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火龙果Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶序列的克隆及分析 被引量：8
1
作者 彭磊 吴艳 +3 位作者 刘小翠 杨鵾 范付华 文晓鹏 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期186-195,共10页
【目的】克隆Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶(RT)序列并分析其特性,为火龙果遗传变异和进化研究提供新的信息。【方法】根据Ty3-gypsy类反转录转座子RT保守区设计简并引物,从红肉和白肉火龙果及其突变体中扩增出430 bp左右的目标片段... 【目的】克隆Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶(RT)序列并分析其特性,为火龙果遗传变异和进化研究提供新的信息。【方法】根据Ty3-gypsy类反转录转座子RT保守区设计简并引物,从红肉和白肉火龙果及其突变体中扩增出430 bp左右的目标片段,回收、克隆、测序获得RT序列,并进行生物信息学分析;采用RT-PCR检测其转录活性。【结果】共获得82条RT序列,其中有55条序列发生终止密码子突变,5条序列发生移码突变;经RT序列对比,火龙果与水稻、拟南芥有较高的同源性;3条RT序列具有转录活性。【结论】火龙果Ty3-gypsy类反转录转座子RT序列具有高度异质性,部分序列具有转录活性,与其他物种存在反转录转座子的横向传递。 展开更多
关键词 火龙果 Ty3-gypsy类反转录转座子 反转录酶 异质性 转录活性
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miR-1182调控胃癌细胞人端粒酶反转录酶的分子机制及其对迁移能力的影响 被引量：4
2
作者 张丹 郝宁波 +5 位作者 唐波 吕沐瀚 谢睿 胡长江 汪苏敏 杨仕明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1074-1077,共4页
目的研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响。方法胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检... 目的研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响。方法胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检测转染后细胞hTERT的表达变化;进一步通过生物信息学预测miR-1182与hTERT mRNA的结合位点,双荧光素酶实验分析miR-1182对hTERT mRNA的作用机制;Transwell实验检测转染miR-1182类似物对MKN28细胞体外迁移能力的影响。结果 qRT-PCR表明miR-1182组的miR-1182的相对表达量(10.168±2.645)明显高于对照组(1.008±0.167)(P<0.01)。Western blot结果显示在胃癌细胞系中过表达miR-1182后,hTERT的蛋白水平下调。双荧光素酶实验表明miR-1182可与hTERT mRNA的ORF区结合,且其主要结合部位为hTERT mRNA的ORF-1;在Transwell迁移实验中,miR-1182类似物转染细胞后,miR-1182组穿膜细胞数为(23.333±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(71.000±4.582)/视野,miR-1182组细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.01)。结论 miR-1182通过与胃癌细胞hTERT的ORF区结合,从而在转录后水平抑制hTERT的表达,并发现其可抑制胃癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 端粒酶反转录酶 miR-1182 胃肿瘤 肿瘤转移
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人参总RNA提取方法及反转录酶的比较 被引量：6
3
作者 张涛 韩梅 +1 位作者 刘翠晶 胥苗苗 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第8期34-37,共4页
为了探索人参根、叶片总RNA的提取方法,以多年生人参根、叶片为材料,比较7种提取方法的总RNA质量。结果表明:除改良CTAB法对人参根总RNA的提取效果不明显,其余方法均能从人参根、叶片中提取、分离到总RNA,其中RNAPure高纯总RNA快速提取... 为了探索人参根、叶片总RNA的提取方法,以多年生人参根、叶片为材料,比较7种提取方法的总RNA质量。结果表明:除改良CTAB法对人参根总RNA的提取效果不明显,其余方法均能从人参根、叶片中提取、分离到总RNA,其中RNAPure高纯总RNA快速提取试剂盒法能提取到完整性较好、纯度较高的总RNA,琼脂糖凝胶电泳显示的条带清晰完整,根中RNA的D260 nm/D280 nm为1.87,RNA浓度为351.8 ng/μL;用Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)试剂盒、Prime Script Reverse Transcriptase试剂盒、Go ScriptTMReverse Transcription System试剂盒对提取的总RNA进行反转录,其中用Go ScriptTMReverse Transcription System试剂盒反转录后进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳条带较亮,证明转录效果较好。经反转录、PCR证明,提取的总RNA适用于后续的分子试验研究。 展开更多
