可卡因-苯丙胺调节转录肽激活ERK促进海马神经元合成BDNF 被引量：10

1

作者 吴彬 胡胜娣 +1 位作者 潘慧 祝世功 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1289-1292,共4页

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)上调大鼠海马神经元脑源性神经营养因子(BDNF)表达中的作用。方法:取18d的SD大鼠胚胎(E18),分离海马神经元,体外原代培养7d,以不同剂量CART处理细胞,用Western blo... 目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)上调大鼠海马神经元脑源性神经营养因子(BDNF)表达中的作用。方法:取18d的SD大鼠胚胎(E18),分离海马神经元,体外原代培养7d,以不同剂量CART处理细胞,用Western blotting方法分别检测不同处理时点p-ERK表达。再以ERK通路特异性阻断剂PD98059(25μmol/L)预处理细胞,进一步观察CART对p-ERK表达及BDNF合成的影响。结果:同对照组比较,CART处理组海马神经元p-ERK表达明显增高(P<0.01),BDNF合成增加。PD98059能阻断内源性ERK磷酸化、也能阻断CART诱导的ERK磷酸化,同时抑制CRAT引起的BDNF合成。结论:CART通过激活ERK促进海马神经元BDNF的合成,从而发挥神经营养作用。 展开更多

关键词 可卡因-苯丙胺调节转录肽 细胞外信号调节激酶类 脑源性神经营养因子 海马 神经元

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可卡因-苯丙胺调节转录肽对脑缺血-再灌注损伤小鼠脑保护机制的研究 被引量：4

2

作者 沙杜鹃 韩勇 +5 位作者 顾双双 王璐娜 朱震寒 李瑾 李启明 张均 《中国脑血管病杂志》 CAS 2012年第8期423-427,共5页

目的探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注小鼠脑梗死体积、脑组织8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)水平的影响。方法选用10～12周龄的健康雄性昆明小鼠264只,随机分为缺血-再灌注组、CART组、等渗盐水组... 目的探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注小鼠脑梗死体积、脑组织8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)水平的影响。方法选用10～12周龄的健康雄性昆明小鼠264只,随机分为缺血-再灌注组、CART组、等渗盐水组(各72只)及假手术组(48只)。建立大脑中动脉闭塞(MCAO)2 h,再灌注12、24、48及72 h模型(每时间点6只)。CART组于再灌注前经尾静脉注射CART55-102(0.5μg/kg,浓度12nmol/L;每24h重复给药1次),等渗盐水组给予同体积等渗盐水作对照。采用酶联免疫吸附实验双抗体夹心法测定脑组织中的8-OHdG和3-NT含量。结果①CART组再灌注后各时间点脑梗死体积均小于缺血-再灌注组和等渗盐水组,其中24、48和72 h差异均有统计学意义(P<0.01)。②与假手术组比较,缺血-再灌注组、CART组及等渗盐水组在再灌注后各时间点脑组织中8-OHdG和3-NT含量均升高。③与缺血-再灌注组、等渗盐水组比较,CART组再灌注后各时间点脑组织中的8-OHdG和3-NT含量均有所下调。其中8-OHdG仅在12 h差异有统计学意义(P<0.05),3-NT在24、48及72 h时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CART对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用可能与下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激有关。 展开更多

关键词 脑梗死 再灌注损伤 小鼠 可卡因-苯丙胺调节转录肽 8-羟基-2'-脱氧鸟苷 3-硝基酪氨酸

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可卡因-苯丙胺调节转录肽对缺血-再灌注模型小鼠皮质突触可塑性的影响 被引量：3

3

作者 王路娜 陈一冰 +4 位作者 张均 王芳 顾双双 李瑾 沙杜鹃 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期127-132,共6页

