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反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达被引量：7: 1; 作者刘朝晖杨宇 +3 位作者庄鹏辉许杰华马延兵胡海涛《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期10-13,共4页; 目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH... 展开更多; 关键词 SK—N—SH神经母细胞瘤细胞增强型绿色荧光蛋白反转录病毒载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

β-分泌酶底物肽反转录病毒载体及其包装细胞株的构建被引量：1: 2; 作者崔媛媛胡海涛 +5 位作者董炜疆王兰郑慧媛赵璇石明娟吴志新《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期624-626,共3页; 目的用pLXSN反转录病毒载体构建介导β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因表达的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立高效、稳定表达BACEsp的包装细胞株。方法根据BACEsp基因序列设计引物,PCR合成的BAC-Esp片段和pLXSN载体用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶... 展开更多; 关键词阿尔茨海默病 β分泌酶底物肽反转录病毒载体包装细胞株转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立被引量：1: 3; 作者辛晓玲吕长荣 +1 位作者陈冬梅窦忠英《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1636-1641,共6页; 为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo... 展开更多; 关键词牛 Klf4基因 IPS细胞反转录病毒载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达: 4; 作者秦建如黎娜铭 +2 位作者许长剑廖明曹伟胜《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2538-2543,共6页; 为建立反转录病毒载体RCASBP介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在DF-1细胞中的表达体系,本研究将PCR获得的EGFP基因插入反转录病毒载体RCASBP,构建重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP,之后将重组载体转染DF-1细胞;用基于禽白血病病毒(ALV)... 展开更多; 关键词禽白血病病毒反转录病毒载体RCASBP 增强型绿色荧光蛋白基因 DF-1细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

反转录病毒介导的 HSV-tk/ACV 系统基因治疗的安全性研究: 5; 作者卢大儒胡锦 +4 位作者王之敏惠国桢李向东邱信芳薛京伦《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第8期50-55,共6页; 研究了反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗脑肿瘤的安全性。首先采用ＰＣＲ、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交以及补救分析方法，对ＨＳＶ－ｔｋ病毒包装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ）、Ｃ６转ＴＫ基因细胞... 展开更多; 关键词脑肿瘤反转录病毒载体基因治疗安全性; 在线阅读下载PDF 职称材料