关键词 人参 根 叶片 总RNA 提取方法 反转录酶
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再谈乙型肝炎病毒反转录酶区/表面抗原区基因变异的临床发生特点及意义 被引量：9
4
作者 刘妍 徐东平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期361-366,共6页
在我国,拉米夫定(LAM)、阿德福韦酯(ADV)和恩替卡韦(ETV)长期广泛用于临床抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗,导致恩替卡韦耐药患者累积增加,耐药变异形式复杂多样,其挽救治疗也成了临床关注的重点问题。HBV聚合酶/反转录酶(RT)区/表面抗原(HBsA... 在我国,拉米夫定(LAM)、阿德福韦酯(ADV)和恩替卡韦(ETV)长期广泛用于临床抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗,导致恩替卡韦耐药患者累积增加,耐药变异形式复杂多样,其挽救治疗也成了临床关注的重点问题。HBV聚合酶/反转录酶(RT)区/表面抗原(HBsAg)S区基因重叠,核苷(酸)类似物引起的耐药变异可同时造成S区基因变异,其中rt A181T变异可同时引起sW172终止突变,形成截短型HBsAg,影响疾病进展;rt A181T有时还可引起sW172非终止变异,其临床发生特点和意义尚不明确;HBsAg阴转是慢性乙型肝炎功能性治愈的重要标志,但临床上有少数患者可同时检出血清HBsAg和HBs Ab阳性,其意义与机制尚未完全明确。我们的研究发现,发生在HBsAg主要亲水区(MHR)的免疫逃逸相关变异多见于隐匿性HBV感染患者和HBsAg/HBs Ab双阳性的HBV感染患者,其中如发生新增N-糖基化变异,则进展为肝细胞癌的风险显著增加;从患者分离的免疫逃逸变异株可显著降低HBsAg的抗原性和反应性。上述研究有助于深入认识HBV RT/S基因变异发生的临床特点、机制和意义,帮助临床合理制定抗病毒治疗方案,预测疾病进展风险。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 反转录酶区 耐药变异 HBsAg主要亲水区 免疫逃逸相关变异
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人端粒酶反转录酶启动子的克隆与肿瘤靶向治疗的研究 被引量：2
5
作者 李帆 谭晓华 +2 位作者 彭晓君 蔡红兵 胡大荣 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期207-211,共5页
目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体... 目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体;将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后,通过RT-PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用。结果成功克隆hTERT上游-280bp^+40bp的核心启动子。RT-PCR和β-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达;hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应。结论hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略。 展开更多
关键词 肿瘤 HTERT启动子 GCV 调控 表达 人端粒酶反转录酶 特异性杀伤 克隆 目的基因 LACZ基因
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端粒酶反转录酶基因在肝细胞癌中的表达及其意义 被引量：2
6
作者 张营 赵金满 尚海 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第11期951-953,共3页
目的研究肝细胞癌中端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）基因的表达及其临床意义。方法采用原位杂交方法分别对肝细胞癌及肝炎后肝硬化组织中hTERTmRNA进行检测。结果肝癌中hTERTmRNA表达阳性率明显高于肝... 目的研究肝细胞癌中端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）基因的表达及其临床意义。方法采用原位杂交方法分别对肝细胞癌及肝炎后肝硬化组织中hTERTmRNA进行检测。结果肝癌中hTERTmRNA表达阳性率明显高于肝硬化组织,差别有统计学意义（P〈0.01）;中、低分化的肝癌hTERT mRNA阳性强度高于高分化者,差别有统计学意义（P〈0.05）;肝癌中hTERTmRNA表达阴性组患者术后3年生存率高于阳性组患者,差别有统计学意义（P〈0.05）;hTERTmRNA表达弱阳性的肝癌患者生存时间较强阳性者延长,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论hTERTmRNA阳性表达普遍存在于肝癌组织中,通过检测肝癌中hTERTmRNA表达情况可用来作为肝癌诊断及预后估计的新标志物。 展开更多
关键词 端粒酶 端粒酶反转录酶mRNA 肝细胞癌 肝硬化 预后
