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检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用 被引量:5
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作者 司微 崔尚金 +1 位作者 张洪英 刘立奎 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期222-226,共5页
根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT... 根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段,与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明,有15份类似CDV强毒,5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测CDV感染,能够将强、弱毒株区分开,可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 复合转录-聚合反应 鉴别诊断
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用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究 被引量:1
2
作者 周婷 文心田 +3 位作者 曹三杰 肖驰 王新 张雪锋 《四川农业大学学报》 CSCD 2005年第2期244-246,252,共4页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA。敏感性试验表明,这2对引物可以分别到检测10-5TCID50和10-4TCID50的病毒含量。利用该方法对重庆、四川某些猪场中临床上疑似为PRRS的20份送检组织样品进行检测,只有引物P1/P2能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物;其中有15份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为75%,说明送检的样品感染的PRRSV为美洲型。试验结果表明该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,是临床上对PRRS进行快速诊断和分子流行病学调查的实用方法。 展开更多
关键词 转录-聚合反应 繁殖呼吸综合征病毒 RT-PCR
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用反转录-聚合酶链反应检测狐狸感染犬瘟热病毒的研究 被引量:5
3
作者 乔军 孟庆玲 +2 位作者 郭新怀 许宗运 陈创夫 《辽宁畜牧兽医》 2001年第2期1-2,共2页
应用反转录——聚合酶链反应技术成功地从发病银黑狐的脾脏中扩增出一条特异性的核酸带,为狐狸犬瘟热病的诊断提供了一个特异敏感的方法。
关键词 转录-聚合反应 狐狸 犬瘟热病毒 RT-PCR 检测方法
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犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用 被引量:7
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作者 乔军 孟庆龄 +1 位作者 夏咸柱 何宏彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 2001年第1期51-54,66,共5页
根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出... 根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 转录-聚合反应 检测方法
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乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:12
5
作者 高正琴 贺争鸣 +2 位作者 邢瑞昌 卫礼 王吉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期279-282,共4页
目的 建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法 根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT ... 目的 建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法 根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT nestedPCR ,将PCR产物进行了克隆测序;同时对猪细小病毒(PPV)、猴空泡病毒4 0 (SV4 0 )及正常乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞提取核酸进行PCR ,并对2 10份临床样品进行了检测。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞均扩增出10 15bp和6 2 2bp目的基因片段,而PPV、SV4 0及未感染JEV的乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞均未见特异性扩增条带,2 10份猪组织样品中未检出阳性样品。RT nestedPCR检测的最低限度为10PFU病毒。从样品核酸的提取到PCR扩增及检测结果的报告可在8小时内完成。结论 本研究建立的RT NestedPCR方法具有快速、特异、敏感、可靠的特点,可用于人用猪源性生物制品中外源性JEV的污染检测。 展开更多
关键词 乙脑病毒 反转录-嵌套式聚合酶链反应 检测
