元共孵育2h,用Western-blot分析融合蛋白的跨膜转导。【结果】成功构建了含有TATPTD-Ngb的原核表达载体,插入片段500bp,成功表达并纯化了可溶性TATPTD-Ngb融合蛋白,相对分子质量约为20k,Westernblot鉴定显示表达蛋白具有抗原性,并具有转导入原代培养皮质神经元的功能,随给予蛋白浓度的增高进入神经元内的融合蛋白量增高。【结论】可溶性融合蛋白TATPTD-Ngb可转导入皮质神经元,对进一步研究Ngb的功能及蛋白转导技术的应用奠定了基础。; 关键词蛋白转导域脑红蛋白可溶性原核表达; Keywords protein transductlon neuroglobin prokaryotic soluble expression; 分类号 R373.2 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名促伪狂犬病毒gD蛋白可溶性表达标签的筛选及融合蛋白生物学活性的检测被引量：3: 4; 作者王智豪张冬萱乔岩赵肖肖范松杰张超; 机构河南农业大学动物医学院/农业农村部动物生化与营养重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期614-620,共7页; 基金国家自然科学基金(31972672)。; 文摘为筛选有助于伪狂犬病病毒(PRV)gD蛋白可溶性表达的标签,并检测其融合蛋白的生物学活性,本研究通过PCR扩增PRV gD基因后,分别连接携带MBP、SUMO、NusA和GST 4个不同促溶标签的原核表达载体,构建重组质粒pET21b-MBP-gD、pET21b-SUMO-gD、pET21b-NusA-gD和pET21b-GST-gD。经双酶切和基因测序鉴定正确后分别转化大肠杆菌BL21(DE3),采用IPTG诱导后经SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达,筛选可溶性表达效果最好的标签。结果显示,各重组质粒经酶切鉴定均获得852 bp的目的条带与各自的载体条带,均与预期相符,进一步测序结果显示插入基因序列与密码子优化后的PRV gD基因序列一致。SDS-PAGE检测结果显示,MBP标签融合gD蛋白的可溶性表达量最大,GST标签次之,SUMO标签和NusA标签融合的gD蛋白则均以包涵体形式表达。因此,选用重组MBP-gD蛋白(rMBP-gD)做后续鉴定。将rMBP-gD经Ni-NTA柱纯化后采用western blot和间接ELISA检测其反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测该重组蛋白与PK15细胞的结合;将该重组蛋白与PRV-GFP共孵育PK15细胞后,经流式细胞术检测其竞争结合PK15细胞,从而抑制PRV的感染情况。结果显示,rMBP-gD具有反应原性,且可以结合PK15细胞,rMBP-gD蛋白可竞争结合PK15细胞抑制PRV的感染。上述结果首次证实,可溶性原核表达的rMBP-gD表达效果好,且具有生物学活性,本研究为PRV基因工程亚单位疫苗的后续研究奠定了基础。; 关键词伪狂犬病毒 gD蛋白可溶性原核表达生物学活性; Keywords pseudorabies virus gD protein soluble prokaryotic expression biological activity; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性被引量：6: 5; 作者朱卫霞袁万哲李丽敏宋勤叶孙泰然李潭清; 机构河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心保定市动物疫病预防控制中心; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1561-1566,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31372441) 河北省科技计划项目(13226603D-1<2013>-X); 文摘应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白;通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性;用提纯的tN蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)检测重组tN蛋白的免疫原性。结果应用RT-PCR扩增到了预期705bp的tN蛋白基因;在E.coli BL21内,携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白;该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合,能够诱导小鼠产生特异性抗体。本研究应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的可溶性表达,该蛋白具有良好的完全抗原活性。; 关键词猪流行性腹泻病毒 N蛋白可溶性原核表达抗原活性; Keywords porcine epidemic diarrhea virus N protein prokaryotic soluble expression antigenic activities; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PRRSV变异株ORF5全基因的可溶性表达与重组蛋白的纯化: 6; 作者任颖超黄娟单虎; 机构青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期30-32,共3页; 基金国家科技基础性工作专项(2012FY111000) 山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队建设青岛农业大学高层次人才科研基金(6630719); 文摘为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株可溶性糖基化囊膜蛋白(GP5),从p MD18-T-ORF5(V)重组质粒中PCR扩增得到PRRSV变异株LX13(1)结构蛋白ORF5全基因编码区,并克隆至原核表达载体p Cold TF DNA上,得到重组表达质粒p Cold-TF-GP5(V),转化大肠埃希菌BL21中诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,成功表达的融合蛋白分子量约为75.2 ku,并以可溶性蛋白的形式存在,表达量约占菌体总蛋白含量的22.26%。该融合蛋白能与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,说明重组蛋白具有反应原性。该可溶性重组蛋白的获得为研究PRRSV变异株GP5蛋白的抗原性奠定了基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 ORF5基因可溶性原核表达; Keywords Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV） Variant ORF5 gene Soluble prokaryotic expression; 分类号 S852.651 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测	范丙友胡诗宇陆海蒋湘宁	《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	21	在线阅读下载PDF 职称材料
2	大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定	孙健伟韩洪彦徐文琳王春丽王航雁徐淑玲杨建萍张家洁于凤琴张成岗	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2003	27	在线阅读下载PDF 职称材料
3	可溶性TAT PTD-Ngb融合蛋白的原核表达、鉴定与纯化及其对皮质神经元的跨膜转导	周国钰胡学强胡骏陆正齐楼之茵朱灿胜熊洁萍	《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	促伪狂犬病毒gD蛋白可溶性表达标签的筛选及融合蛋白生物学活性的检测	王智豪张冬萱乔岩赵肖肖范松杰张超	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性	朱卫霞袁万哲李丽敏宋勤叶孙泰然李潭清	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	6	在线阅读下载PDF 职称材料
6	PRRSV变异株ORF5全基因的可溶性表达与重组蛋白的纯化	任颖超黄娟单虎	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料