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栽培种花生Ty1-copia类反转录转座子反转录酶序列的克隆及分析
7
作者 熊发前 刘菁 +9 位作者 阳太亿 蒋菁 贺梁琼 唐秀梅 韩柱强 钟瑞春 吴海宁 黄志鹏 唐荣华 刘俊仙 《花生学报》 北大核心 2021年第3期1-10,共10页
克隆Ty1-copia类反转录转座子反转录酶序列并分析其特性,为开发栽培种花生基于LTR反转录转座子的分子标记奠定基础。根据Ty1-copia类反转录转座子反转录酶的保守区设计简并引物对,利用PCR技术对栽培种花生品种“桂花1026”的基因组DNA... 克隆Ty1-copia类反转录转座子反转录酶序列并分析其特性,为开发栽培种花生基于LTR反转录转座子的分子标记奠定基础。根据Ty1-copia类反转录转座子反转录酶的保守区设计简并引物对,利用PCR技术对栽培种花生品种“桂花1026”的基因组DNA进行扩增,目的条带经回收、克隆、测序,最后对序列进行生物信息学分析。目的条带大小约260 bp,克隆获得了34条反转录酶序列,序列长度变化范围为256~267 bp,AT所占比例范围为51.36%~67.79%,AT与GC比例范围为1.06~2.10,序列间相似性范围为44.9%~98.5%,序列存在较高异质性,表现为缺失突变与点突变;34条反转录酶序列系统聚类为3个家族,家族Ⅰ和家族Ⅱ分别占到了总序列数的55.88%和35.29%;翻译成氨基酸后,有14条序列发生了无义突变,序列间相似性范围为11.4%~98.9%,呈现高度异质性;序列间保守基序也存在较大差异,呈现较高异质性;对栽培种花生与其他物种植物该类型反转录酶的氨基酸序列构建系统进化树,结果显示所有序列被分为7类,其中Ⅰ类和Ⅱ类分别包含16条和11条栽培种花生反转录酶序列,表明栽培种花生反转录酶序列具有比较高的保守性,同时栽培种花生也与葡萄、马铃薯、辣椒、烟草、番茄、大豆、甜菜、草莓等物种植物的反转录酶序列之间具有较近的亲缘关系,表明不同物种植物的Ty1-copia类反转录转座子之间有可能存在着横向传递。本研究所获得的反转录酶序列为栽培种花生Ty1-copia反转录转座子的分子标记开发利用及花生分子育种奠定了一定基础。 展开更多
关键词 栽培种花生 Ty1-copia类反转录转座子 反转录酶 异质性
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家蚕微孢子虫反转录酶基因部分序列的克隆与分析
8
作者 高永珍 黄可威 常智杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第2期120-125,共6页
从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis)中通过RT PCR扩增出反转录酶 (reversetranscriptase)基因的部分序列(大小为 1 2kb) ,经 3′ RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)获得其 3′端序列 ,但经两次 5′ RACE后仍未发现起始密码子 (ATG)。目... 从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis)中通过RT PCR扩增出反转录酶 (reversetranscriptase)基因的部分序列(大小为 1 2kb) ,经 3′ RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)获得其 3′端序列 ,但经两次 5′ RACE后仍未发现起始密码子 (ATG)。目前得到的cDNA序列为 330 3bp ,推测其编码 110 1个氨基酸的多肽 ,经同源性比较分析 ,发现该序列与许多生物体的反转录酶基因有一定的同源性。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 反转录酶基因 RT-PCR RACE 同源性 基因克隆 序列分析
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马传贫病毒白细胞弱毒疫苗毒株反转录酶基因克隆及序列分析比较
9
作者 张宝山 刘永刚 +4 位作者 卢景良 孔宪刚 刘胜旺 杨威 马云燕 《中国预防兽医学报》 CSCD 2000年第2期99-101,共3页
本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已... 本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已发表其它马传贫病毒反转录酶基因序列比较 ,发现在氨基酸和核苷酸水平差异率分别为 1 4 .0 %和 1 6 .6 %。变异氨基酸随机分布于整个基因上 ,无明显规律。在反转录病毒高度保守的酶基因上发现这样大的差异 ,展示出马传贫驴强毒作为马传贫弱毒疫苗亲本毒株的独特分子特性。 展开更多
关键词 马传贫驴强毒 反转录酶基因 克隆 序列分析 EIAV
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牛白血病病毒反转录酶的纯化及结构的研究
10
作者 吴保成 谢占武 +1 位作者 刘瑞凝 李国有 《中国畜禽传染病》 CSCD 1992年第6期44-47,共4页
