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糖基化修饰对新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区(Spike RBD)与受体ACE2结合影响的非变性质谱研究
被引量:
2
1
作者
罗宇翔
黄静
李惠琳
《质谱学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期687-696,I0003,共11页
新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化...
新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化有利于理解病毒入侵的机制,为药物研发提供思路。结构质谱是蛋白质结构表征中广泛应用的方法,本工作通过非变性质谱(native MS)研究糖蛋白RBD和ACE2样品及其复合物。首先,优化了使用PNGase F切除RBD N-糖时的条件,对切糖后RBD蛋白的异质性进行分析,并进一步考察了切糖前后RBD与ACE2形成蛋白复合物的稳定性。结果表明,RBD N-糖的切除会导致其与ACE2形成的复合物稳定性降低。本工作可为RBD的N-糖基化作用分析提供参考,并为后续实验RBD是否需要切N-糖处理提供指导建议。
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关键词
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)
刺突蛋白
受体
结合
区域
(
rbd
)
血管紧张素转化酶2(ACE2)
糖蛋白
N-糖酰胺酶F
非变性质谱
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职称材料
猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定
2
作者
张国庆
姜宇航
+8 位作者
张爽
李乐天
郝嘉翼
陈竞
邹万成
李昌
李太元
高旭
金宁一
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期1575-1583,共9页
【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位...
【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对,将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,合成多肽并免疫小鼠,制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定,通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对,利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株(0~14.28%)以及14株其他猪冠状病毒株(0~7.14%)序列相似性非常低,具有良好的保守性;Western blotting结果显示,制备的多肽抗体1∶500、1∶1000、1∶2000倍比稀释后均能特异性识别转染pcDNA3.1-PDR-Strep的Expi293F表达的PDCoV RBD蛋白、杆状病毒感染SF9细胞表达的PDCoV RBD蛋白,1∶1000稀释后能够检测到PDCoV感染ST细胞表达的PDCoV S蛋白,而在TGEV和PEDV感染的细胞中未检测到特异性蛋白的表达;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价可以达到1∶12800。【结论】利用生物信息学技术成功预测PDCoV RBD蛋白抗原表位,免疫后获得的抗体具有较好的特异性。
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关键词
猪δ冠状病毒(PDCoV)
受体
结合
结构域(
rbd
)
抗原表位
多肽抗体
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职称材料
SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定
3
作者
陈秀婷
汪毅祯
+2 位作者
商慧娴
王思令
郑子峥
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期693-697,共5页
目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋...
目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋白;冷冻电镜技术确定XMA09识别的受体结构域(RBD)上的关键氨基酸位点;间接ELISA与表面等离子共振(SPR)技术检测XMA09对SARS-CoV-2及其突变株Spike蛋白的亲和力;采用基于水疱性口炎病毒(VSV)的假病毒系统检测XMA09对SARS-CoV-2野生型及突变株的中和能力。结果:本研究发现XMA09识别的表位较为保守,对多种突变株Spike蛋白均具有强结合能力,能广谱中和关切突变株(VOCs),包括广泛流行的Omicron亚突变株BA.4/5。结论:XMA09是SARS-CoV-2广谱中和抗体,具有作为SARS-CoV-2治疗性抗体的潜力,并可为SARS-CoV-2的广谱疫苗设计与抗体药物开发提供参考意义。
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关键词
SARS-CoV-2
受体
结合
结构域(
rbd
)
广谱中和抗体
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职称材料
KLF6与早期肝纤维化
4
作者
周霞
徐可树
《临床肝胆病杂志》
CAS
2006年第6期466-467,共2页
Kruppel样因子6(KLF6)是一种核转录调控因子,也称Zf9(zinc finger factor 9)或CPBP(core promoter-binding protein),可以特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核心元件而发挥生物学效应。近年来国外研究表明:在活化...