目的观察可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注(I/R)小鼠皮质突触可塑性的影响。方法选用10~12周龄的健康雄性清洁级昆明小鼠288只,按照随机数字表法完全随机分为I/R组(81只)、I/R+CART组(81只)和假手术组(63只)、假手术+CART组... 目的观察可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注(I/R)小鼠皮质突触可塑性的影响。方法选用10~12周龄的健康雄性清洁级昆明小鼠288只,按照随机数字表法完全随机分为I/R组(81只)、I/R+CART组(81只)和假手术组(63只)、假手术+CART组(63只)。建立大脑中动脉阻塞(MCAO)2h再灌注模型。I/R+CART组于再灌注前经尾静脉注射CART(0.5μg,200μl),假手术+CART组予以等剂量CART;每24小时重复给药1次。在实现再灌注后不同时间点(24h、72h和7d)采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测I/R组和I/R+CART组脑梗死体积;采用透射电镜观察各组不同时间点突触超微结构变化,并对突触形态学参数进行定量分析;采用Western Blot法观察再灌注72h皮质梗死周围区突触后致密物95(PSD-95)蛋白表达水平。结果(1)与假手术组比较,I/R组小鼠造模后24、72h和7d皮质切片中突触数量明显减少[3.37±0.38)个/μm^2比(7.04±0.55)个/μm^2,(2.89±0.22)个/μm^2比(6.89±0.04)个/μm^2,(3.25±0.18)个/μm^2比(6.78±0.42)个/μm^2;均P<0.05],PSD密度明显下降[24.4±2.8)nm比(47.3±6.1)nm,(23.8±3.7)nm比(46.5±7.5)nm,(24.6±2.2)nm比(48.1±5.1)nm:均P<0.05],突触间隙宽度增大[25.2±2.1)nm比(21.5±1.6)nm、(25.2±1.4)nm比(21.3±1.0)nm,(23.7±2.6)nm比(21.6±1.6)nm;均P<0.05];再灌注后72h时间点PSD-95蛋白表达水平下降(P<0.05);(2)与I/R组比较,I/R+CART组小鼠I/R后24、72h和7d脑梗死体积缩小[分别为(29.0±1.9)%比(36.3±1.4)%,(38.1±1.4)%比(47.6±2.7)%,(36.0±2.8)%比(42.5±2.0)%;均P<0.05];再灌注后72h时间点突触数量[4.32±0.35)个/μm^2]明显增多(P<0.05),PSD-95蛋白表达水平增加(P<0.05);再灌注后24、72 h和7d各时间点PSD密度[分别为(33.8±3.4)、(34.2±4.6)、(38.2±4.0)nm]增厚(均P<0.05);而各时间点突触间隙宽度差异无统计学意义(均P>0.05)。结论CART可缩小I/R小鼠脑梗死体积,改善缺血损伤后小鼠脑皮质神经细胞突触可塑性。 展开更多

关键词 可卡因-苯丙胺调节转录肽 再灌注损伤 皮质 突触可塑性

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可卡因-苯丙胺调节转录肽蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用

4

作者 宋娟 郭卫 +2 位作者 柴景蕊 由振东 路长林 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期349-352,共4页

目的:检测可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用。方法:利用基因克隆技术构建pGE-4T3-CART_(55-102)表达质粒,通过谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析法纯化出GST-CART蛋白。实验分为6组:空白对照组,生理盐水组,... 目的:检测可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用。方法:利用基因克隆技术构建pGE-4T3-CART_(55-102)表达质粒,通过谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析法纯化出GST-CART蛋白。实验分为6组:空白对照组,生理盐水组,GST+弗氏佐剂组,CART蛋白疫苗5μg组、10μg组和20μg组,免疫两次后热板法对各组进行痛反应检测。皮下注射6 mg/kg吗啡进行镇痛效应检测,计算最大镇痛效应百分率(MPE%)。随后建立吗啡耐受模型,并于末次给药12 h后皮下注射6 mg/kg吗啡进行耐受效应检测。结果:CART蛋白疫苗本身对基础痛阈没有影响(P>0.05)。10μg CART蛋白疫苗组显著降低了吗啡镇痛效应(P<0.05)。对比生理盐水组,疫苗组显示出抗耐受的潜力,其中10μg组MPE%增高具有显著性差异(P<0.05)。结论:CART蛋白疫苗本身对痛反应没有影响,但削弱了吗啡的镇痛效应,同时对吗啡镇痛耐受具有拮抗作用。 展开更多

关键词 可卡因-苯丙胺调节转录肽蛋白 疫苗 吗啡 镇痛 药物耐受性

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可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体的表达纯化及生物活性观察

5

作者 周京晶 路长林 由振东 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期319-321,共3页

目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CAR... 目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CART55-102(Cys94Ser)原核表达菌株,经IPTG诱导表达后,亲和层析纯化3种小肽;行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响。结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上,产物得率约75%;CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为,而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响。结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体,68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失。 展开更多