将FLK/BLV培养上清经差速和梯度离心提纯的牛白血病病毒(BLV).经NP-40裂解后.分别采用Poly(A)·oligo(dT)_(12_18_)纤维素.Poly(G)-DEAE-纤维素和Poly(G)-磷酸纤维素等亲和层析法纯化了BLV反转录酶(RT)及前体.酶活性回收率分别为16.... 将FLK/BLV培养上清经差速和梯度离心提纯的牛白血病病毒(BLV).经NP-40裂解后.分别采用Poly(A)·oligo(dT)_(12_18_)纤维素.Poly(G)-DEAE-纤维素和Poly(G)-磷酸纤维素等亲和层析法纯化了BLV反转录酶(RT)及前体.酶活性回收率分别为16.6％、3.34％和38.6％。经Cs-930凝胶扫描分析,酶制剂中RT的相对百分含量分别为53.9％、67.5％.实验表明,Poly(G)-磷酸纤维素层析是提纯BLV-RT的有效方法;用DEAE-纤维素和肝素-琼脂糖层析法不能提纯BLV-RT.提纯的酶制剂经SDS-PAGE分析,测得RT分子量为69.6kd(P69.6).发现了酶的前体蛋白.其分子量为95kd(P95)同时还发现有一条分子置为15kd(P15)的多肽区带,推测为BLV该酸内切酶结构的一部分。 展开更多
关键词 牛 白血病 病毒 反转录酶 纯化
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牛白血病病毒反转录酶的理化及生物学特性
11
作者 吴保成 谢占武 +1 位作者 刘瑞凝 李国有 《中国畜禽传染病》 CSCD 1992年第3期59-61,9,共4页
采用外源法及内源法对牛白血病病毒反转录酶(BLV-RT)的理化及生物学特性进行了探讨。结果表明;纯化的BLV-RT对病毒RNA和细胞RNA没有模板特异性;对细胞DNA和poly(dA)。oligo(dT)12-18仅有较低的亲和性;以poly(A)。oligo(dT)_(12-18)为模... 采用外源法及内源法对牛白血病病毒反转录酶(BLV-RT)的理化及生物学特性进行了探讨。结果表明;纯化的BLV-RT对病毒RNA和细胞RNA没有模板特异性;对细胞DNA和poly(dA)。oligo(dT)12-18仅有较低的亲和性;以poly(A)。oligo(dT)_(12-18)为模板引物时酶活性最高。BLV-RT对热不稳定;酶作用的最适pH为8.3;在内源性反应中。Mn^(++)和Mg^(++)对酶活性均有促进作用;高浓度K+及放线菌素D对BLV-RT有抑制作用;无机磷酸盐列酶活性影响不大。 展开更多
关键词 牛 白血病 病毒 反转录酶 古物学
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乙型肝炎病毒反转录酶区新型多重耐药突变的鉴定 被引量：7
12
作者 陈容娟 刘妍 +6 位作者 罗丹 黄碧霞 王钧 思兰兰 李晓东 徐东平 段昌柱 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期633-638,共6页
目的分析乙型肝炎病毒(HBV)反转录酶区rtA181S相关新型多重耐药突变的临床发生特点及表型特征。方法回顾性分析2012-2017年就诊于解放军总医院第五医学中心(原解放军第302医院)并接受核苷(酸)类似物(NAs)耐药检测的16443例慢性HBV感染... 目的分析乙型肝炎病毒(HBV)反转录酶区rtA181S相关新型多重耐药突变的临床发生特点及表型特征。方法回顾性分析2012-2017年就诊于解放军总医院第五医学中心(原解放军第302医院)并接受核苷(酸)类似物(NAs)耐药检测的16443例慢性HBV感染者的临床资料和序列信息,统计经典NAs耐药突变以及rtA181S相关突变类型;对检出率最高的rtA181S+T184I+M204I突变样本进行克隆测序(≥20个克隆/样本);通过表型分析了解病毒的复制力及药物敏感性。结果16443例慢性HBV感染者中共检出124例rtA181S突变,其中21例与拉米夫定(LAM)耐药突变共存,74例与恩替卡韦耐药突变(ETVr)共存,rtA181S+T184I+M204I突变占rtA181S+ETVr突变的77.0%(57/74)。对有动态临床诊疗信息患者的分析显示,rtA181S+T184I+M204I突变可在使用阿德福韦酯(ADV)、ETV和(或)LAM/替比夫定(LdT)后出现,并伴随病毒学突破或应答不佳。体外表型耐药分析显示rtA181S+T184I+M204I突变株对LAM、ADV和ETV的耐药倍数为野生株的>1000倍、3.9倍和383.3倍,但对替诺福韦酯(TDF)仍敏感。结论rtA181S+T184I+M204I突变是一种新型多重耐药突变,与患者使用ADV、ETV和(或)LAM/LdT应答不佳相关,临床上可考虑用TDF对检出此类型多重耐药突变的患者进行挽救治疗。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 反转录酶区 多重耐药突变 抗病毒治疗 应答不佳
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乙型肝炎病毒反转录酶区耐药突变患者HBsAg主要亲水区免疫逃逸相关突变研究 被引量：8
13
作者 黄碧霞 刘妍 +7 位作者 思兰兰 陈容娟 李晓东 罗丹 刘璐洁 王钧 徐东平 刘新光 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期526-530,共5页
目的分析RT耐药突变患者乙肝表面抗原(HBsAg)主要亲水区(MHR)免疫逃逸相关突变的特点。方法回顾性分析2007年7月-2017年8月于解放军总医院第五医学中心接受NAs抗病毒治疗并行耐药检测的6917例C基因型CHB患者的临床资料,并根据是否发生... 目的分析RT耐药突变患者乙肝表面抗原(HBsAg)主要亲水区(MHR)免疫逃逸相关突变的特点。方法回顾性分析2007年7月-2017年8月于解放军总医院第五医学中心接受NAs抗病毒治疗并行耐药检测的6917例C基因型CHB患者的临床资料,并根据是否发生耐药突变分为HBV RT耐药突变组与HBV RT野生组,比对两组HBsAg MHR免疫逃逸相关突变的特点。结果经抗病毒治疗的CHB患者HBV RT耐药相关突变总体检出率为37.37%(2585/6917);且HBV RT耐药突变组HBsAg MHR总体突变率显著高于HBV RT野生组(30.00%vs.17.13%,P<0.05);HBV RT耐药突变组患者的sQ101K/R/H、sS114T/A/L、sT/I126S/N/A、sG130N/R/K/A、sM133T/I、sS143T/L、sA159V/G、sE164D/G等单点突变检出率均高于HBV RT野生组(P<0.05)。结论HBV RT耐药突变患者具有更高的HBsAg MHR免疫逃逸相关突变检出率,提示MHR免疫逃逸相关突变与HBV RT耐药突变密切相关。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 反转录酶区 耐药突变 主要亲水区 免疫逃逸相关突变
