多重连接依赖式探针扩增和变性高效液相色谱法检测Duchenne型肌营养不良症患者DMD基因的缺失/重复突变 被引量：13

1

作者 申本昌 张成 +1 位作者 孙筱放 李少英 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期83-86,共4页

目的比较多重连接依赖式探针扩增法（MLPA）和变性高效液相色谱法（DHPLC）检测Duchenne型肌营养不良症（DMD）患者DMD基因缺失／重复突变的效果。方法选择2004年10月-2005年10月在我院确诊的22位无关DMD男性患者，采用MLPA法对经DHPLC... 目的比较多重连接依赖式探针扩增法（MLPA）和变性高效液相色谱法（DHPLC）检测Duchenne型肌营养不良症（DMD）患者DMD基因缺失／重复突变的效果。方法选择2004年10月-2005年10月在我院确诊的22位无关DMD男性患者，采用MLPA法对经DHPLC技术检测过的患者的DMD基因的缺失／重复突变进行突变筛查，同时对先证者的23位女性亲属进行基因的缺失／重复突变检测。结果DHPLC技术和MLPA法均检测出11位先证者具有DMD基因缺失突变，3位先证者具有DMD重复突变；MLPA法除能更精确地检测出上述突变外，还检测出DHPLC法未检测出的两位患者的DMD基因存在缺失突变。16个家系中18位可能的女性携带者中，12位经检测为缺失／重复突变携带者。两种方法均未检测到6位先证者及其女性亲属DMD基因具有缺失／重复突变。结论与DHPLC法和传统的多重PCR方法相比，MLPA法检测DMD基因的缺失／重复突变位置更为准确。MLPA法可用于检测先证者及家系中女性携带者DMD基因的缺失／重复突变。 展开更多

关键词 DUCHENNE肌营养不良症 多重连接依赖式探针扩增法 变性高效液相色谱法 DMD基因缺失/重复突变

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应用变性高效液相色谱法检测幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性 被引量：3

2

作者 吴文冰 蔡鹏威 +2 位作者 方超英 沈菁 陈雯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1050-1053,共4页

目的建立DHPLC快速检测Hp对克拉霉素耐药性的新方法。方法抽提56份经纸片琼脂扩散法鉴定为克拉霉素耐药的Hp菌株DNA及其对应的胃粘膜组织标本DNA,通过PCR技术扩增23SrRNA区187bp基因,运用DHPLC技术对PCR产物进行突变分析,并进行DNA测序... 目的建立DHPLC快速检测Hp对克拉霉素耐药性的新方法。方法抽提56份经纸片琼脂扩散法鉴定为克拉霉素耐药的Hp菌株DNA及其对应的胃粘膜组织标本DNA,通过PCR技术扩增23SrRNA区187bp基因,运用DHPLC技术对PCR产物进行突变分析,并进行DNA测序。结果 56份克拉霉素耐药的Hp菌株DNA经DHPLC分析,有51份存在异源双链峰,测序证实均存在点突变,5份无异源双链峰,测序证实无点突变,故DHPLC对基因突变耐药菌株的敏感性和特异性为100%,而且56份组织标本DNA检测结果与菌株DNA检测结果一致。结论 DHPLC可应用于Hp对克拉霉素耐药性的快速检测,具有广阔的临床应用前景。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 23S RRNA 克拉霉素耐药 变性高效液相色谱法 基因突变

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变性高效液相色谱法筛选鼻咽癌相关基因单核苷酸多态性 被引量：3

3

作者 黄华 江培洲 +2 位作者 沈新明 姚开泰 周宇凤 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第7期602-604,共3页

