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新城疫强毒特异性反转录荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 徐敏丽 于江 +7 位作者 逯璐 张玉玉 任素芳 陈智 孙文博 郭立辉 吴家强 张琳 《山东农业科学》 北大核心 2021年第8期112-118,共7页
为建立一种敏感性高、特异性强、成本更低的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)特异性反转录荧光定量PCR(reverse transcription fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测方法,基于对所有已知NDVF基因序列特征的分析,设计了... 为建立一种敏感性高、特异性强、成本更低的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)特异性反转录荧光定量PCR(reverse transcription fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测方法,基于对所有已知NDVF基因序列特征的分析,设计了一对强毒特异性引物,以体外转录制备的RNA标准品为阳性模板,构建了标准曲线,并对该方法的敏感性、特异性和准确性进行了验证。结果表明,基于SYBRGreenⅠ嵌合荧光技术建立的检测方法能够特异性扩增NDV强毒,最低可检测1拷贝/μL的RNA,用于临床毒株的检测结果与序列测定一致,可作为适合大规模监测NDV强毒的方法和工具。 展开更多
关键词 新城疫病毒 强毒 反转录荧光定量pcr 监测
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盐胁迫下构树DREB转录因子基因表达的实时荧光定量PCR分析 被引量:20
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作者 杨帆 丁菲 杜天真 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第4期146-150,共5页
转录因子是指那些专一性地结合于DNA特定序列上、能激活或抑制其他基因转录的蛋白质(王少峡等,2004)。DREB(dehydration responsive element binding protein)转录因子是一种特异性的转录因子,当植物在干旱、低温及盐等逆境胁迫下,
关键词 实时荧光定量pcr 构树 DREB转录因子 CT值 盐胁迫
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干旱胁迫下木薯AP_2转录因子的荧光定量PCR分析 被引量:2
3
作者 李雅韵 廖文彬 +4 位作者 王斌 杨义伶 郭鑫 杨子 彭明 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期126-131,I0003,共7页
为研究木薯的两个AP2基因在干旱胁迫下的表达模式,对木薯品种华南5号进行干旱胁迫处理,提取各个时间点离区部位的RNA,以其反转录的cDNA为模板,应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测AP2转录因子基因的差异性表达。结果表明,目的基因的熔解曲... 为研究木薯的两个AP2基因在干旱胁迫下的表达模式,对木薯品种华南5号进行干旱胁迫处理,提取各个时间点离区部位的RNA,以其反转录的cDNA为模板,应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测AP2转录因子基因的差异性表达。结果表明,目的基因的熔解曲线都只出现一个峰,说明引物特异性强,且各基因的扩增效率与参照基因Actin接近,试验结果可用2-ΔΔCT计算法进行分析。经分析,两个AP2家族成员在干旱胁迫下均诱导表达,其表达模式不完全相同且存在一定的相关性,这与之前做过的基因芯片杂交结果相符。 展开更多
关键词 干旱胁迫 AP2转录因子 荧光定量pcr 基因表达
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禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析 被引量:4
4
作者 郭慧芳 李宁 +5 位作者 王白玉 乔麒龙 黄庆 李永涛 王增 赵军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期195-201,共7页
旨在分析禽腺病毒血清4型(FAdV-4)感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR... 旨在分析禽腺病毒血清4型(FAdV-4)感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化,成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法对致病性FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行了分析。结果显示,所设计的NLRP3引物可特异性扩增鸡NLRP3基因,建立的实时荧光定量PCR对鸡NLRP3标准质粒的扩增曲线良好,标准品的拷贝数与Cq值呈现良好的线性关系。与对照组相比,NLRP3分子在FAdV-4感染鸡肝和脾中的转录水平极显著高于对照组(P<0.001),在盲肠扁桃体和法氏囊的表达显著高于对照组(P<0.01)。本研究所建立的鸡NLRP3基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR可以检测FAdV-4感染鸡不同组织中NLRP3的转录水平;致病性FAdV-4感染所造成的组织炎症损伤与NLRP3分子密切相关。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 鸡NLRP3基因 实时荧光定量pcr 组织炎症 转录水平