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腺病毒介导的人端粒酶反转录酶牙周膜细胞系的建立
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作者 孙贵军 秦晓东 +5 位作者 王世琴 胡慧珍 陆笑颜 金佳佳 吴生荣 何祥一 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-30,共6页
目的通过腺病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的牙周膜细胞系,以构建腺病毒介导的高效、稳定的hTERT牙周膜细胞系。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因编码序列,构建同源重组腺病毒质粒p Ad-pshuttle-cmv-h TERT... 目的通过腺病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的牙周膜细胞系,以构建腺病毒介导的高效、稳定的hTERT牙周膜细胞系。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因编码序列,构建同源重组腺病毒质粒p Ad-pshuttle-cmv-h TERT,收集腺病毒颗粒后感染人牙周膜细胞,实时荧光定量PCR检测h TERT及成骨相关基因碱性磷酸酶、核心结合因子2、骨涎蛋白、骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原蛋白m RNA的表达水平,茜素红染色观察成骨分化能力,CCK-8检测细胞增殖能力。结果成功构建了含h TERT基因的腺病毒颗粒并感染牙周膜细胞,感染细胞与正常牙周膜细胞形态相似;实时荧光定量PCR结果显示h TERT及成骨相关基因在感染细胞中高表达;茜素红染色显示牙周膜细胞系成骨能力强;CCK-8结果示牙周膜细胞系增殖能力强。结论通过腺病毒法成功建立了过表达h TERT的人牙周膜细胞系,其具有较强的成骨分化能力,这为研究牙周膜再生机制提供了一个理想的细胞系。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 人端粒酶反转录酶 腺病毒 稳定表达 成骨分化
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反转录原位聚合酶链反应的建立及用于肝癌组织切片细胞内HCV　RNA的检测
15
作者 褚桂珍 蒋明德 +5 位作者 曾维政 张建华 陈泰庆 邓桂英 楚人俊 张大华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1994年第4期26-27,共2页
反转录原位聚合酶链反应的建立及用于肝癌组织切片细胞内ＨＣＶＲＮＡ的检测褚桂珍，蒋明德，曾维政，张建华，陈泰庆，邓桂英，楚人俊，张大华（成都军区总医院消化内科，成都６１００８３）我们建立了ＩＳＰＣＲ技术，并对２７例ＨＣ... 反转录原位聚合酶链反应的建立及用于肝癌组织切片细胞内ＨＣＶＲＮＡ的检测褚桂珍，蒋明德，曾维政，张建华，陈泰庆，邓桂英，楚人俊，张大华（成都军区总医院消化内科，成都６１００８３）我们建立了ＩＳＰＣＲ技术，并对２７例ＨＣＣ组织切片进行ＨＣＶＲＮＡ的检测，... 展开更多
关键词 RNA HCV 组织切片 成都军区总医院 反转录酶 细胞内定位 硬化肝 癌周组织 冰冻切片 楚人
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反转录聚合酶链式反应检测猪繁殖与呼吸综合征持续性感染 被引量：10
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作者 李华 杨汉春 +3 位作者 高云 黄芳芳 陈海涛 郭玉璞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期3-4,共2页
猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性的感染和病毒血症。本研究利用反转录聚合酶链式反应检测了PRRSV BJ- 4株单独感染 SPF仔猪和接种 PRRSV BJ- 4后再接种猪瘟疫苗不同时间的血清中病毒的存在。结果显示在感染2 4h后的血清样品... 猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性的感染和病毒血症。本研究利用反转录聚合酶链式反应检测了PRRSV BJ- 4株单独感染 SPF仔猪和接种 PRRSV BJ- 4后再接种猪瘟疫苗不同时间的血清中病毒的存在。结果显示在感染2 4h后的血清样品中就发现有病毒 RNA存在 ,病毒血症至少持续到感染后 37天 ,到第 5 0天时已经消失。 PRRSV BJ- 4感染后再接种猪瘟疫苗的仔猪的 PRRSV病毒血症没有受到影响。这些结果提供了 PRRSV持续性感染的直接证据 ,解释了实际生产中通过引进临床正常但已经感染了猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪群造成猪场内病毒的传播和长期感染的存在 。 展开更多