目的　利用变性高效液相色谱法（DHPLC）结合测序筛选和鉴定鼻咽癌基因的单核苷酸多态性（SNPs）。方法　PCR扩增30例鼻咽癌患者和28例正常对照者6p21.3区域基因PPP1R11、PP1R10、FLOT1、KIAA0170的4个外显子与1个内含子片断,采用DHPLC... 目的　利用变性高效液相色谱法（DHPLC）结合测序筛选和鉴定鼻咽癌基因的单核苷酸多态性（SNPs）。方法　PCR扩增30例鼻咽癌患者和28例正常对照者6p21.3区域基因PPP1R11、PP1R10、FLOT1、KIAA0170的4个外显子与1个内含子片断,采用DHPLC技术对扩增片断进行基因变异检测,将不同的类型PCR片断进行全序列测定并与参考序列对照分析。结果　在5个片断中初步鉴定出4个未见报道的新SNP位点,验证了4个已知的SNPs位点和基因型。结论　DHPLC预测结合全序列测序是一种高效、经济、简便、可靠的SNP筛选方法。 展开更多

关键词 变性高效液相色谱法 鼻咽癌 单核苷酸多态性 基因筛选 PCR扩增

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变性高效液相色谱法在FALS突变位点检测中的应用 被引量：1

4

作者 胡俊 史树贵 +2 位作者 李露斯 吴玉章 倪兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1374-1376,共3页

目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHP... 目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的实用价值。方法对PCR-SSCP检测阴性的外显子,应用DHPLC法及DNA直接测序技术,再次进行SOD1基因的突变位点检测。结果经DHPLC检测,家系成员Ⅲ1SOD1基因的第4外显子有突变峰,DNA直接测序证实存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变,使编码的氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸。结论DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。 展开更多

关键词 家族性肌萎缩侧索硬化症 铜、锌超氧化物歧化酶 变性高效液相色谱法 突变

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用变性高效液相色谱法检测遗传性因子XⅢA链基因突变

5

作者 王巍 陈晓丹 +3 位作者 蔡望伟 朱燕 刘国勋 程爽 《海南医学院学报》 CAS 2004年第6期378-380,共3页

目的:观察变性高效液相色谱(DHPLC)法检测凝血因子XIIIA链基因突变的实用价值。方法:用聚合酶链反应(PCR)扩增正常样品和有XIIIA基因603-606delAAGA突变患者的XIIIA链基因外显子5;用单链构象多态性(SSCP)及DHPLC检测分析扩增的外显子5... 目的:观察变性高效液相色谱(DHPLC)法检测凝血因子XIIIA链基因突变的实用价值。方法:用聚合酶链反应(PCR)扩增正常样品和有XIIIA基因603-606delAAGA突变患者的XIIIA链基因外显子5;用单链构象多态性(SSCP)及DHPLC检测分析扩增的外显子5。结果:SSCP显示患者有异常的区带,患者的DHPLC结果出现异常洗脱峰,与SSCP的结果一致。结果表明DHPLC能检测FXIII因子A链基因突变。结论:DHPLC技术是一种筛查基因突变的快速、简单、可靠的方法。 展开更多

关键词 基因突变 DHPLC 患者 SSCP 变性高效液相色谱法 扩增 遗传性 外显子 洗脱 单链构象多态性

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食品中拟态弧菌变性高效液相色谱检测技术研究 被引量：1

6

作者 郑秋月 曹际娟 +3 位作者 蒋丹 刘淑艳 赵昕 傅俊范 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期175-177,共3页

应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对食品中致病菌——拟态弧菌进行检测,探讨其灵敏度特异性,建立快速高通量检测食品中拟态弧菌的新方法。利用DHPLC在非变性温度下进行双链DNA分离的原理,应用DHPLC技术分析拟态弧菌特异性PCR扩... 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对食品中致病菌——拟态弧菌进行检测,探讨其灵敏度特异性,建立快速高通量检测食品中拟态弧菌的新方法。利用DHPLC在非变性温度下进行双链DNA分离的原理,应用DHPLC技术分析拟态弧菌特异性PCR扩增产物。在优化的分析条件下,对样品洗脱峰排列形成的聚类分析图进行分析,得到拟态弧菌的特征峰型图谱。结果表明该方法有很好的特异性。与传统检测方法进行比较该方法准确度为100%。本实验建立的食品中拟态弧菌PCR-DHPLC检测技术,特异性灵敏,准确度高,操作快速、简便,在食品安全检测中具有重要应用价值。 展开更多