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荧光定量PCR检测肺癌外周血CEAmRNA CK_(19)mRNA CK_(20)mRNA临床意义 被引量:1
5
作者 陈晟 赵强 马胜林 《浙江临床医学》 2006年第11期1187-1188,共2页
关键词 荧光定量pcr检测 CK19MRNA CK20MRNA CEAMRNA 外周血 临床意义 转录聚合酶链 手术后复发
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基于转录组学研究宁乡猪肌肉的生长发育
6
作者 张维 崔清明 +9 位作者 任慧波 陈晨 李华丽 胡雄贵 朱吉 杨仕柳 李述初 张四阳 彭英林 刘莹莹 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期80-88,共9页
分别选取3头1、60、120、180、240、300、360日龄(分别记为ND1、ND60、ND120、ND180、ND240、ND300、ND360)宁乡猪的背最长肌进行转录组测序分析,对9个比较组所筛选到的差异表达基因(DEGs)进行富集分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT–PCR... 分别选取3头1、60、120、180、240、300、360日龄(分别记为ND1、ND60、ND120、ND180、ND240、ND300、ND360)宁乡猪的背最长肌进行转录组测序分析,对9个比较组所筛选到的差异表达基因(DEGs)进行富集分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT–PCR)验证DEGs水平。结果表明:ND60 vs ND1、ND120 vs ND60、ND180 vs ND120、ND240 vs ND180、ND300 vs ND240、ND360 vs ND300、ND180 vs ND1、ND360 vs ND180和ND360 vs ND1这9个比较组中分别鉴定出1982、245、131、311、26、84、2257、1377和2654个DEGs。GO分析结果表明,DEGs主要参与肌肉收缩、骨骼肌组织发育和钙离子结合过程;KEGG通路分析结果表明,DEGs主要富集于糖异生/糖酵解、PI3K–Akt、MAPK等信号通路;对DEGs进行qRT–PCR验证,qRT–PCR结果与测序结果一致;转录组测序和试验验证结果发现,THBS3在ND180 vs ND1和ND360 vs ND1比较组中均下调,THBS4分别在ND180 vs ND1和ND360 vs ND180中显著下调和上调,这表明THBS3和THBS4的表达方式与猪生长发育规律相反,推测它们可能负向调控骨骼肌的生长发育。 展开更多
关键词 宁乡猪 背最长肌 转录 差异表达基因 GO分析 KEGG通路分析 实时荧光定量pcr
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锈赤扁谷盗响应低温胁迫的转录组分析
7
作者 吴天意 伍祎 +3 位作者 方智毅 张晓培 王富领 薛丁榕 《粮油食品科技》 北大核心 2025年第1期238-245,共8页
锈赤扁谷盗是世界范围内重要的储粮害虫之一,通过转录组测序分析,初步研究锈赤扁谷盗响应低温胁迫的分子机制。采用三代测序结合二代测序技术对锈赤扁谷盗进行转录组测序,共获得锈赤扁谷盗全长转录本10508个,并对其中9523个转录本进行... 锈赤扁谷盗是世界范围内重要的储粮害虫之一,通过转录组测序分析,初步研究锈赤扁谷盗响应低温胁迫的分子机制。采用三代测序结合二代测序技术对锈赤扁谷盗进行转录组测序,共获得锈赤扁谷盗全长转录本10508个,并对其中9523个转录本进行注释。相较于对照组,低温胁迫后有477个基因显著性差异表达,其中177个基因上调表达,300个基因下调表达。进一步KEGG分析发现上述差异表达基因主要富集在代谢途径、脂肪酸生物合成和次生代谢产物的生物合成等通路。基于荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对热激蛋白、脂肪酸合成酶、几丁质酶、海藻糖转运蛋白、细胞色素P450和卵黄蛋白原编码基因6个差异表达基因进行表达量分析,结果表明RT-qPCR和转录组测序分析结果趋势一致。初步探究的储粮害虫锈赤扁谷盗适应低温胁迫的分子机制,为低温储粮技术在害虫综合治理策略中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 锈赤扁谷盗 转录组分析 低温胁迫 差异表达基因 荧光定量pcr
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直接从家禽排泄物中检测和定量空肠弯曲杆菌的逆转录定量PCR方法研究
8
作者 Bui X T 张锦秀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期186-186,共1页