关键词 可卡因一苯丙胺调节转录肽 突变体 基因表达 纯化 二硫键

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可卡因-苯丙胺转录调节肽与糖尿病关系研究进展

6

作者 隆敏 周世文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期908-910,共3页

可卡因-苯丙胺转录调节肽(cocaine and amphetamineregulated transcript,CART)是一种丰富表达下丘脑及胰腺组织的神经肽。该文就CART基因表达与糖尿病易感性、CART对进食和胰岛素分泌的调节及其自身表达调控、CART受体及可能的受体后... 可卡因-苯丙胺转录调节肽(cocaine and amphetamineregulated transcript,CART)是一种丰富表达下丘脑及胰腺组织的神经肽。该文就CART基因表达与糖尿病易感性、CART对进食和胰岛素分泌的调节及其自身表达调控、CART受体及可能的受体后信号通路进行阐述,并提出CART与糖尿病关系,研究亟待解决的问题。 展开更多

关键词 可卡因-苯丙胺转录调节肽(CART) 糖尿病 下丘脑 胰腺 神经肽Y 瘦素

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可卡因-苯丙胺调控转录肽(CART)对猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响 被引量：11

7

作者 李鹏飞 岳文斌 +8 位作者 李富禄 黄洋 孙晋艳 朱芷薇 于秀菊 贺俊平 范瑞文 任有蛇 吕丽华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1879-1886,共8页

旨在研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响。用Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下对猪卵巢卵... 旨在研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响。用Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下对猪卵巢卵泡颗粒细胞培养7d,在显微镜下观察各孔细胞生长情况并采集图像;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定各孔雌激素浓度。细胞培养168h后:(1)在培养液不添加CART时,添加FSH孔中的雌激素浓度与不添加孔相比,显著提高;浓度为25ng.mL-1时,雌激素浓度最高,为(17 295.57±184.03)pg.mL-1;(2)CART对体外培养的无FSH和FSH为5ng.mL-1的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生没有影响;(3)当培养体系FSH浓度分别为25和50ng.mL-1时,随着CART浓度的升高(0.01、0.1、1μmol.L-1),培养液雌激素浓度有下降的趋势,但各组间差异不显著(P>0.05)。但是,当FSH为25ng.mL-1,CART为0.1和1μmol.L-1时,与对照组相比,颗粒细胞雌激素的产生明显受到抑制(P<0.05)。但是,统计分析FSH和CART互作效应并不显著(P>0.05),这一点需进一步试验证明;(4)当培养液添加50ng.mL-1 FSH时,随着CART浓度的升高(0.01、0.1、1μmol.L-1),与对照组相比,雌激素浓度各组差异不显著(P>0.05)。猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生需在FSH诱导下进行;当培养液FSH为25和50ng.mL-1时,CART对FSH诱导的猪卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生有抑制作用,但抑制效果并不显著。由此推断,并不像单胎的牛、羊,CART在猪卵泡发育过程中,可能并非是个主要的局部负调控因子。 展开更多

关键词 猪 可卡因-苯丙胺调控转录肽 促卵泡素 雌激素 颗粒细胞 体外培养

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可卡因-苯丙胺调控转录肽对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的影响 被引量：10

8

作者 李鹏飞 岳文斌 +8 位作者 黄洋 孙晋艳 李晓明 庞钰莹 于学静 贺俊平 孟金柱 任有蛇 吕丽华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期853-857,共5页

研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stim-ulating hormone,FSH)诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素(E2)产生的影响。收集卵巢卵泡颗粒细胞,Long-term培养方法在不同CART... 研究可卡因-苯丙胺调控转录肽(Cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡素(Follicular stim-ulating hormone,FSH)诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素(E2)产生的影响。收集卵巢卵泡颗粒细胞,Long-term培养方法在不同CART、FSH浓度下培养7d,分别在培养48、96、144和168h后,在显微镜下观察各孔细胞生长情况;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定其雌激素浓度。培养液分别加入不同浓度FSH(5、25和50ng·mL-1),细胞培养168h后,雌激素浓度显著提高。当FSH浓度为5ng·mL-1时,培养液雌激素浓度最高为5 694.5±40.5pg·mL-1;当FSH浓度为5ng·mL-1,随着CART不同浓度的加入(0.01、0.10、1.00μmol.L-1),颗粒细胞雌激素的产生受到不同程度的抑制;在FSH浓度为25、50ng·mL-1水平下加入CART浓度为0.10μmol.L-1时,对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素产生的抑制作用明显(P<0.01)。绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生需在FSH诱导下进行;CART对FSH诱导的绵羊卵巢卵泡颗粒细胞雌激素的产生有抑制作用。 展开更多