关键词 拟态弧菌 聚合酶链式反应 变性高效液相色谱法

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变性高效液相色谱检测技术在微生物领域的应用 被引量：6

7

作者 陆连寿 张秀英 郑明 《中国兽药杂志》 2009年第9期40-44,共5页

变性高效液相色谱法(DHPLC)是一种高通量筛选DNA序列变异的新技术。本文从该技术的工作原理、主要特点以及其在耐药检测、基因分型和鉴定、混合微生物分离鉴定等微生物领域的应用方面作了较详细的综述。

关键词 变性高效液相色谱法 检测技术 微生物

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变性高效液相色谱技术鉴别猪牛源性成分的试验 被引量：1

8

作者 杨娜 王向军 +1 位作者 乔晴 徐超 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期89-91,共3页

建立了检测动物源性食品中猪、牛成分的PCR结合变性高效液相色谱技术,为牛、羊成分的鉴别提供一种新的分子诊断技术。以猪、牛的线粒体DNA为靶基因,设计特异性PCR引物。双重PCR扩增后,DHPLC分析。经优化DHPLC最佳条件为:使用PS-DVB&... 建立了检测动物源性食品中猪、牛成分的PCR结合变性高效液相色谱技术,为牛、羊成分的鉴别提供一种新的分子诊断技术。以猪、牛的线粒体DNA为靶基因,设计特异性PCR引物。双重PCR扩增后,DHPLC分析。经优化DHPLC最佳条件为:使用PS-DVB&C18 DNASep色谱柱(4.6 mm×50 mm,粒度3μm),设定50℃柱温,起始流动相为:45%缓冲液A和55%缓冲液B,流速0.9 m L/min;上样量:PCR产物5μL。结果表明:DHPLC法具有良好的特异性,仅能检出猪、牛源成分,而与羊、鸡、鸭源成分无交叉反应;方法的灵敏度可以达到1 000 copies核酸。 展开更多

关键词 变性高效液相色谱法 猪源性成分 牛源性成分 鉴定

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食品中3种致病李氏菌MPCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：10

9

作者 王耀 曹际娟 +1 位作者 闫平平 曹远银 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期158-162,共5页

应用复合PCR(multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的快速高通量检测方法。根据单核细胞增生李斯特... 应用复合PCR(multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的快速高通量检测方法。根据单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的特异基因序列分别设计引物,MPCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以94株参考菌株做特异性实验,并开展了重现性检测实验。MPCR-DHPLC方法同步检测到单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌的特异性阳性吸收峰,未检测到李斯特菌属其他近源种和非近源种参考菌株的阳性吸收峰,且重现性良好。该方法具有很好的特异性,可以快速、准确、高通量地检测食品中单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌和英诺克李斯特菌,是食品微生物快速检测的新技术。 展开更多

关键词 复合PCR-变性高效液相色谱法(MPCR-DHPLC) 单核细胞增生李斯特菌 绵羊李斯特菌 英诺克李斯特菌 检测

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造血干细胞移植供者TNF-α基因多态性在GVHD中的频率分析 被引量：5

10

作者 王静波 任汉云 +2 位作者 李丹 孙倩 陆道培 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期133-137,共5页

