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反转录聚合酶链反应和核酸探针检测禽呼肠孤病毒研究的概述 被引量：4
1
作者 谢芝勋 刘加波 +6 位作者 廖敏 庞耀珊 谢志勤 邓显文 李康然 唐小飞 何竞铭 《广西畜牧兽医》 2003年第5期195-198,共4页
根据禽呼肠孤病毒 (ARV )参考毒株S1 1 3 3S1基因序列 ,设计合成 4对引物而分别建立了RT -PCR、半套式PCR和一步法PCR三种用于检测ARV的方法。它们能检测到的最近ARVRNA量分别为 1pg、1fg和 0 1 6ngRNA ;研制出禽呼肠孤病毒地高辛核酸... 根据禽呼肠孤病毒 (ARV )参考毒株S1 1 3 3S1基因序列 ,设计合成 4对引物而分别建立了RT -PCR、半套式PCR和一步法PCR三种用于检测ARV的方法。它们能检测到的最近ARVRNA量分别为 1pg、1fg和 0 1 6ngRNA ;研制出禽呼肠孤病毒地高辛核酸探针 ,并建立了地高辛核酸探针检测ARV的方法 ,该核酸探针最低能检测到 0 45ng的ARVRNA ;对广西部分鸡场血清学调查表明 ,ARV平均阳性率为 2 7% ;对广西ARV野毒株进行了分离和鉴定 ,并对获得的 2个地方分离株的S1基因片段进行测序及分析 ,两分离株与标准株S1 1 3 3的同源性分别为98 5 %和 98 3 % ;用所建立的RT -PCR和地高辛核酸探针方法对用ARV人工感染鸡采集的各种样品的检测 ,并和传统病原分离方法进行比较 ,结果RT -PCR检出率为 92 5 % ( 2 2 2 /2 40 ) ,地高辛核酸探针检出率为 74 2 % ( 1 78/2 40 ) ,病原分离鉴定方法检出率为 5 5 % ( 1 3 2 /2 40 )。用ARV强毒分别对免疫种鸡后代和无母源抗体或SPF的雏鸡进行攻毒试验 ,结果油苗免疫的种鸡后代对本病有很强的抵抗力 ,能抵抗ARV强毒的攻击 ,其平均保护率 90 8% ( 1 0 9/1 2 0 )。而无母源抗体或SPF的雏鸡攻毒后均 1 0 0 % ( 2 40 /2 40 )死亡。 展开更多
关键词 反转录聚合酶链反应 核酸探针 检测 禽呼肠孤病毒
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反转录聚合酶链反应方法诊断肠道小RNA病毒性脑膜炎 被引量：1
2
作者 关慧臻 杨桂梅 +3 位作者 薛承岩 朱长林 来锦 白海洋 《中国实用医药》 2006年第6期38-38,30,共2页
目的评估RT-PCR方法诊断肠道小RNA病毒性脑膜炎的应用价值。方法对象包括脑膜炎组104例和对照组39例,检测脑脊液中肠道小RNA病毒应用RT-PCR方法。结果脑膜炎组的肠道小RNA病毒阳性率为41.3%(43/104),对照组未测出肠道小RNA病毒阳性结果... 目的评估RT-PCR方法诊断肠道小RNA病毒性脑膜炎的应用价值。方法对象包括脑膜炎组104例和对照组39例,检测脑脊液中肠道小RNA病毒应用RT-PCR方法。结果脑膜炎组的肠道小RNA病毒阳性率为41.3%(43/104),对照组未测出肠道小RNA病毒阳性结果。结论肠道小RNA病毒是导致脑膜炎的重要病原体,RT-PCR方法诊断肠道小RNA病毒性脑膜炎具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 脑膜炎 肠道小RNA病毒 反转录-聚合酶链反应
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肝内胆管癌hTR反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建
3
作者 靳斌 姜希宏 +6 位作者 刘贤锡 刘博 刘师莲 王伟 胡海燕 卢翌 耿昭 《山东医药》 CAS 北大核心 2002年第16期3-5,共3页
用反转录PCR法 ,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因 ,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列 ,将其构建入真核表达载体pTriEx 4内。根据hTRcDNA序列设计引物 ,经RT PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hT... 用反转录PCR法 ,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因 ,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列 ,将其构建入真核表达载体pTriEx 4内。根据hTRcDNA序列设计引物 ,经RT PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因 ,根据其测序结果 ,合成反义RNA基因及核酶基因 ,与经相应酶切的真核表达载体连接 ,酶切鉴定重组体的正确性。经RT PCR从细胞内调出 68bp序列 ,与hTRcDNA比较 ,与模板区域碱基序列一致 ,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。肝内胆管癌细胞内端粒酶的活性明显增高 ,RT PCR法可调出其hTR基因有效片段 ; 展开更多
