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毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测
被引量：
21
1
作者
范丙友
胡诗宇
+1 位作者
陆海
蒋湘宁
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期1-8,共8页
为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性，构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60kD，与预测值一致．对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系...
为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性，构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60kD，与预测值一致．对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化，确定IPTG的最佳浓度为0．4mmol／L，诱导时的菌液密度OD600为0．3-0．5，最佳表达时间为2h．37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在，没有生物学活性．当表达温度从37℃降低为28℃时，可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功，表达量达11％．以耦联有Ni^2＋-NTA的琼脂糖为亲和层析填料，金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白，4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为：4-香豆酸3949．0pkat／mg，咖啡酸2214．0pkat／mg，阿魏酸715．0pkat／mg，肉桂酸84．9pkat／mg，而对芥子酸没有生物活性．
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关键词
毛白杨
4-香豆酸
辅酶A连接酶
可溶性原核表达
酶活性
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职称材料
截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性
被引量：
6
2
作者
朱卫霞
袁万哲
+3 位作者
李丽敏
宋勤叶
孙泰然
李潭清
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1561-1566,共6页
应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表...
应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白;通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性;用提纯的tN蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)检测重组tN蛋白的免疫原性。结果应用RT-PCR扩增到了预期705bp的tN蛋白基因;在E.coli BL21内,携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白;该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合,能够诱导小鼠产生特异性抗体。本研究应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的可溶性表达,该蛋白具有良好的完全抗原活性。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
N蛋白
可溶性原核表达
抗原活性
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职称材料
题名
毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测
被引量：
21
1
作者
范丙友
胡诗宇
陆海
蒋湘宁
机构
北京林业大学生物科学与技术学院国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室
出处
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期1-8,共8页
基金
"973"国家重大基础研究项目(G1999016005)
文摘
为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性，构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60kD，与预测值一致．对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化，确定IPTG的最佳浓度为0．4mmol／L，诱导时的菌液密度OD600为0．3-0．5，最佳表达时间为2h．37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在，没有生物学活性．当表达温度从37℃降低为28℃时，可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功，表达量达11％．以耦联有Ni^2＋-NTA的琼脂糖为亲和层析填料，金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白，4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为：4-香豆酸3949．0pkat／mg，咖啡酸2214．0pkat／mg，阿魏酸715．0pkat／mg，肉桂酸84．9pkat／mg，而对芥子酸没有生物活性．
关键词
毛白杨
4-香豆酸
辅酶A连接酶
可溶性原核表达
酶活性
Keywords
Populus tomentosa, 4-coumarate： coenzyme A ligase, soluble prokaryotic expression, enzyme activity
分类号
S792.117 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性
被引量：
6
2
作者
朱卫霞
袁万哲
李丽敏
宋勤叶
孙泰然
李潭清
机构
河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心
保定市动物疫病预防控制中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1561-1566,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31372441)
河北省科技计划项目(13226603D-1<2013>-X)
文摘
应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白;通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性;用提纯的tN蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)检测重组tN蛋白的免疫原性。结果应用RT-PCR扩增到了预期705bp的tN蛋白基因;在E.coli BL21内,携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白;该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合,能够诱导小鼠产生特异性抗体。本研究应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的可溶性表达,该蛋白具有良好的完全抗原活性。
关键词
猪流行性腹泻病毒
N蛋白
可溶性原核表达
抗原活性
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus
N protein
prokaryotic soluble expression
antigenic activities
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测
范丙友
胡诗宇
陆海
蒋湘宁
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
21
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职称材料
2
截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性
朱卫霞
袁万哲
李丽敏
宋勤叶
孙泰然
李潭清
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
6
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