探讨供者肿瘤坏死因子α(TNF α)基因多态性在重度急性移植物抗宿主病 (aGVHD)和广泛型慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)中的作用。本研究应用变性高效液相色谱结合DNA测序检测了TNF α 30 8和TNF α 2 38基因在重度aGVHD和广泛型cGVHD的分... 探讨供者肿瘤坏死因子α(TNF α)基因多态性在重度急性移植物抗宿主病 (aGVHD)和广泛型慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)中的作用。本研究应用变性高效液相色谱结合DNA测序检测了TNF α 30 8和TNF α 2 38基因在重度aGVHD和广泛型cGVHD的分布。结果表明 ,2 1例Ⅲ度 /Ⅳ度aGVHD病人中有 8例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,而2 8例 0度 /Ⅰ度aGVHD病人中仅 1例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,提示TNF α 30 8(G/A)在Ⅲ度 /Ⅳ度aGVHD中的频率明显高于 0度 /Ⅰ度aGVHD的病人 (P <0 .0 1)。在 2 3例广泛性cGVHD病人中有 7例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,而17例未发生cGVHD的病人中仅 1例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,提示TNF α 30 8(G/A)在广泛性cGVHD中的频率高于未发生cGVHD的病人 (P <0 .0 5 )。在 2 1例Ⅲ度 /Ⅳ度aGVHD和 2 8例 0度 /Ⅰ度aGVHD及 2 3例广泛性cGVHD及17例未发生cGVHD的病人中均有 1例呈现TNF α 2 38(G/A)阳性 ,提示TNF α 2 38(G/A)在上述各组病人间的频率无明显差异。结论 :TNF α 30 8(G/A)阳性与Ⅲ度 展开更多

关键词 造血干细胞移植 TNFΑ基因 基因多态性 GVHD 频率分析 急性移植物抗宿主病 变性高效液相色谱法 慢性移植物抗宿主病

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PAX4基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病的关系 被引量：3

11

作者 周敏 张英 +4 位作者 张冬梅 林建 王建平 周海峰 周智广 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期215-221,共7页

目的:探讨配对盒4(paired box4,PAX4)基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病(KPD)的关系。方法:应用变性高效液相色谱法(DHPLC)筛查141例谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)和蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2Ab)阴性的KPD患者(KPD组)和... 目的:探讨配对盒4(paired box4,PAX4)基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病(KPD)的关系。方法:应用变性高效液相色谱法(DHPLC)筛查141例谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)和蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2Ab)阴性的KPD患者(KPD组)和112例非糖尿病对照者(NC组)的PAX4基因外显子3和9,对异常峰型者经测序证实其碱基改变。应用聚合酶链反应-限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)法对141例KPD患者和308例对照者的PAX4基因A1168C多态位点进行等位基因和基因型频率分析。结果:在本组人群中未发现PAX4基因外显子3有变异。外显子9中的单核苷酸多态性(SNP)位点A1168C,引起错义突变P321H(rs712701)。A1168C位点的C等位基因和CC基因型频率在KPD组与NC组间差异无统计学意义;按性别分层后,KPD组C等位基因和CC基因型频率差异均有统计学意义(P=0.009,0.028);以年龄分层后,<20岁组与≥20岁组比较C等位基因和CC基因型频率分布差异均有统计学意义(P=0.034,0.032);在CC基因型的KPD患者中,空腹C肽(FCP)水平高于AA基因型者,差异有统计学意义(P=0.005)。结论:本组中国南方汉族人群PAX4基因A1168C(P321H)多态性与胰岛自身抗体阴性KPD未见关联,但分层研究提示PAX4基因A1168C多态性对男性和<20岁的KPD患者的发病可能有影响。 展开更多

关键词 酮症倾向糖尿病 PAX4基因 单核苷酸多态性 变性高效液相色谱法

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肌萎缩侧索硬化症家系铜锌超氧化物歧化酶基因突变位点的检测 被引量：2