反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立被引量：4: 6; 作者王婧李昌 +6 位作者李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期203-209,共7页; 本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒... 展开更多; 关键词反转录病毒载体人免疫缺陷病毒核心蛋白增强型绿色荧光蛋白小鼠骨髓瘤细胞SP2/0; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽类转基因生产及其应用的研究现状和进展(待续) 被引量：3: 7; 作者李碧春钱菊汾《动物科学与动物医学》 2001年第1期13-15,共3页; 综述了禽类转基因方面的制作方法、转基因禽类应用研究概况。分别介绍了成熟卵泡微注射法、精子载体转基因法、反转录病毒载体转基因法、受精卵移植法、单细胞受精卵微注射法、胚盘嵌合体法、原始生殖细胞嵌合体法的进展及发展动态。阐... 展开更多; 关键词禽类转基因技术成熟儿泡微注射法反转录病毒载体法胚胎干细胞法; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达被引量：7: 1; 作者刘朝晖杨宇庄鹏辉许杰华马延兵胡海涛; 机构西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系吉林大学第一医院神经内科西安交通大学医学院第一附属医院胸外科; 出处《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期10-13,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30300395No.30400515) 教育部博士点基金项目(No.20030698011); 文摘目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH3T3荧光表达细胞的数量来确定病毒的浓度;使用RV载体感染SK-N-SH细胞,通过流式细胞学荧光检测明确RV在SK-N-SH细胞的感染效率。结果成功构建了基因转移载体RV/EGFP,确定重组病毒的浓度为8.3×106病毒颗粒/mL。在SK-N-SH细胞RV/EGFP稳定转染并有效表达。在SK-N-SH细胞EGFP的荧光表达显示RV的转移并且表达的效率达到30%以上。结论SK-N-SH细胞能被RV病毒载体有效感染,在转基因细胞株外源基因的表达长期稳定并且显示RV病毒载体具有良好的基因转移效率。; 关键词 SK—N—SH神经母细胞瘤细胞增强型绿色荧光蛋白反转录病毒载体; Keywords SK-N-SH neuroblastoma cell enhanced green fluorescent protein retroviral vector; 分类号 R592 [医药卫生—老年医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名β-分泌酶底物肽反转录病毒载体及其包装细胞株的构建被引量：1: 2; 作者崔媛媛胡海涛董炜疆王兰郑慧媛赵璇石明娟吴志新; 机构西安医学院组织学与胚胎学教研室西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系; 出处《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期624-626,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30400515); 文摘目的用pLXSN反转录病毒载体构建介导β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因表达的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立高效、稳定表达BACEsp的包装细胞株。方法根据BACEsp基因序列设计引物,PCR合成的BAC-Esp片段和pLXSN载体用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切后连接,构建成表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体。用脂质体介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选后,挑单克隆扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株。结果经酶切、连接后构建成的质粒称为pLXSN-BACEsp,经测序证实构建成功,无任何碱基突变。经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立BAC-Esp高效表达的包装细胞株。结论成功构建了能表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立了稳定、高效地产生有活性的BACEsp产毒包装细胞株。; 关键词阿尔茨海默病 β分泌酶底物肽反转录病毒载体包装细胞株转染; Keywords Alzheimer＇s disease β-secretase substrate-base peptide retrovirus vector packaging cell line PT67 transfection; 分类号 R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立被引量：1: 3; 作者辛晓玲吕长荣陈冬梅窦忠英; 机构西北农林科技大学动物医学院陕西省农业分子生物学重点实验室国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心河南省农业科学院畜牧兽医研究所; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1636-1641,共6页; 基金国家自然科学基金(30671067) 陕西省重大科技计划(2006KZ05-G1)资助; 文摘为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。; 关键词牛 Klf4基因 IPS细胞反转录病毒载体; Keywords bovine Klf4 gene iPS cells retrovirus vector; 分类号 S813.3 [农业科学—畜牧学] Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达: 4; 作者秦建如黎娜铭许长剑廖明曹伟胜; 机构华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2538-2543,共6页; 基金国家肉鸡产业技术体系(CARS-42-G09) 农业部公益性行业科研专项(201203055) 广东省科技计划项目(2012A020100001); 文摘为建立反转录病毒载体RCASBP介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在DF-1细胞中的表达体系,本研究将PCR获得的EGFP基因插入反转录病毒载体RCASBP,构建重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP,之后将重组载体转染DF-1细胞;用基于禽白血病病毒(ALV)p27抗原的ELISA检测盲传至第4代的细胞上清,ELISA阳性结果说明重组病毒拯救成功;荧光显微镜观察发现80%以上DF-1细胞都有明显的绿色荧光信号,证明DF-1细胞表达绿色荧光蛋白;对DF-1细胞基因组进行特异性PCR检测,扩增出特异性条带说明重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP携带的EGFP基因整合到DF-1细胞的基因组中。本研究建立的RCASBP介导反转录病毒表达体系为研究ALV基因的结构和功能奠定了基础。; 关键词禽白血病病毒反转录病毒载体RCASBP 增强型绿色荧光蛋白基因 DF-1细胞; Keywords avian leukosis virus lentiviral vector RCASBP enhanced green fluorescent protein（EGFP）gene DF-1cell; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名反转录病毒介导的 HSV-tk/ACV 系统基因治疗的安全性研究: 5; 作者卢大儒胡锦王之敏惠国桢李向东邱信芳薛京伦; 机构复旦大学遗传学研究所苏州医学院附属第一医院; 出处《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第8期50-55,共6页; 基金上海市科委启明星资助项目; 文摘研究了反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗脑肿瘤的安全性。首先采用ＰＣＲ、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交以及补救分析方法，对ＨＳＶ－ｔｋ病毒包装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ）、Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液进行了检测。结果表明，所采用的反转录病毒基因转移系统没有产生野生型病毒，是安全的；另一方面，采用细胞接种、Ｘ－ｇａｌ染色、ｔｋ基因的ＰＣＲ和病理切片观察方法，对ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统本身的安全性进行了探讨，结果表明ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统用于动物基因治疗，ＡＣＶ及其代谢产物没有发现明显的毒副作用和病理改变。反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统是安全的。; 关键词脑肿瘤反转录病毒载体基因治疗安全性; Keywords Retroviral vector, HSV tk/ACV system, RCR, Gene therapy, Safety; 分类号 R730.59 [医药卫生—肿瘤] R739.41 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立被引量：4: 6; 作者王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一; 机构吉林大学畜牧兽医学院军事医学科学院全军基因工程重点实验室延边大学农学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期203-209,共7页; 基金重大传染病专项(2008ZX10004-015) 军内十一五科技攻关项目(06G127) +1 种基金长春市科技特派员行动计划(09KT04); 文摘本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK293T细胞,包装出的反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白EGFP表达,验证HIV-1核心蛋白Gag表达,G418抗性筛选阳性细胞。结果表明,HIV-1核心蛋白Gag和增强型绿色荧光蛋白可在SP2/0细胞中稳定表达,HIV-1核心蛋白gag基因稳定表达细胞系成功建立,为抗AIDS治疗用基因工程制剂及靶向药物的活性检测提供了理想方法。; 关键词反转录病毒载体人免疫缺陷病毒核心蛋白增强型绿色荧光蛋白小鼠骨髓瘤细胞SP2/0; Keywords retroviral vector HIV-1 core protein enhanced green fluorescent protein SP2/0 cells; 分类号 R512.91 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽类转基因生产及其应用的研究现状和进展(待续) 被引量：3: 7; 作者李碧春钱菊汾; 机构扬州大学畜牧兽医学院西北农林科技大学动科院; 出处《动物科学与动物医学》 2001年第1期13-15,共3页; 文摘综述了禽类转基因方面的制作方法、转基因禽类应用研究概况。分别介绍了成熟卵泡微注射法、精子载体转基因法、反转录病毒载体转基因法、受精卵移植法、单细胞受精卵微注射法、胚盘嵌合体法、原始生殖细胞嵌合体法的进展及发展动态。阐明了转基因在宿主基因组中的表达特征及转基因禽类研究中出现的问题。; 关键词禽类转基因技术成熟儿泡微注射法反转录病毒载体法胚胎干细胞法; 分类号 S814.8 [农业科学—畜牧学] Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达	刘朝晖杨宇庄鹏辉许杰华马延兵胡海涛	《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	β-分泌酶底物肽反转录病毒载体及其包装细胞株的构建	崔媛媛胡海涛董炜疆王兰郑慧媛赵璇石明娟吴志新	《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立	辛晓玲吕长荣陈冬梅窦忠英	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达	秦建如黎娜铭许长剑廖明曹伟胜	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	反转录病毒介导的 HSV-tk/ACV 系统基因治疗的安全性研究	卢大儒胡锦王之敏惠国桢李向东邱信芳薛京伦	《高技术通讯》 EI CAS CSCD	1998	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立	王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	4	在线阅读下载PDF 职称材料
7	禽类转基因生产及其应用的研究现状和进展(待续)	李碧春钱菊汾	《动物科学与动物医学》	2001	3	在线阅读下载PDF 职称材料