关键词 肝内肝管癌 锤头状核酶基因 真核表达载体 真核表达 反转录聚合酶链反应 端粒酶
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磷酸二酯酶基因在小型猪骨骼肌组织的表达 被引量：5
4
作者 谷金妮 许剑琴 +1 位作者 陈武 于同泉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期434-439,共6页
提取中国实验用小型猪骨骼肌组织总RNA,应用反转录聚合酶链反应测定磷酸二酯酶(PDE)同工酶在骨骼肌组织中的表达分布。结果可见PDE1A、1C、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A和11A共16种PDE同工酶mRNA在中国实验用小... 提取中国实验用小型猪骨骼肌组织总RNA,应用反转录聚合酶链反应测定磷酸二酯酶(PDE)同工酶在骨骼肌组织中的表达分布。结果可见PDE1A、1C、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A和11A共16种PDE同工酶mRNA在中国实验用小型猪骨骼肌组织中表达,其中PDE1A、1C、2A、3A、4B、4C、8A和8B共8 种在人和其他动物骨骼肌组织中的表达分布未见报道,PDE1B和10A 3种同工酶未见表达。16种PDE同工酶mRNA在骨骼肌组织中的表达,从电泳条带上可以看到各种PDE表达量存在着差异,但需要进一步做定量分析加以评定。 展开更多
关键词 肌组织 小型猪 酯酶基因 反转录聚合酶链反应 组织总RNA mRNA 磷酸二酯酶 同工酶 PDE 动物骨骼 定量分析 骨骼肌 表达量 实验 中国 分布
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内蒙古和西藏自治区野生反刍动物小反刍兽疫监测 被引量：3
5
作者 王华 包静月 +3 位作者 吴晓东 刘春菊 王淑娟 王志亮 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期124-126,共3页
为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR... 为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸,同时用竞争ELISA检测反刍野生动物血清中的小反刍兽疫病毒特异性抗体。结果检测样品中未发现阳性样品。说明该批次样品中没有发现野生动物感染小反刍兽疫病毒。研究结果可为小反刍兽疫防控工作提供依据。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 酶联免疫吸附试验 反转录-聚合酶链反应 野生反刍动物 监测
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胃癌细胞株SGC-7901及MGC-803中SURVIVIN基因转录与表达的鉴定
6
作者 郭玉庆 董临江 +3 位作者 吴茂成 杨清秀 高世同 朱兆华 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期154-156,163,共4页
目的　探讨胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80 3中survivin基因转录与表达情况 ,为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助。方法　①利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况。②采用... 目的　探讨胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80 3中survivin基因转录与表达情况 ,为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助。方法　①利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况。②采用免疫组织化学染色鉴定两种细胞株survivin基因有无蛋白表达及其表达程度。结果　从提取的胃癌细胞总RNA中扩增出 6 12bp的DNA片段 ,与预期的扩增片段大小相符 ;序列测定显示两细胞株的DNA扩增片段序列与基因库survivin基因mRNA序列完全一致 ;免疫组织化学染色显示两细胞株中均有survivin蛋白表达产物。结论　中国人胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80 展开更多
关键词 胃腺癌 细胞株 SGC-7901 MGC-803 SURVIVIN 基因转录 反转录聚合酶链反应 序列测定 细胞凋亡
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云南红河州小反刍兽疫的血清学及分子流行病学调查 被引量：2
7
作者 张容萍 王薇 +4 位作者 刘佳升 李晓红 段锐锐 郑玉芳 陈培富 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期79-84,共6页