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不同类型淋巴瘤中survivin和bcl-2的表达及意义 被引量:11
6
作者 顾霞 林汉良 +3 位作者 沈艳 茹景顺 周伟 孙艺 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期159-163,共5页
 目的 探讨检测抗凋亡基因survivin和bcl- 2在不同类型淋巴瘤的表达及对淋巴瘤诊断和分型的意义。方法 石蜡标本制作组织芯片,应用免疫组化S P法检测219例淋巴瘤及13例反应性增生淋巴结石蜡标本中survivin和bcl 2表达;同时应用RT PC...  目的 探讨检测抗凋亡基因survivin和bcl- 2在不同类型淋巴瘤的表达及对淋巴瘤诊断和分型的意义。方法 石蜡标本制作组织芯片,应用免疫组化S P法检测219例淋巴瘤及13例反应性增生淋巴结石蜡标本中survivin和bcl 2表达;同时应用RT PCR技术检测18例淋巴瘤、2例淋巴结反应性增生survivin和bcl- 2mRNA表达,并进行半定量分析。结果 survivin在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuselargeBcelllymphoma,DLBL) (88. 6%, 70 /79)、淋巴母细胞淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma,LBL) (92 3%, 12 /13)、伯基特淋巴瘤(Burkitt slymphoma,BL) (2 /2)有较高的表达;而在滤泡性淋巴瘤(follicularlymphoma,FL)、黏膜相关淋巴组织边缘区B细胞淋巴瘤(extranodalmarginalzoneB celllymphomaofmucosa associatedlymphoidtissuelymphoma,MALTL)和淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤(marginalzonelymphoma,MZL)中表达较低,且多为弱阳性。高表达组与低表达组之间差异有统计学意义(P<0. 01 )。bcl- 2在小淋巴细胞淋巴瘤(smalllymphocyticlymphoma,SLL)、套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma,MCL)、外周T细胞淋巴瘤(peripheralTcelllymphoma,PTL)、间变性淋巴瘤(anaplasticlargecelllympho ma,ALCL)、DLBL和FL有较高的表达。 展开更多
关键词 淋巴瘤 SURVIVIN BCL-2 组织芯片 嵌套转录-聚合反应
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RT-PCR法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS-FLI1融合基因 被引量:7
7
作者 贡其星 范钦和 +1 位作者 张智弘 张炜明 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期151-154,共4页
目的 研究嵌套式逆转录-聚合酶链反应(nestedRT- PCR)方法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS -FLI1融合基因的可行性和临床意义。方法 收集12例外周原始神经外胚叶瘤及8例对照肿瘤标本,均为福尔马林固定石蜡包埋组织。EWS -F... 目的 研究嵌套式逆转录-聚合酶链反应(nestedRT- PCR)方法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS -FLI1融合基因的可行性和临床意义。方法 收集12例外周原始神经外胚叶瘤及8例对照肿瘤标本,均为福尔马林固定石蜡包埋组织。EWS -FLI1融合基因检测方法采用嵌套式RT- PCR法。看家基因β-actin为内参照。结果 9例标本检测到β-actin片断, 6例检测到EWS FLI1融合基因表达,其中,“1型”4例,“2型”2例。8例对照肿瘤中未检测到EWS- FLI1基因。结论 在外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中,用嵌套式RT- PCR检测EWS- FLI1融合基因是可行的方法,检测结果对肿瘤鉴别诊断和预后判断有意义。 展开更多
关键词 外周康始神经外胚叶瘤 EWS-FLI1融合基因 嵌套转录-聚合反应
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牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法的建立 被引量:8
8
作者 李新培 朱洪伟 +3 位作者 周伟光 关平原 程世鹏 温永俊 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期6-12,共7页
旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检... 旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法。应用鉴定RT-PCR检测方法可从BVDV阳性毒株中扩增出288bp的特异性片段;而分型RT-PCR检测方法可在同一体系中从BVDV1型和2型毒株中扩增出大小分别为316bp和110bp的特异性片段,但对猪瘟病毒、牛副流感3型病毒及牛传染性鼻气管炎病毒等均为阴性,最低可检测出的病毒量分别为1TCID50/mL和10TCID50/mL。临床试验证明,建立的鉴定及分型RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,具有很高的实用价值,为进一步开展流行病学调查、病毒分离等提供可靠的技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 鉴定 分型 转录-聚合反应