关键词 绵羊 可卡因-苯丙胺调控转录肽 促卵泡素 颗粒细胞 体外培养 雌激素

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CART肽通过激活ERK抑制氧糖剥夺诱导的星形胶质细胞AQP-4上调 被引量：4

9

作者 刘丽冰 王伟 +1 位作者 李烁 祝世功 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1864-1868,共5页

目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽抑制星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)性损伤及调节水通道蛋白4(AQP-4)表达的分子机制。方法:体外培养新生ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定细胞。所得细胞随... 目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽抑制星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)性损伤及调节水通道蛋白4(AQP-4)表达的分子机制。方法:体外培养新生ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定细胞。所得细胞随机分为4组:对照组、模型组、CART组和CART+PD98059(ERK信号通路特异性阻断剂)组,MTT法检测星形胶质细胞活力,Western blot检测ERK及AQP-4的表达。结果:OGD处理后,CART肽能显著提高OGD后星形胶质细胞的活力(P<0.01);CART肽能够提升星形胶质细胞内ERK的磷酸化水平(P<0.05);PD98059能够阻断CART肽诱导的ERK磷酸化(P<0.01),并减弱CART肽抑制AQP-4表达的作用(P<0.05)。结论:CART肽提高OGD处理后星形胶质细胞的活力,并通过激活ERK通路抑制OGD处理后细胞AQP-4的表达。 展开更多

关键词 可卡因-苯丙胺调节转录肽 水通道蛋白4 星形胶质细胞 氧糖剥夺 ERK信号通路

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CART肽抑制NMDA诱导海马神经元凋亡的机制 被引量：7

10

作者 吴彬 胡胜娣 +3 位作者 邱彬 黄磊 潘慧 祝世功 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1325-1330,共6页

目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸(NM-DA)诱导海马神经元凋亡的作用和机制。方法:18dSD大鼠胚胎(E18)海马神经元原代培养8d,用MTT吸光度值、DNA ladder、Hoechst染色、Western blotting方法观察N... 目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸(NM-DA)诱导海马神经元凋亡的作用和机制。方法:18dSD大鼠胚胎(E18)海马神经元原代培养8d,用MTT吸光度值、DNA ladder、Hoechst染色、Western blotting方法观察NMDA引起的神经元凋亡,以及CART肽对NMDA诱导的细胞凋亡的影响,分析CART肽的作用机制。结果:CART肽预处理组海马神经元存活率明显高于NMDA组(P<0.05);DNA ladder和核形态Hoechst染色证明,CART肽明显抑制NMDA诱导的海马神经元凋亡(P<0.01)。CART肽预处理明显促进NMDA组海马神经元中Bcl-2表达(P<0.01),增加Bcl-2/Bax比值,抑制caspase-9及caspase-3活化(P<0.01);但CART肽对Bax的表达及caspase-8活化无显著影响。结论:CART肽抑制NM-DA诱导的海马神经元凋亡,呈明显的神经保护作用,其神经保护机制主要是提高抗凋亡分子Bcl-2表达,抑制线粒体凋亡途径启动分子caspase-9和执行分子caspase-3的活化。 展开更多

关键词 可卡因-苯丙胺调节转录肽 N-甲基-D-天冬氨酸 海马 神经元 半胱氨酸天冬氨酸蛋白 酶 蛋白质BCL-2

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多巴胺调控CART对缺血性脑卒中的保护作用 被引量：4

11

作者 俞茹云 林莉莉 林彬 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1221-1224,共4页

目的 :探索多巴胺(dopamine,DA)和可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides,CART)对缺血性脑卒中的作用及调控机制。方法 :利用大鼠急性缺血性脑损伤模型,通过外源性给药,测定神经功能缺损评分... 目的 :探索多巴胺(dopamine,DA)和可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides,CART)对缺血性脑卒中的作用及调控机制。方法 :利用大鼠急性缺血性脑损伤模型,通过外源性给药,测定神经功能缺损评分、脑梗死体积和炎症小体活化,阐明DA和CART在急性缺血性脑损伤中的表达和作用。结果:DA和CART均能降低急性脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积,抑制炎症小体的活化,并且CART的表达受到DA的调控。结论:DA通过CART减少炎症小体活化,对缺血性脑卒中产生保护作用。 展开更多