为掌握小反刍兽疫在云南省红河州的流行情况及疫苗防控效果,应用竞争酶联免疫吸附试验(ELISA),对该州13个县市采集自人工免疫山羊的920份血清进行抗体检测,同时应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对215份山羊组织样品检测小反刍兽疫病毒(P... 为掌握小反刍兽疫在云南省红河州的流行情况及疫苗防控效果,应用竞争酶联免疫吸附试验(ELISA),对该州13个县市采集自人工免疫山羊的920份血清进行抗体检测,同时应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对215份山羊组织样品检测小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳蛋白(N)基因小片段,并取PCR扩增呈阳性的组织样品进一步做N基因大片段的克隆与测序,最后与国内外参考毒株进行核苷酸同源性比较及进化关系分析。调查结果表明,该州小反刍兽疫血清抗体平均阳性率为70.65%,病毒核酸阳性率为20.46%;当地流行毒株与国内其他毒株同源性最高,均属于基因Ⅳ系毒株,并与印度株和土耳其株进化关系相近。据此推测,当地流行毒株可能最初从国外传入,再伴随引种传入云南。调查证实,以国外基因Ⅱ系毒株制成的弱毒疫苗,虽与我国毒株不同基因系,但具有较高的免疫保护力。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 酶联免疫吸附试验 反转录-聚合酶链反应 衣壳蛋白基因
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电离辐射对人外周血淋巴细胞GADD45基因表达的影响 被引量：17
8
作者 徐丽昕 艾辉胜 +5 位作者 蒋本荣 姚波 余长林 郭梅 黄雅静 孙琪云 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期111-114,共4页
观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse tr... 观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse transcriptase-Polymerase clain reaction,RT-PCR)的方法测定 GADD45基因的相对表达量,分析该基因的剂量、效应关系。照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,照射后4h达峰值,以后开始下降,但在24h仍未恢复到初始水平。 展开更多
关键词 研究生长抑制 DNA损伤基因45 生物剂量计 基因表达 反转录聚合酶链反应
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中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白预测与鉴定 被引量：4
9
作者 马鸣潇 马臣 +3 位作者 程健 谢振声 李明 费东亮 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1768-1773,共6页
采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)辽宁株(CSBV-LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定.结果表明,CSBV-LN全基因组序列长度为8863个核苷... 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)辽宁株(CSBV-LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定.结果表明,CSBV-LN全基因组序列长度为8863个核苷酸,编码一个大的开放阅读框,其中包括178 nt的5'非编码区的前导序列和79 nt的3'非编码区,后面跟着一个poly(A)的尾巴.通过软件分析表明,CSBV-LN蛋白序列类似于哺乳动物的小RNA病毒蛋白序列,预计存在VP1,VP2,VP3和VP4等4个小的结构蛋白;系统进化分析表明,CSBV、囊状幼虫病毒(SBV)和残翅病毒(DWV)的起源相同,推测CSBV有着类似DWV的结构蛋白序列5'-VP2-VP4VP1VP3-3.基于此,根据PAGE蛋白条带的大小,利用NetPicoRNA软件预测结构蛋白的裂解位点.在此基础上,对纯化后的CSBV进行SDS-PAGE分离,对分离到的4个蛋白进行质谱分析,结果鉴定出VP1,VP3和VP0 3个蛋白. 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 反转录聚合酶链反应 结构蛋白 质谱分析
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RT-PCR检测CPIV方法的建立与应用 被引量：3
10
作者 简子健 马素贞 +2 位作者 刘腾飞 翟少华 赵森 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1875-1880,共6页