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牛轮状病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:5
9
作者 李巍 李宁 +1 位作者 袁万哲 孙继国 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期39-43,共5页
建立一种适用于牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)的快速检测方法。根据GenBank中登录的BRV VP7基因序列,针对其保守区设计了4条引物,利用RT-LAMP方法进行检测,并优化了反应体系与反应时间,检测了该方法的特异性和灵敏... 建立一种适用于牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)的快速检测方法。根据GenBank中登录的BRV VP7基因序列,针对其保守区设计了4条引物,利用RT-LAMP方法进行检测,并优化了反应体系与反应时间,检测了该方法的特异性和灵敏度。结果表明,该方法在等温条件下只需要50min就能检测出结果,与普通RT-PCR相比,具有较短的检测时间、良好的特异性和较高的灵敏度。论文针对BRV建立的RT-LAMP快速检测方法操作简便、无需昂贵设备、结果可视,适用于BRV在基层的快速检测。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 转录-环介导等温扩增 转录-聚合反应
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猪日本脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
10
作者 崔奕杰 杨润德 +6 位作者 刘晓慧 秦彤 陈丽君 程龙 王琳 苏晓健 孙向华 《动物医学进展》 CSCD 2006年第7期59-62,共4页
设计了1对引物,利用RT-PCR技术检测乙型脑炎病毒(JEV)。从GenBank中查出收录的31株猪乙型脑炎病毒E基因的已知序列,用DNA star软件对这31株猪乙型脑炎病毒E基因进行同源性分析,以确定扩增的靶序列。以这段靶区域为模板,利用Primer 5软... 设计了1对引物,利用RT-PCR技术检测乙型脑炎病毒(JEV)。从GenBank中查出收录的31株猪乙型脑炎病毒E基因的已知序列,用DNA star软件对这31株猪乙型脑炎病毒E基因进行同源性分析,以确定扩增的靶序列。以这段靶区域为模板,利用Primer 5软件设计了1对引物,用减毒株SA14-14-2建立了检测乙脑病毒的RT-PCR方法,经敏感性,特异性试验测定,证明该方法敏感,特异;该法可检出样品稀释至256倍的鼠脑毒,相当于0.06个TCID50,对4株河北地区JEV分离株进行检测,结果所设计引物对4株病毒均能扩增出预期的片段。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 转录-聚合反应
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RT-PCR-RFLP方法鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒 被引量:3
11
作者 张亮 田耕 +7 位作者 石双艳 袁磊 刘澣扬 黄小波 伍锐 文心田 文翼平 曹三杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1555-1560,共6页
建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消... 建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消化后于15g·L-1琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并利用建立的RT-PCR-RFLP方法对78份临床样品进行了JEV的检测及基因型鉴定。结果显示,特异性引物可扩增出长为819bp的片段,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性。经SpeⅠ酶切,基因Ⅰ型JEV RT-PCR产物被切为568和251bp 2个条带,基因Ⅲ型JEV RT-PCR产物被切为446、251和122bp 3个条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合RT-PCR产物被切为568、446、251和122bp 4个条带,该方法最低可检出1.5pg·μL-1的JEV RNA。RT-PCR-RFLP结果显示78份临床样品中有14份为JEV阳性,其中6份为基因Ⅰ型,8份为基因Ⅲ型,与核苷酸测序分析结果一致。本研究为日本脑炎病毒的实验室诊断及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别提供了一种快速有效的分子生物学方法。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 转录-聚合反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅲ型 鉴别
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马动脉炎病毒实时RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
12
作者 杨松 梁成珠 +2 位作者 高宏伟 刘永华 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 2007年第5期32-35,共4页
选取马动脉炎病毒基因组中高度保守的开放阅读框7序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测马动脉炎病毒。分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品做扩增曲线,两曲线斜率之差小于0... 选取马动脉炎病毒基因组中高度保守的开放阅读框7序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测马动脉炎病毒。分别使用马动脉炎病毒的总RNA和含有选定检测序列的克隆标准品做扩增曲线,两曲线斜率之差小于0.1,证明两者的扩增效率相同,可用选定检测序列的克隆标准品对马动脉炎病毒进行定量检测。该方法敏感,快速,准确,且无交叉污染,能满足海关及检疫部门对马动脉炎病毒快速、准确的检测要求。 展开更多