弯曲杆菌属是导致人类细菌性腹泻的主要原因,亟需一种快速而可靠地检测和定量该病原的方法。本研究建立了运用逆转录荧光定量PCR直接从鸡粪便中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法,并将其与另一种基于DNA的荧光定量PCR方法和细菌培养方法进... 弯曲杆菌属是导致人类细菌性腹泻的主要原因,亟需一种快速而可靠地检测和定量该病原的方法。本研究建立了运用逆转录荧光定量PCR直接从鸡粪便中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法,并将其与另一种基于DNA的荧光定量PCR方法和细菌培养方法进行比较。运用细菌培养和逆转录荧光定量PCR方法,可在5d后从人工或天然污染的粪便样品中检测到空肠弯曲杆菌。在使用细菌培养方法无法计数细胞时,逆转录荧光定量PCR亦无法检测到阳性扩增信号,而运用基于DNA的荧光定量PCR方法可以检测到死亡的或无法培养的弯曲杆菌细胞,即使在经过20d保存处理后所有被检测样品仍是阳性。这种直接从鸡粪便样品中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法在检测环境弯曲杆菌中的应用还有待进一步研究。 展开更多
关键词 空肠弯曲杆菌 转录荧光定量pcr MRNA 鸡粪便 弯曲杆菌残留
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雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究 被引量:17
9
作者 周作勇 聂奎 +5 位作者 宋振辉 胡世君 周荣琼 郭智莉 刘丽琼 秦波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1453-1459,共7页
参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏... 参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高;ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高,在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录;ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小,在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高;ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高;ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高,其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。 展开更多
关键词 TOLL样受体 mRNA转录水平 罗曼鸡 荧光定量pcr
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实时荧光PCR方法检测食品中痕量荞麦成分 被引量:5
10
作者 史艳宇 刘金华 +2 位作者 逄晓阳 张晓惠 任常菲 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期312-315,共4页
目的:建立一种快速、特异、灵敏的荞麦成分检测方法。方法:针对荞麦内转录间隔区ITS(internal transcribed spacer)和5.8SrRNA基因序列设计一对PCR引物及探针,建立实时荧光PCR检测方法;以同源性(27个荞麦属相关物种)及非同源性(食品中... 目的:建立一种快速、特异、灵敏的荞麦成分检测方法。方法:针对荞麦内转录间隔区ITS(internal transcribed spacer)和5.8SrRNA基因序列设计一对PCR引物及探针,建立实时荧光PCR检测方法;以同源性(27个荞麦属相关物种)及非同源性(食品中常见的栽培型植物)参考植物物种作特异性检测;以50mg/kg小麦DNA作为稀释液对荞麦DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果:该方法能够有效对荞麦成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且小麦成分的存在对荞麦灵敏度检测没有影响。结论:该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中含有的痕量荞麦成分。 展开更多
关键词 荞麦过敏原 转录间隔区ITS 荧光定量pcr 检测
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一种检测猪基因组中内源性反转录病毒C方法的建立
11
作者 Danny K 张锦秀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期186-186,共1页