【目的】建立CPIV的RT-PCR检测方法。【方法】从临床上疑似犬副流感(CPI)的犬鼻腔分泌物中提取CPIV总RNA。根据Genebank中收录的CPIV(序列号AY581307)中NP基因保守序列,设计一对特异性引物,扩增出667 bp片段,以此建立CPIV的RT-PCR检测... 【目的】建立CPIV的RT-PCR检测方法。【方法】从临床上疑似犬副流感(CPI)的犬鼻腔分泌物中提取CPIV总RNA。根据Genebank中收录的CPIV(序列号AY581307)中NP基因保守序列,设计一对特异性引物,扩增出667 bp片段,以此建立CPIV的RT-PCR检测方法。【结果】特异性试验表明该引物不能扩增犬其它常见的传染病病毒基因。敏感性试验表明该引物能检测到10^(-6)的CPIV总RNA量。重复性试验表明该引物具有良好的稳定性和重复性。对临床采集的32份样品进行RT-PCR检测时,阳性率为53.12%。【结论】实验建立了CPI的RT-PCR检测方法,可适合于临床CPIV的早期快速诊断和小规模的分子流行病学调查。 展开更多
关键词 犬副流感病毒 NP基因 反转录聚合酶链反应 早期快速诊断
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牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：3
11
作者 张淑琴 郭利 +2 位作者 张亭亭 吴永旺 武华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期159-162,共4页
根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出471 bp的特异性片段,... 根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出471 bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒、MDBK正常细胞的扩增结果均为阴性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1TCID50/mL。应用该方法对临床腹泻病牛各脏器样品进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便。表明建立的RT-PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的临床检测及流行病学监测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 反转录聚合酶链反应 检测
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巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血及淋巴结中微量转移癌细胞 被引量：1
12
作者 杨丽萍 王红霞 +3 位作者 刘旺根 王雪萍 冯黎 张舒林 《山东医药》 CAS 北大核心 2003年第36期15-16,共2页
目的　建立检测肺癌患者外周血及淋巴结中微转移癌细胞的敏感分子检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　采用巢式反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术特异引物扩增细胞角蛋白 19(CK19) m RNA,检测76例肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19m RN... 目的　建立检测肺癌患者外周血及淋巴结中微转移癌细胞的敏感分子检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　采用巢式反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术特异引物扩增细胞角蛋白 19(CK19) m RNA,检测76例肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19m RNA的表达情况。结果　 76例肺癌患者中 39例外周血 CK19m RNA阳性 ,阳性率为 5 1.3% (39/ 76 ) ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率 3.7% ,15例健康对照者均为阴性。全部肺癌患者 15 7枚淋巴结中 CK19m RNA阳性率 38.9% (6 1/ 15 7) ,常规病理方法检测淋巴结阳性率 14 .6 % (2 3/15 7) ,两者相比 ,P<0 .0 5 ;HE染色阴性的 134枚淋巴结中 ,经巢式 RT- PCR技术检测证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% (38/ 134) ,两者相比 ,P<0 .0 5。结论　巢式 RT- PCR技术是一种特异性和敏感性均较高的微量癌细胞转移检测方法 。 展开更多
关键词 巢式RT-PCR技术 检测 肺癌 外周血 淋巴结 微量转移癌细胞 细胞角蛋白19 巢式反转录聚合酶链反应
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BRSV和BPIV-3双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：9
