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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
2
1
作者
独军政
常惠芸
+7 位作者
高闪电
王光华
王景锋
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
谢庆阁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期975-977,共3页
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,...
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白。通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中。制备的兔多克隆抗体效价达1∶25600以上。以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础。
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关键词
牛
口蹄疫病毒受体
αv配体结合域
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
1
2
作者
独军政
高闪电
+5 位作者
常惠芸
赵建勇
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2008年第3期8-12,共5页
病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β...
病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β8成熟肽氨基端的LBD基因片段,与带有GST标签的原核表达载体pGEX 4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β8LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组β8LBD融合蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,鉴定血清效价和特异性.结果显示,实现了重组猪β8LBD融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶12 800以上,该血清可与目的蛋白发生特异性反应.这将为进一步研究猪整合素β8亚基在宿主体内的分布及其在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础.
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关键词
猪
口蹄疫病毒受体
β8亚基配体
结合域
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
2
1
作者
独军政
常惠芸
高闪电
王光华
王景锋
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
谢庆阁
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期975-977,共3页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10A204)
国家支撑计划资助项目(2006BAD06A10)
文摘
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白。通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中。制备的兔多克隆抗体效价达1∶25600以上。以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础。
关键词
牛
口蹄疫病毒受体
αv配体结合域
原核表达
多克隆抗体
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
1
2
作者
独军政
高闪电
常惠芸
赵建勇
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2008年第3期8-12,共5页
基金
国家支撑计划项目(2006BAD06A03)
国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10A204)
文摘
病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β8成熟肽氨基端的LBD基因片段,与带有GST标签的原核表达载体pGEX 4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β8LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组β8LBD融合蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,鉴定血清效价和特异性.结果显示,实现了重组猪β8LBD融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶12 800以上,该血清可与目的蛋白发生特异性反应.这将为进一步研究猪整合素β8亚基在宿主体内的分布及其在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础.
关键词
猪
口蹄疫病毒受体
β8亚基配体
结合域
原核表达
多克隆抗体
Keywords
porcine
FMDV receptor
integrin β8 subunit
ligand binding domain
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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作者
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发文年
被引量
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1
牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
独军政
常惠芸
高闪电
王光华
王景锋
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
谢庆阁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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职称材料
2
猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
独军政
高闪电
常惠芸
赵建勇
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2008
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