12

作者 胡俊 史树贵 +2 位作者 李露斯 吴玉章 倪兵 《医学研究生学报》 CAS 2005年第11期963-965,i0008,共4页

目的:检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症(ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因突变位点,同时比较单链构象多态性(SSCP)和变性高效液相色谱法(DHPLC)的实用价值。方法:采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行... 目的:检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症(ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因突变位点,同时比较单链构象多态性(SSCP)和变性高效液相色谱法(DHPLC)的实用价值。方法:采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行PCR扩增,分别采用SSCP和DHPLC分析各外显子的多态性,异常样本进行DNA直接测序。结果:①两种方法均发现家系成员Ⅱ5、Ⅲ1、Ⅲ3、Ⅲ13、Ⅲ20、Ⅳ1、Ⅳ20的第2外显子和家系成员Ⅲ1、Ⅲ11、Ⅲ20第5外显子存在突变,直接测序证实第2外显子编码区和第5外显子非编码区均插入了一个碱基A。②DHPLC还发现家系成员Ⅲ1的第4外显子有杂合子色谱,直接测序证实其第4外显子存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变。结论:①该家系SOD1基因第2、4、5外显子均存在突变,第2外显子的突变可能是引起该家系发病的原因。②DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷、可靠的手段。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 铜锌超氧化物歧化酶 变性高效液相色谱法 单链构象多态性法

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北京大学临床肿瘤学院王洁、白桦等获“Merit Award”奖

13

作者 刘晓红 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期537-537,共1页

关键词 美国临床肿瘤学会 北京大学 学院 白桦 变性高效液相色谱法 表皮生长因子受体 非小细胞肺癌 肿瘤内科

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6616例脊髓性肌萎缩症携带者筛查及高风险胎儿产前诊断分析 被引量：21

14

作者 徐盈 黎昱 +4 位作者 宋婷婷 詹瑛 郭芬芬 陈必良 张建芳 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期42-47,共6页

目的:探讨脊髓性肌萎缩症(SMA)携带者筛查及产前诊断分析的临床价值。方法:应用多重PCR联合变性高效液相色谱法(PCR-DHPLC)技术和Sanger测序法对6616例孕妇(早孕产检孕妇6609例和具有SMA阳性家族史孕妇7例)进行SMN1、SMN2基因筛查与诊断... 目的:探讨脊髓性肌萎缩症(SMA)携带者筛查及产前诊断分析的临床价值。方法:应用多重PCR联合变性高效液相色谱法(PCR-DHPLC)技术和Sanger测序法对6616例孕妇(早孕产检孕妇6609例和具有SMA阳性家族史孕妇7例)进行SMN1、SMN2基因筛查与诊断,并对高风险胎儿进行产前基因分析。结果:①在6609例早孕产检孕妇中发现123例孕妇(检出率1.86%)可能是SMA的携带者,其中由于SMN1缺失形成的携带者84例(1.27%),SMN1转换成SMN2基因形成的携带者35例(0.53%),SMA携带者为SMN1∶SMN2=1∶0的样本4例(0.06%)。另外,丈夫同为SMA携带者21例(SMN1缺失形成的携带者14例,SMN1转换成SMN2基因形成的携带者7例)。②7例SMA阳性家族史孕妇中发现:2例先证者明确为SMN1基因exon7纯合缺失;4例先证者通过父母基因型推测可能为SMN1基因exon7纯合缺失;另1例SMA先证者通过PCR-DHPLC技术检测出SMN1基因exon7拷贝数为1,同时通过Sanger测序法发现该SMA先证者样本在SMN1基因上也存在c.570 G>A(p.Trp190*)杂合突变,为复合杂合突变。③对28例高风险胎儿进行产前基因诊断分析,其中SMN1基因型异常胎儿6例,胎儿可能为SAM携带者13例,胎儿基因型正常者9例。SMN1基因型异常胎儿6例均引产,16例出生后随访生长发育未见异常,4例继续妊娠,2例失访。结论:PCR-DHPLC技术可以对大部分人群和SMA患者进行筛查与诊断,且能对SMN1和SMN2拷贝数进行鉴定,少数复合杂合突变病例需要结合Sanger测序方法。对高风险家系孕妇行介入性产前基因诊断,对于优生优育、有效预防SMA胎儿的出生具有重要的临床意义。 展开更多

关键词 脊髓性肌萎缩症 携带者筛查 多重PCR联合变性高效液相色谱法 产前基因诊断

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