13
作者 王嵩 林红丽 +5 位作者 王宇鹏 刘振格 王杰 杨明发 余丽芸 侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》 2014年第5期35-38,共4页
为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV... 为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV和BPIV-3的双重PCR检测方法。采用该方法检测BRSV和BPIV-3参考毒株,特异性良好。对参考毒株进行梯度稀释检测,结果该方法检测BRSV的敏感性可达10 TCID50·100μL-1,BPIV-3可达10 TCID50·100μL-1。应用建立的双重PCR方法能够从临床样品中检测出BRSV和BPIV-3。表明建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于BRSV和BPIV-3的临床检测。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 牛副流感病毒3型 双重反转录聚合酶链反应
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人canstatin基因的克隆及序列分析 被引量：1
14
作者 史利宁 马百坤 +2 位作者 陈大宁 方蓉 张春妮 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期103-104,共2页
目的　克隆人的canstatin基因并进行序列分析。方法　从人引产死胎肝组织提取总RNA ,以此为模板应用RT PCR法克隆canstatin该基因片段。结果　所得基因片段DNA序列分析由 6 84个碱基组成。
关键词 人canstatin基因 克隆 序列分析 RT—PCR法 反转录聚合酶链反应
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以黑色素瘤抗原基因mRNA为特异标记检测乳腺癌患者外周血肿瘤细胞 被引量：2
15
作者 马全 武正炎 郑伟 《医学研究生学报》 CAS 2005年第3期218-220,223,共4页
　目的:以黑色素瘤抗原 -A1(MAGE -A1)和MAGE- A3基因mRNA为特异性标记物,检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞,并探讨其临床意义。　方法:采集 40例乳腺癌患者及 20例非肿瘤患者的外周血,用巢式RT- PCR方法检测外周血单核细胞(PBMC)中MAG... 　目的:以黑色素瘤抗原 -A1(MAGE -A1)和MAGE- A3基因mRNA为特异性标记物,检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞,并探讨其临床意义。　方法:采集 40例乳腺癌患者及 20例非肿瘤患者的外周血,用巢式RT- PCR方法检测外周血单核细胞(PBMC)中MAGE A1和MAGE A3基因mRNA。同时用RT- PCR方法检测乳腺癌患者肿瘤组织中上述MAGE基因的表达。　结果: 12. 5% (5 /40)和 17. 5% (7 /40)乳腺癌患者的PBMC中可分别检测到MAGE- A1和MAGE- A3基因的mRNA,而相应乳腺癌组织中MAGE- A1和MAGE A3的表达率分别为 15. 0%(6 /40)和 22. 5 % (9 / 40),在 25. 0% (10 /40)的乳腺癌患者PBMC中至少可检测到一种MAGE基因mRNA,癌旁组织、乳腺癌组织中不表达MAGE基因的患者以及 20例非肿瘤疾病患者的PBMC中均未测出MAGE基因mRNA。乳腺癌患者PBMC中两种MAGE基因mRNA的检出率与肿瘤TNM分期密切相关。　结论:MAGE- A1和MAGE- A3基因mRNA可作为特异性肿瘤标记物用于检测乳腺癌患者PBMC中的乳腺癌细胞,巢式RT PCR的敏感性及特异性较高,其检测结果可能有助于判断乳腺癌患者的预后。 展开更多
关键词 乳腺癌 黑色素瘤抗原 巢式反转录聚合酶链反应 信使核糖核酸
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RT-PCR检测人白细胞钙调素mRNA表达水平与初步应用 被引量：1
16
作者 王咏梅 徐建平 +2 位作者 赵权 李晓军 武建国 《医学研究生学报》 CAS 1998年第1期44-45,共2页
目的：检测人白细胞钙调素ｍＲＮＡ表达水平。方法：采用以β２微球蛋白（β２Ｍ）为内标的反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。结果：建立了人白细胞钙调素ｍＲＮＡ表达水平的半定量测定方法。结论：初步了解不同时期内服用钙拮... 目的：检测人白细胞钙调素ｍＲＮＡ表达水平。方法：采用以β２微球蛋白（β２Ｍ）为内标的反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。结果：建立了人白细胞钙调素ｍＲＮＡ表达水平的半定量测定方法。结论：初步了解不同时期内服用钙拮抗剂（ＣａＡ）的心血管病患者细胞内ＣａＭｍＲＮＡ表达的变化规律。 展开更多