猪内源性反转录病毒使异种移植猪细胞、组织和器官存在风险,猪内源性反转录病毒A和猪内源性反转录病毒B都出现在猪基因组中,并能在体外感染人。猪内源性反转录病毒C只感染猪细胞,并可整合到大多数猪基因组中,但不是全部。猪内源性反转... 猪内源性反转录病毒使异种移植猪细胞、组织和器官存在风险,猪内源性反转录病毒A和猪内源性反转录病毒B都出现在猪基因组中,并能在体外感染人。猪内源性反转录病毒C只感染猪细胞,并可整合到大多数猪基因组中,但不是全部。猪内源性反转录病毒A和C的重组能感染人细胞,并大量复制。为了避免这种重组,猪内源性反转录病毒C阳性动物不能用于异种移植。为检测猪内源性反转录病毒C阳性猪,建立了多种不同的方法,如用不同引物建立的特异性PCR技术、异种高灵敏度的巢氏PCR技术和可定量前病毒拷贝数的实时定量PCR技术。实时定量PCR技术可用于区分污染和真正的前病毒分子。这些PCR方法经过优化,具有稳定的检测灵敏性。首先进行PCR1,如果检测结果为阴性,则进行PCR2或PCR5或巢氏PCR;如果检测结果是阳性,则进行实时定量PCR来排除污染。使用这些方法可评估猪内源性反转录病毒C的流行程度和识别未感染猪内源性反转录病毒C的动物。由于可能从其它动物细胞带来污染,不是使用耳活体检测,而是采用血细胞检测。 展开更多
关键词 异种移植 猪内源性转录病毒 巢式pcr 实时定量pcr
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基于单细胞转录组测序技术筛选蟾蜍耳后腺免疫修复基因
12
作者 郭媛媛 陈晶 +2 位作者 陈文潇 洪永健 胡晶红 《山东农业科学》 北大核心 2024年第11期133-140,共8页
中华大蟾蜍是我国传统药源动物,是名贵中药材蟾酥的基原物种之一。为筛选中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因,本试验采用Illumina测序平台对成年中华大蟾蜍耳后腺组织样本进行单细胞转录组测序(scRNA-seq),完成scRNA-seq文库构建后进行细胞... 中华大蟾蜍是我国传统药源动物,是名贵中药材蟾酥的基原物种之一。为筛选中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因,本试验采用Illumina测序平台对成年中华大蟾蜍耳后腺组织样本进行单细胞转录组测序(scRNA-seq),完成scRNA-seq文库构建后进行细胞亚群分类,对细胞亚群中上调表达基因和免疫修复相关基因进行分析,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对候选基因进行初步筛选与验证。结果表明,蟾蜍耳后腺组织中用于文库构建和双端测序的细胞数量为8414个,每个细胞的平均读数和中位基因数为46326和734,可用于进一步分析的高质量细胞数为7687个。聚类分析得到12个细胞亚群,并推测Cluster 10是来源于结缔组织的浆细胞。通过GO和KEGG分析对Cluster 10中的217个上调表达基因进行分析,鉴定出多个参与机体免疫的生物过程和通路,包括淋巴细胞活化、淋巴细胞分化及白细胞活化等生物过程和细胞受体信号通路、Fc epsilon RI信号通路及趋化因子信号通路等免疫相关通路。从Cluster 10的差异基因中筛选出MYO1F基因和CYBB基因为中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因,并通过qRT-PCR对两基因进行验证,推测对免疫修复具有正向调节作用。本研究结果可为后续挖掘蟾蜍耳后腺免疫修复基因、研究蟾蜍耳后腺采酥后的修复机制提供理论依据,为蟾蜍耳后腺单细胞组学研究提供参考信息。 展开更多
关键词 单细胞转录组测序 中华大蟾蜍 耳后腺 免疫修复基因 实时荧光定量pcr
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小檗碱对禽源大肠杆菌抑菌作用及耐药消除作用的转录组学分析 被引量:17
13
作者 张石磊 翟向和 +3 位作者 王春光 陈谏 贾泽 张铁 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第5期1518-1525,共8页
为了探究中药对大肠杆菌抗生素耐药性的消除机制,以小檗碱为处理药物,使用小檗碱浓度为250μg/mL(1/2最小抑菌浓度(MIC))的LB肉汤培养临床分离的禽源耐药大肠杆菌,每隔24h传一代,共传3代。对第3代菌液以影印法分离突变菌,以微板法测定... 为了探究中药对大肠杆菌抗生素耐药性的消除机制,以小檗碱为处理药物,使用小檗碱浓度为250μg/mL(1/2最小抑菌浓度(MIC))的LB肉汤培养临床分离的禽源耐药大肠杆菌,每隔24h传一代,共传3代。对第3代菌液以影印法分离突变菌,以微板法测定突变菌的左氧氟沙星MIC。经测定发现突变菌对左氧氟沙星的MIC由16μg/mL降至8μg/mL,说明对左氧氟沙星的耐药性具有消除作用。为了解小檗碱作用大肠杆菌的分子机制,通过转录组测序方法对耐药性消除前后禽源大肠杆菌基因表达水平进行对比分析。结果显示,小檗碱作用后共有45个基因的表达量发生显著变化,其中有30个基因表达量上调,15个基因表达量下调。经过GO功能富集分析和KEGG代谢通路富集分析,发现上调主要为:与色氨酸合成有关的基因,磷酸吡哆醛结合相关3个基因,表达转酮酶基因;下调主要为:双组份系统中多个基因,十一异戊二烯焦磷酸磷酸酶(UppP)编码基因ybjG,酰基辅酶A脱氢酶合成有关的基因。推测大肠杆菌体内酶活性降低是小檗碱抑菌的主要机制;大肠杆菌多重耐药外排泵表达降低、细胞膜和细胞壁成分的改变是小檗碱耐药性消除的主要机制。 展开更多
关键词 大肠杆菌 小檗碱 耐药消除 转录 实时荧光定量pcr
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氮肥对稻田土壤反硝化细菌群落结构和丰度的影响 被引量:29
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作者 宋亚娜 林智敏 林艳 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期7-12,共6页