关键词 实时转录-聚合反应 定量检测 马动脉炎病毒
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牛病毒性腹泻病毒内标双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:3
13
作者 季新成 段琛 +3 位作者 王克栋 史茜 于学辉 冉多良 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期17-21,共5页
为了对BVDV-1和BVDV-2进行同步检测,针对不同基因型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因组高度保守的5′-UTR核苷酸序列设计特异性引物(扩增长度为288bp)。为了指示假阴性结果,以牛GAPDH基因为内标基因,设计特异性引物(扩增序列长度为152bp)。... 为了对BVDV-1和BVDV-2进行同步检测,针对不同基因型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因组高度保守的5′-UTR核苷酸序列设计特异性引物(扩增长度为288bp)。为了指示假阴性结果,以牛GAPDH基因为内标基因,设计特异性引物(扩增序列长度为152bp)。通过反应条件的优化,建立了BVDV通用型内标双重RT-PCR检测方法,该方法可以监测RNA提取与RT-PCR反应过程,指示假阴性结果的发生。该方法的检测灵敏度约为100TCID50/mL,且具有较好的特异性和可重复性。通过对566份临床样品检验,检测到阳性样品19份,阳性率3.36%。该方法可用于临床样品中BVDV检测,并可对检测结果进行质量控制。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 内标 双重转录-聚合反应 共扩增
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内蒙古和西藏自治区野生反刍动物小反刍兽疫监测 被引量:3
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作者 王华 包静月 +3 位作者 吴晓东 刘春菊 王淑娟 王志亮 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期124-126,共3页
为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR... 为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸,同时用竞争ELISA检测反刍野生动物血清中的小反刍兽疫病毒特异性抗体。结果检测样品中未发现阳性样品。说明该批次样品中没有发现野生动物感染小反刍兽疫病毒。研究结果可为小反刍兽疫防控工作提供依据。 展开更多
关键词 刍兽疫 联免疫吸附试验 转录-聚合反应 野生刍动物 监测
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大豆防御应答相关WRKY转录因子的克隆与表达分析 被引量:2
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作者 林国强 陈志雄 +2 位作者 胡润芳 张广庆 滕振勇 《福建农业学报》 CAS 2011年第1期29-32,共4页
WRKY转录因子与植物的生物和非生物胁迫应答密切相关。通过RT-PCR方法获得了与拟南芥转录因子WRKY14的相似性高达92%的大豆WRKY转录因子GmWRKY的cDNA序列,并利用半定量RT-PCR分析了GmWRKY在大豆不同组织中及不同非生物胁迫下的表达情况... WRKY转录因子与植物的生物和非生物胁迫应答密切相关。通过RT-PCR方法获得了与拟南芥转录因子WRKY14的相似性高达92%的大豆WRKY转录因子GmWRKY的cDNA序列,并利用半定量RT-PCR分析了GmWRKY在大豆不同组织中及不同非生物胁迫下的表达情况。结果表明:GmWRKY在大豆根、茎、叶中均有表达。在铝、低磷、盐等胁迫下,GmWRKY表达均有不同程度的增加,说明非生物胁迫下GmWRKY在大豆抗逆中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 大豆 WRKY 半定量转录-聚合反应 非生物胁迫
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成人慢性膝关节炎滑膜组织μ-阿片受体表达的变化 被引量:2
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作者 袁红斌 徐海涛 +2 位作者 朱秋峰 刘刚 石学银 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期119-120,共2页
关键词 阿片类药物 滑膜组织 膝关节炎 受体表达 慢性 成人 转录-聚合反应 阿片受体激动剂
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牛病毒性腹泻病毒两种基因型双重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 王勤 何博 +4 位作者 欧云文 刘俐君 杨磊 潘琴 张杰 《动物医学进展》 北大核心 2021年第9期24-29,共6页