关键词 多巴胺 可卡因-苯丙胺调节转录肽 急性缺血性脑损伤 炎症小体

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CART肽抑制缺血再灌注小鼠脑组织水通道蛋白4表达并减轻脑水肿 被引量：8

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作者 傅兴宁 刘丽冰 +2 位作者 张志杰 师婷 祝世功 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1363-1367,共5页

目的:研究可卡因及苯丙胺调节转录物(CART)肽对小鼠脑缺血再灌注急性期脑水肿的作用,并探讨其作用机制。方法:清洁级雄性ICR小鼠随机分为假手术(sham)组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和CART组,复制小鼠MCAO模型以模拟局灶性脑缺血再灌注损... 目的:研究可卡因及苯丙胺调节转录物(CART)肽对小鼠脑缺血再灌注急性期脑水肿的作用,并探讨其作用机制。方法:清洁级雄性ICR小鼠随机分为假手术(sham)组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和CART组,复制小鼠MCAO模型以模拟局灶性脑缺血再灌注损伤病理过程,TTC染色法计算脑梗死体积及脑水肿体积,干湿重法测定脑组织中水含量,通过检测伊文思蓝含量判断血脑屏障(BBB)的完整程度,免疫荧光和Western blot观察脑组织水通道蛋白4(AQP-4)的表达变化。结果:小鼠MCAO后24 h,CART肽处理组小鼠脑梗死体积和脑水肿体积均明显小于MCAO组(P<0.01),脑组织水含量亦明显低于MCAO组(P<0.01)。伊文思蓝测定表明,CART肽能够有效维持血脑屏障的完整性。免疫荧光和Western blot结果显示,MCAO小鼠脑组织中AQP-4表达明显升高,而CART处理明显抑制脑缺血再灌注诱导的AQP-4表达(P<0.05)。结论:CART肽可减轻脑缺血再灌注损伤小鼠急性期脑水肿,维持血脑屏障完整性,其作用机制可能与抑制脑组织AQP-4表达水平密切相关。 展开更多

关键词 可卡因及苯丙胺调节转录物 缺血再灌注损伤 水通道蛋白4 脑水肿 血脑屏障

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牛卵泡颗粒细胞CART相互作用蛋白鉴定及受体筛选 被引量：3

13

作者 成俊丽 郝庆玲 +3 位作者 侯淑宁 朱芷葳 许冬梅 李鹏飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3046-3056,共11页

旨在筛选牛卵泡发育关键负调控因子可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)的相互作用蛋白及其受体。本研究采集3头健康母牛双侧卵巢,分离卵泡后刮取颗粒细胞(granulosa cells,GCs)混样;... 旨在筛选牛卵泡发育关键负调控因子可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)的相互作用蛋白及其受体。本研究采集3头健康母牛双侧卵巢,分离卵泡后刮取颗粒细胞(granulosa cells,GCs)混样;采用跨膜蛋白Extraction试剂盒提取膜蛋白,运用Protein G琼脂糖磁珠与重组CART蛋白、Anti-CART抗体共孵育(n=3);洗脱CART-蛋白复合物进行二级质谱(LC-MS/MS)分析;获得的蛋白经可信度过滤,利用生物信息学技术对其进行功能聚类分析,通过CELLO V2.5软件对蛋白进行亚细胞定位和跨膜区分析;获得7次跨膜的G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs),经ProtScale软件分析其胞内外结构区段特点,符合神经肽与受体结合结构特点的GPCR作为CART的候选受体。抽提的膜蛋白经免疫亲和层析(n=3)后,分别鉴定出149、557和298个相互作用蛋白,经筛选剔除重复蛋白,共鉴定出620个蛋白。多数据库集功能富集分析表明,CART相互作用蛋白包含参与信号传导活性的GNAS、GNG8和JUP,参与类固醇生物合成的HSD3B,参与细胞凋亡或增殖调节的OPA1和S100A11,参与Notch信号通路的ERH,这些蛋白或信号通路均与牛卵泡发育密切相关。亚细胞定位和跨膜区分析共获得膜蛋白156个,占总蛋白数的20.53%;其中7次跨膜的GPCRs有8个。经TMHMM分析表明,8个GPCRs中仅ZMPSTE24、HM13和GPR108的N端在胞外,C端在胞内,与神经肽受体的结构特征一致;经PredictProtein结合位点分析表明,ZMPSTE24在5~6跨膜区间的胞内环存在G蛋白结合的位点。ZMPSTE24作为CART的候选受体,有待于分子互作和功能试验进一步加以验证。本研究为牛卵泡CART受体的鉴定奠定了基础,对丰富牛卵泡发育调控理论具有重要意义。 展开更多