关键词 猪 繁殖呼吸综合征 反转录聚合酶链式反应 血清 持续性感染
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多重反转录聚合酶链反应快速检测鉴别H9亚型禽流感病毒方法的建立 被引量：3
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作者 庞耀珊 谢芝勋 +2 位作者 邓显文 唐小飞 刘加波 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期858-860,共3页
目的参考AIV M基因和HA基因序列,设计了两对引物。其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有亚型AIV,跨幅244 bp;XZ H9-1和XZ H9-2为H9亚型特异性引物,跨幅488 bp。方法利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快... 目的参考AIV M基因和HA基因序列,设计了两对引物。其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有亚型AIV,跨幅244 bp;XZ H9-1和XZ H9-2为H9亚型特异性引物,跨幅488 bp。方法利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H9亚型AIV的多重RT-PCR技术。结果与结论特异性和敏感性试验结果表明,该技术对H9亚型AIV同时扩增出两条大小分别为244 bp和488 bp的cDNA片段,对其他亚型AIV只扩增出244bp的cDNA片段,对其他常见禽病病原无特异性扩增,结果为阴性;该多重RT-PCR的通用引物对AIV RNA的最低检出量为1pg,对H9亚型RNA的最低检出量为10 pg。 展开更多
关键词 多重反转录聚合酶链反应 禽流感病毒 H9亚型
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犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用 被引量：7
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作者 乔军 孟庆龄 +1 位作者 夏咸柱 何宏彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 2001年第1期51-54,66,共5页
根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出... 根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 反转录-聚合酶链反应 检测方法
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检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用 被引量：5
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作者 司微 崔尚金 +1 位作者 张洪英 刘立奎 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期222-226,共5页
根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT... 根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段,与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明,有15份类似CDV强毒,5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测CDV感染,能够将强、弱毒株区分开,可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 复合反转录-套式聚合酶链式反应 鉴别诊断
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用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究 被引量：1
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作者 周婷 文心田 +3 位作者 曹三杰 肖驰 王新 张雪锋 《四川农业大学学报》 CSCD 2005年第2期244-246,252,共4页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA。敏感性试验表明,这2对引物可以分别到检测10-5TCID50和10-4TCID50的病毒含量。利用该方法对重庆、四川某些猪场中临床上疑似为PRRS的20份送检组织样品进行检测,只有引物P1/P2能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物;其中有15份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为75%,说明送检的样品感染的PRRSV为美洲型。试验结果表明该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,是临床上对PRRS进行快速诊断和分子流行病学调查的实用方法。 展开更多
关键词 反转录-聚合酶链反应 猪 繁殖呼吸综合征病毒 RT-PCR
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