为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法,根据BVDV-1(AF091605.1、KF501393.1、MK204904.1、MN513404.1和MG923683.1)和BVDV-2(AF502399.1、MG436782.1、AF145969.1、KC176777.1和MN513411.1)流行毒株5′-UTR保守序列设计2对... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法,根据BVDV-1(AF091605.1、KF501393.1、MK204904.1、MN513404.1和MG923683.1)和BVDV-2(AF502399.1、MG436782.1、AF145969.1、KC176777.1和MN513411.1)流行毒株5′-UTR保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,建立可同时检测BVDV-1和BVDV-2的双重RT-PCR方法。结果显示,该检测方法重复性好、特异性强,可分别检测出BVDV-1和BVDV-2核酸,与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;最低检测量为1×103拷贝/μL和1×102拷贝/μL;对达州及周边地区的332份临床样品进行检测,结果表明,该地区BVDV-1阳性率为7.83%,BVDV-2阳性率为0.90%,未检出BVDV-1和BVDV-2混合感染的临床样品。综上所述,建立的双重RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,可用于BVDV的临床诊断和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒1型 牛病毒性腹泻病毒2型 双重转录-聚合反应
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人IFN-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性研究 被引量:2
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作者 王骊丽 耿信笃 韩骅 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期540-544,共5页
从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现... 从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达,表达的目的蛋白可占菌体总蛋白的55%。用5L和50L发酵罐放量生产的产物,经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品,其比活性与天然蛋白相近。 展开更多
关键词 人干扰素-γ 转录聚合反应 重组蛋白表达 复性与纯化 高效疏水色谱
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平阳霉素作用静脉畸形内皮细胞后VCAM-1、ICAM-1、ICAM-3表达 被引量:2
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作者 贾玉林 张文峰 +1 位作者 贾俊 赵怡芳 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第9期883-887,共5页
目的:研究平阳霉素(PYM)作用于人静脉畸形内皮细胞(HVMECs)后Ig粘附分子(VCAM-1、ICAM-1、ICAM-3)表达。方法:体外培养HVMECs,采用细胞ELISA和RT-PCR技术检测不同浓度PYM作用人HVMECs后Ig粘附分子表达。结果:PYM作用人HVMECs后粘附分子... 目的:研究平阳霉素(PYM)作用于人静脉畸形内皮细胞(HVMECs)后Ig粘附分子(VCAM-1、ICAM-1、ICAM-3)表达。方法:体外培养HVMECs,采用细胞ELISA和RT-PCR技术检测不同浓度PYM作用人HVMECs后Ig粘附分子表达。结果:PYM作用人HVMECs后粘附分子表达具有时间浓度效应。PYM能诱导VCAM-1在人HVMECs表达,2h后明显增高,8h后达到峰值,12h后下降,48h后呈阴性表达。PYM能促进ICAM-1在人HVMECs表达,12h后显著增高,18h最高,24h逐渐下降。PYM能促进ICAM-3表达,12h后逐渐增高,24h达到峰值,72h后1CAM-3仍高表达。0.01~1mg/L PYM能诱导或促进粘附分子表达,表达水平与药物浓度成正相关,1mg/L PYM作用人HVMECs后粘附分子表达较高,10mg/L PYM作用人HVMECs后,表达下降。RT-PCR检测PYM作用人HVMECs 2、6、12h能诱导或促进VCAM-1、ICAM-1和ICAM-3mRNA表达,8、12、18h后mRNA表达最高。1mg/L PYM作用于HVMECs后,粘附分子mRNA表达最高,mR-NA表达具有时间浓度效应。结论:低浓度PYM能诱导或促进人HVMECs粘附分子表达,具有时间浓度效应。 展开更多
关键词 内皮细胞 粘附分子 细胞培养转录-聚合反应平阳霉素
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乙型脑炎病毒SA14-14-2株prM基因的克隆与测序 被引量:1
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作者 王祥 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 贾杏林 吴美洲 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期87-89,共3页
以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明... 以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明我国疫苗株SA14-14-2的prM基因核苷酸序列与GenBank收录的完全一致。prM基因的获得为进一步研究该基因的免疫原性以及乙型脑炎病毒基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎 乙型脑炎病毒 SAl4-14-2株 prM基因 基因克隆 序列分析 转录-聚合反应
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