关键词 牛 卵泡 可卡因-苯丙胺调节转录肽 G蛋白偶联受体 质谱分析

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中缅树鼩NPY,POMC和CART基因部分序列进化亲缘关系比较 被引量：1

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作者 朱万龙 张浩 王政昆 《热带生物学报》 2014年第2期120-126,共7页

神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)、阿片促黑色素原(Pro-opiomelanocortin,POMC)和可卡因-安他非明转录调节肽(Cocaine and amphetamine regulated transcriptpeptide,CART)是下丘脑调节能量稳态的重要神经肽,在进化中非常保守,能准确反映... 神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)、阿片促黑色素原(Pro-opiomelanocortin,POMC)和可卡因-安他非明转录调节肽(Cocaine and amphetamine regulated transcriptpeptide,CART)是下丘脑调节能量稳态的重要神经肽,在进化中非常保守,能准确反映远缘物种间的亲缘关系。该研究通过RT-PCR扩增中缅树鼩NPY,POMC和CART基因,分别获得133 bp,276 bp和50 bp的cDNA片段,包含的开放阅读框(open reading frame,ORF)分别为131 bp,272 bp和48 bp,各自编码43,90和16个氨基酸。通过BLAST搜索,所得中缅树鼩NPY,POMC和CART基因cDNA序列与普通狨(Callithrix jacchus)、猕猴(Macaca mulatta)、苏门答腊猩猩(Pongo abelii)、智人(Homo sapiens)、东非狒狒(Papio Anubis)、小耳大婴猴(Otolemur garnettii)、白颊长臂猿(Nomascus leucogenys)、灰仓鼠(Cricetulus griseus)和褐家鼠(Rattus norveqicus)的NPY,POMC和CART氨基酸序列同源性很高(同源性均为95%)。本研究通过ML方法以NPY,POMC和CART序列构建系统进化树,发现中缅树鼩与灵长类聚为一支,揭示了中缅树鼩与灵长类较近的亲缘关系。 展开更多

关键词 中缅树鼩 神经肽Y 阿片促黑色素原 可卡因-安他非明转录调节肽 下丘脑

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外源注射CART特异性dsRNA对蛋鸡产蛋性能和蛋品质的影响

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作者 李鹏飞 景炅婕 +3 位作者 毕锡麟 王锴 张子宁 吕丽华 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第4期434-438,共5页

选择500只健康、20周龄的海兰褐蛋鸡,预饲30 d后随机平均分为5组,每组4个重复,分别进行如下处理:生理盐水仅第1天注射一次组(A组,对照组)、可卡因—苯丙胺调节转录肽(CART)特异性双链RNA(dsRNA)仅第1天注射一次组(B组)、CART dsRNA每40 ... 选择500只健康、20周龄的海兰褐蛋鸡,预饲30 d后随机平均分为5组,每组4个重复,分别进行如下处理:生理盐水仅第1天注射一次组(A组,对照组)、可卡因—苯丙胺调节转录肽(CART)特异性双链RNA(dsRNA)仅第1天注射一次组(B组)、CART dsRNA每40 d注射一次组(C组)、CART dsRNA每20 d注射一次组(D组)、CART dsRNA每10 d注射一次组(E组),120 d后对各处理组蛋鸡的产蛋性能、蛋品质、蛋组分和体重变化进行测定,研究CART对产蛋期蛋鸡的产蛋性能和蛋品质的影响.结果表明:各试验组之间以及与对照组之间在产蛋率上均存在差异(P<0.05);B组的日产蛋量与对照组的差异不显著,其他试验组与对照组的差异显著(P<0.05);各试验组的采食量均高于对照组(P<0.05);从蛋料比来看,B、C组与对照组的差异不显著,D组与E组的差异不显著,但均与对照组存在差异(P<0.05);各试验组蛋品质、蛋组分与对照组的差异不显著;试验结束后,各试验组蛋鸡的体重变化与对照组均存在差异(P<0.05).总之,CART dsRNA对海兰褐蛋鸡产蛋性能和体重变化的影响显著,对蛋品质和蛋组分的影响不显著. 展开更多

关键词 蛋鸡 双链RNA(dsRNA) 可卡因—苯丙胺调节转录肽(CART) 产蛋性能 蛋品质

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