关键词 钙调素 MRNA 反转录聚合酶链反应 钙拮抗剂
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发现miRNA及其靶基因的研究方法 被引量：1
17
作者 房宝英 何冬梅 张洹 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第32期157-159,共3页
关键词 MIRNA 靶基因 反转录聚合酶链反应
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重组人γ-干扰素表达菌株的构建 被引量：3
18
作者 许崇利 胡静涛 许崇波 《中国兽药杂志》 2011年第1期16-19,共4页
从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出hIFN-γ基因。构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET32a(+)-hIFN-γ)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pET32a(+)-hIFN-γ含有hIFN-γ基因,且基因序列和阅读框架正确。经W... 从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出hIFN-γ基因。构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET32a(+)-hIFN-γ)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pET32a(+)-hIFN-γ含有hIFN-γ基因,且基因序列和阅读框架正确。经W estern blot鉴定证实为hIFN-γ,并实现了在大肠杆菌中的高效表达。表达产物占菌体总蛋白的52%。同时对其抗病毒活性进行了测定,从而为hIFN-γ的生物活性和生产工艺研究提供了可靠的试验数据。 展开更多
关键词 大肠杆菌 hIFN-γ基因 反转录聚合酶链反应 基因表达 纯化
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口蹄疫检测能力比对试验的结果分析 被引量：2
19
作者 周碧君 李谦 汪德生 《山地农业生物学报》 2006年第2期111-114,共4页
对22份盲样采用R IHA、RT-PCR、LB-ELISA和3ABC-I-ELISA进行了检测。结果表明,在R IHA试验中,X079、X100、X232盲样分别为口蹄疫A型、O型和AsiaⅠ型抗原阳性;X136为猪传染性水泡病抗原阳性;X141、X165为阴性样本。在LB-ELISA中,L222、L... 对22份盲样采用R IHA、RT-PCR、LB-ELISA和3ABC-I-ELISA进行了检测。结果表明,在R IHA试验中,X079、X100、X232盲样分别为口蹄疫A型、O型和AsiaⅠ型抗原阳性;X136为猪传染性水泡病抗原阳性;X141、X165为阴性样本。在LB-ELISA中,L222、L271、L323、L431、L502盲样为O型口蹄疫抗体阳性;L283、L307、L457、L550、L557为阴性样本。在3ABC-I-ELISA中,Y067、Y123盲样为口蹄疫感染抗体阳性;Y167为阴性样本。在RT-PCR检测中,Z075盲样扩增出分子长为634bp、483bp和278bp 3条特异性的DNA片段,Z126盲样扩增出分子长为634bp和278bp 2条特异性的DNA片段,确定为口蹄疫病毒;Z087为阴性样本。 展开更多
关键词 口蹄疫 检测能力 反向间接血凝试验 液相阻断酶联免疫吸附试验 非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验 反转录聚合酶链反应
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环介导等温扩增技术检测建兰花叶病毒 被引量：10
20
作者 许春英 李逢慧 罗超 《现代农业科技》 2009年第8期11-12,14,共3页
为了建立检测建兰花叶病毒的快速实用分子生物学技术,该研究借助新兴的环介导等温扩增技术,建立了一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法——体外等温扩增检测方法。设计了4条针对目的基因的6个位点的特异性引物,建立了一套从核酸... 为了建立检测建兰花叶病毒的快速实用分子生物学技术,该研究借助新兴的环介导等温扩增技术,建立了一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法——体外等温扩增检测方法。设计了4条针对目的基因的6个位点的特异性引物,建立了一套从核酸抽提到LAMP检测快速检测方法。所建立的检测方法比RT-PCR更灵敏;且具有特异性,操作简单,不需要复杂的仪器,肉眼可直接观察检测结果。适合基层和现场检测。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 反转录聚合酶链反应 环介导等温扩增技术
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