Kruppel样因子6(KLF6)是一种核转录调控因子,也称Zf9(zinc finger factor 9)或CPBP(core promoter-binding protein),可以特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核心元件而发挥生物学效应。近年来国外研究表明:在活化的肝星状细胞(HSC)中,可见KLF6的表达,KLF6可通过调节TGFβ1及Ⅰ型TGFβ、Ⅱ型TGFβ受体、尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂、α1(1)型胶原的表达,在肝纤维化过程中发挥其作用,现就KLF6与早期肝纤维化的关系综述如下。
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关键词
早期肝纤维化
核转录调控因子
基因启动子
区域
TGFΒ1
TGFΒ
受体
肝纤维化过程
特异性
结合
生物学效应
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职称材料
题名
糖基化修饰对新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区(Spike RBD)与受体ACE2结合影响的非变性质谱研究
被引量:
2
1
作者
罗宇翔
黄静
李惠琳
机构
中山大学药学院
出处
《质谱学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期687-696,I0003,共11页
基金
国家自然科学基金面上项目(81872836,91953102)
广东省自然科学基金(2019A1515011265)
+1 种基金
广东省手性分子与药物发现重点实验室项目(2019B030301005)
中央高等学校基本科研业务费专项资金(19ykzd26)。
文摘
新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化有利于理解病毒入侵的机制,为药物研发提供思路。结构质谱是蛋白质结构表征中广泛应用的方法,本工作通过非变性质谱(native MS)研究糖蛋白RBD和ACE2样品及其复合物。首先,优化了使用PNGase F切除RBD N-糖时的条件,对切糖后RBD蛋白的异质性进行分析,并进一步考察了切糖前后RBD与ACE2形成蛋白复合物的稳定性。结果表明,RBD N-糖的切除会导致其与ACE2形成的复合物稳定性降低。本工作可为RBD的N-糖基化作用分析提供参考,并为后续实验RBD是否需要切N-糖处理提供指导建议。
关键词
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)
刺突蛋白
受体
结合
区域
(
rbd
)
血管紧张素转化酶2(ACE2)
糖蛋白
N-糖酰胺酶F
非变性质谱
Keywords
COVID-19
spike protein
receptor binding domain(
rbd
)
angiotensin converting enzyme 2(ACE2)
glycoprotein
N-glycosidase F
native mass spectrometry
分类号
O657.63 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定
2
作者
张国庆
姜宇航
张爽
李乐天
郝嘉翼
陈竞
邹万成
李昌
李太元
高旭
金宁一
机构
延边大学
中国农业科学院长春兽医研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期1575-1583,共9页
基金
国家重点研发项目(2021YFD1801103-6)。
文摘
【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对,将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,合成多肽并免疫小鼠,制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定,通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对,利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株(0~14.28%)以及14株其他猪冠状病毒株(0~7.14%)序列相似性非常低,具有良好的保守性;Western blotting结果显示,制备的多肽抗体1∶500、1∶1000、1∶2000倍比稀释后均能特异性识别转染pcDNA3.1-PDR-Strep的Expi293F表达的PDCoV RBD蛋白、杆状病毒感染SF9细胞表达的PDCoV RBD蛋白,1∶1000稀释后能够检测到PDCoV感染ST细胞表达的PDCoV S蛋白,而在TGEV和PEDV感染的细胞中未检测到特异性蛋白的表达;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价可以达到1∶12800。【结论】利用生物信息学技术成功预测PDCoV RBD蛋白抗原表位,免疫后获得的抗体具有较好的特异性。
关键词
猪δ冠状病毒(PDCoV)
受体
结合
结构域(
rbd
)
抗原表位
多肽抗体
Keywords
Porcine deltacoronavirus(PDCoV)
receptor binding domain(
rbd
)
antigenic epitope
peptide antibody
分类号
S855 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定
3
作者
陈秀婷
汪毅祯
商慧娴
王思令
郑子峥
机构
厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期693-697,共5页
基金
国家自然科学基金项目(82071783)。
文摘
目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋白;冷冻电镜技术确定XMA09识别的受体结构域(RBD)上的关键氨基酸位点;间接ELISA与表面等离子共振(SPR)技术检测XMA09对SARS-CoV-2及其突变株Spike蛋白的亲和力;采用基于水疱性口炎病毒(VSV)的假病毒系统检测XMA09对SARS-CoV-2野生型及突变株的中和能力。结果:本研究发现XMA09识别的表位较为保守,对多种突变株Spike蛋白均具有强结合能力,能广谱中和关切突变株(VOCs),包括广泛流行的Omicron亚突变株BA.4/5。结论:XMA09是SARS-CoV-2广谱中和抗体,具有作为SARS-CoV-2治疗性抗体的潜力,并可为SARS-CoV-2的广谱疫苗设计与抗体药物开发提供参考意义。
关键词
SARS-CoV-2
受体
结合
结构域(
rbd
)
广谱中和抗体
Keywords
SARS-CoV-2
Receptor binding domain(
rbd
)
Broadly neutralizing antibody
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
KLF6与早期肝纤维化
4
作者
周霞
徐可树
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科
出处
《临床肝胆病杂志》
CAS
2006年第6期466-467,共2页
文摘
Kruppel样因子6(KLF6)是一种核转录调控因子,也称Zf9(zinc finger factor 9)或CPBP(core promoter-binding protein),可以特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核心元件而发挥生物学效应。近年来国外研究表明:在活化的肝星状细胞(HSC)中,可见KLF6的表达,KLF6可通过调节TGFβ1及Ⅰ型TGFβ、Ⅱ型TGFβ受体、尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂、α1(1)型胶原的表达,在肝纤维化过程中发挥其作用,现就KLF6与早期肝纤维化的关系综述如下。
关键词
早期肝纤维化
核转录调控因子
基因启动子
区域
TGFΒ1
TGFΒ
受体
肝纤维化过程
特异性
结合
生物学效应
分类号
R575.2 [医药卫生—消化系统]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
糖基化修饰对新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区(Spike RBD)与受体ACE2结合影响的非变性质谱研究
罗宇翔
黄静
李惠琳
《质谱学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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职称材料
2
猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定
张国庆
姜宇航
张爽
李乐天
郝嘉翼
陈竞
邹万成
李昌
李太元
高旭
金宁一
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
3
SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定
陈秀婷
汪毅祯
商慧娴
王思令
郑子峥
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
4
KLF6与早期肝纤维化
周霞
徐可树
《临床肝胆病杂志》
CAS
2006
0
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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