以氮肥田间定位试验为研究对象,利用PCR-DGGE(聚合酶链反应变性梯度凝胶电泳)和荧光定量PCR(real-time PCR)技术,通过对反硝化细菌nirS基因的检测,分析了定位试验第2年稻田反硝化细菌群落结构和丰度的变化。DGGE图谱及依据其条带位置和... 以氮肥田间定位试验为研究对象,利用PCR-DGGE(聚合酶链反应变性梯度凝胶电泳)和荧光定量PCR(real-time PCR)技术,通过对反硝化细菌nirS基因的检测,分析了定位试验第2年稻田反硝化细菌群落结构和丰度的变化。DGGE图谱及依据其条带位置和亮度数字化数值进行的主成分分析(PCA)结果均显示:在氮肥定位试验第2年,与不施肥对照(CK)比较,在水稻各个生育期(分蘖期、齐穗期和成熟期)内,施用氮肥[150kg(N)·hm-2]的稻田根层土或表土中的反硝化细菌群落结构均无明显变化;且稻田根层土或表土中的反硝化细菌群落结构在水稻各个生育期间也均无明显差异。荧光定量PCR结果显示,在水稻生长发育过程中,施用氮肥的稻田根层土或表土中的反硝化细菌nirS基因拷贝数始终显著(P<0.05)高于其对应的不施肥对照。此外,无论施用氮肥与否,根层土中的反硝化细菌nirS基因拷贝数在水稻成熟期时都会显著(P<0.05)降低;但表土中的nirS基因拷贝数在水稻各生育期间无明显变化;且水稻成熟期时施用氮肥和不施肥的稻田表土中nirS基因拷贝数都显著(P<0.05)高于根层土。同时,与对照比较施用氮肥可促进水稻增产44%。研究表明,短期定位试验中施用氮肥能够显著提高稻田土壤反硝化细菌的丰度,但对其群落结构没有明显影响。 展开更多
关键词 氮肥 硝化细菌 群落结构 丰度 nirS基因 聚合酶链应-变性梯度凝胶电泳 荧光定量pcr
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PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展 被引量:16
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作者 汪月霞 赵会杰 赵一丹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第24期11435-11436,11445,共3页
对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时... 对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 多重逆转录pcr 毛细管pcr 荧光定量pcr DNA环介导的恒温扩增法
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一种豇豆重花叶病毒IC-RT real-time PCR检测方法的建立 被引量:3
16
作者 李彬 粟寒 +2 位作者 吴翠萍 周明华 安榆林 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期491-496,共6页
为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTre... 为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTreal-time PCR方法.结果表明:IC-RTreal-time PCR方法的灵敏度可达500 pg叶组织;该方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优点,省去了RNA的提取过程,适用于豇豆等豆类种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测. 展开更多
关键词 豇豆重花叶病毒 免疫捕获转录 实时荧光pcr
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霉变饲料中毒马不同组织中TLR1、TLR2、TLR4和TLR6 mRNA转录水平研究 被引量:3
17
作者 张宇宏 赵一萍 +3 位作者 赵启南 李蓓 白东义 芒来 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期25-28,共4页
为探讨霉变饲料中毒马不同组织中TLR1、TLR2、TLR4和TLR6的表达情况,采用SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法检测霉变饲料中毒马和健康对照马胃、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、盲肠和骨髓中TLRs基因的转录水平。结果表明,TLR1... 为探讨霉变饲料中毒马不同组织中TLR1、TLR2、TLR4和TLR6的表达情况,采用SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法检测霉变饲料中毒马和健康对照马胃、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、盲肠和骨髓中TLRs基因的转录水平。结果表明,TLR1、TLR2、TLR4、TLR6基因在检测的胃和肝脏组织中的表达量均是霉变饲料中毒马显著高于对照马(P<0.05),TLR4基因在霉变饲料中毒马所检测的9个组织器官中的表达量均显著高于对照马(P<0.05)。说明霉变饲料中毒可引起马胃和肝脏的主要变化,推测TLR4基因在机体抵御霉变饲料中毒中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 霉变饲料中毒 TOLL样受体 mRNA转录水平 荧光定量RT—pcr
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柔嫩艾美耳球虫Etron2基因在不同发育阶段转录水平差异的分析 被引量:2
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作者 戚南山 孙铭飞 +6 位作者 吴彩艳 廖申权 吕敏娜 袁建丰 余劲术 李祥瑞 蔡建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期664-668,共5页
为研究柔嫩艾美耳球虫不同发育时期Etron2基因的转录水平差异,选取E.tenella生活史中的未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、第二代裂殖子,分别提取总RNA,反转录为cDNA;选择Etactin作为参照基因,Etron2为目的基因,设计实时荧光定量PCR的... 为研究柔嫩艾美耳球虫不同发育时期Etron2基因的转录水平差异,选取E.tenella生活史中的未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、第二代裂殖子,分别提取总RNA,反转录为cDNA;选择Etactin作为参照基因,Etron2为目的基因,设计实时荧光定量PCR的引物,分析在E.tenella生活史中不同发育阶段Etron2转录水平的差异。结果显示Etron2在未孢子化卵囊中转录水平最高,然后分别是裂殖子、孢子化卵囊和子孢子。在柔嫩艾美耳球虫发育过程中,Etron2基因可能在未孢子化卵囊阶段被转录储备,随着宿主细胞的刺激,得以大量表达,在入侵过程中发挥作用。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 棒状体颈部蛋白2 实时荧光定量pcr 转录水平
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运用FQ-RT-PCR研究鼠结肠AQP8的表达 被引量:1
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作者 郝玉霞 王俊平 《临床医药实践》 2008年第10期807-809,共3页
目的:通过设计特异引物和探针,运用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法研究小鼠结肠AQP 8表达。方法:应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法。结果:数值可以发现降结肠高于升、横结肠,但通过方差分析结肠各部位间AQP 8... 目的:通过设计特异引物和探针,运用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法研究小鼠结肠AQP 8表达。方法:应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法。结果:数值可以发现降结肠高于升、横结肠,但通过方差分析结肠各部位间AQP 8mRNA表达量的差别无统计学意义(P>0.05)。结论:荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)具有特异性强、灵敏度高、定量准确性高等优点;小鼠结肠均有AQP 8表达。 展开更多
关键词 结肠 AQP8 MRNA 荧光定量转录聚合酶链应(荧光定量pcr)
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阉割对猪甲状腺转录因子-1、2(TTF-1,2)基因表达的影响
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作者 王颖 张立凡 +5 位作者 蔡兆伟 陈哲 蒋晓玲 周红梅 华绪川 徐宁迎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-7,共7页
为了研究阉割对甲状腺转录因子-1、2(TTF-1,2)基因的影响,本研究采用荧光定量PCR技术分析阉割与非阉割金华猪甲状腺组织中TTF-1和TTF-2基因在60、90和120日龄时的表达水平。结果表明:非阉割猪TTF-1和TTF-2基因在不同生长阶段的表达量呈... 为了研究阉割对甲状腺转录因子-1、2(TTF-1,2)基因的影响,本研究采用荧光定量PCR技术分析阉割与非阉割金华猪甲状腺组织中TTF-1和TTF-2基因在60、90和120日龄时的表达水平。结果表明:非阉割猪TTF-1和TTF-2基因在不同生长阶段的表达量呈稳步上升趋势,阉割猪TTF-1和TTF-2基因的表达基本稳定。TTF-1与TTF-2mRNA的表达量均是在60、90日龄时阉割组高于非阉割组;在120日龄时,阉割组TTF-1与TTF-2mRNA的表达量均低于非阉割组,但差异不显著(P>0.05)。结果,建立的SYBR-Green荧光定量PCR方法可以有效地用于TTF-1和TTF-2基因的表达分析;另外,阉割使得猪甲状腺TTF-1和TTF-2基因在60、90日龄的表达量升高,且TTF-1基因的表达与猪部分肉质性状存在显著的相关性。 展开更多
关键词 阉割 荧光定量pcr 甲状腺转录因子-1(TTF-1) 甲状腺转录因子-2(TTF-2)
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