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大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究
1
作者
李静
赵民安
+4 位作者
郝秀英
王晓军
曹玉锦
胡石开
唐晓义
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第11期4917-4919,共3页
[目的]研究大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA的质量及反转录活性。[方法]在大赖草总DNA转化小麦幼苗叶片mRNA差异显示相关试验中,利用改进的TRIzol法,从幼苗叶片中提取总RNA,紫外光谱分析,1.2%琼脂糖电泳检测,并进行随...
[目的]研究大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA的质量及反转录活性。[方法]在大赖草总DNA转化小麦幼苗叶片mRNA差异显示相关试验中,利用改进的TRIzol法,从幼苗叶片中提取总RNA,紫外光谱分析,1.2%琼脂糖电泳检测,并进行随机引物RT-PCR扩增。[结果]OD260 nm/OD280 nm比值为1.95～1.98;总RNA和RT-PCR电泳条带均表现出整齐、清晰。[结论]获得的总RNA质量好、纯度高,有很高的反转录活性,完全适合于进一步的分子生物学研究。
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关键词
大赖草总DNA转化小麦
差别显示
RNA
提取
反转录活性
在线阅读
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职称材料
嗜热毛壳菌端粒酶的表达纯化及酶学特性分析
2
作者
尹虎
宋泽玉
奚绪光
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期532-541,共10页
为进一步探究端粒酶的酶学特性,以嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum, Thermo)端粒酶为研究对象,通过生物化学、生物信息学等方法得到4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白,分别与体外转录得到的Thermo端粒酶RNA进行组装。通过端粒酶体外延...
为进一步探究端粒酶的酶学特性,以嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum, Thermo)端粒酶为研究对象,通过生物化学、生物信息学等方法得到4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白,分别与体外转录得到的Thermo端粒酶RNA进行组装。通过端粒酶体外延伸试验检测组装体的反转录活性,进一步分析影响其反转录活性的各种因素。结果表明,4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白重组质粒经大肠杆菌表达系统诱导表达后均可得到相应的Thermo端粒酶蛋白,且纯度均在90%以上;体外孵育试验表明,在10 mmol/L HEPES-KOH(pH 8.0)、1 mmol/L MgCl2、100 mmol/L NaCl、3 mmol/L KCl、体积分数25%Glycerol、10units/μL Rnasin的条件下,端粒酶蛋白与RNA的摩尔浓度比达到1∶1及以上时,两者能有效复合;端粒酶体外延伸试验发现,结构完整的Thermo端粒酶组装体具有很强的反转录活性,可使18nt-DNA引物反复延伸。TEN结构域不完整并未减弱Thermo端粒酶组装体的反转录活性,说明其在反转录过程中未发挥显著作用。T-PK区或TWJ区缺失的组装体均不能使18nt-DNA引物发生延伸,表明RNA结构的完整性是端粒酶发挥反转录功能的必要条件。
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关键词
Thermo端粒酶
蛋白表达纯化
RNA体外
转录
反转录活性
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职称材料
题名
大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究
1
作者
李静
赵民安
郝秀英
王晓军
曹玉锦
胡石开
唐晓义
机构
中国科学院新疆理化技术研究所
中国科学院研究生院
新疆农业科学院微生物应用研究所
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第11期4917-4919,共3页
基金
新疆农业科学院院长基金项目
文摘
[目的]研究大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA的质量及反转录活性。[方法]在大赖草总DNA转化小麦幼苗叶片mRNA差异显示相关试验中,利用改进的TRIzol法,从幼苗叶片中提取总RNA,紫外光谱分析,1.2%琼脂糖电泳检测,并进行随机引物RT-PCR扩增。[结果]OD260 nm/OD280 nm比值为1.95～1.98;总RNA和RT-PCR电泳条带均表现出整齐、清晰。[结论]获得的总RNA质量好、纯度高,有很高的反转录活性,完全适合于进一步的分子生物学研究。
关键词
大赖草总DNA转化小麦
差别显示
RNA
提取
反转录活性
Keywords
Transgenic wheat with total DNA of Leymus racemosus（Lam.） Tzvel
Diferential display
RNA
Extraction
Anti-transcription activity
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
嗜热毛壳菌端粒酶的表达纯化及酶学特性分析
2
作者
尹虎
宋泽玉
奚绪光
机构
西北农林科技大学生命科学学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期532-541,共10页
基金
国家自然科学基金(31870788)。
文摘
为进一步探究端粒酶的酶学特性,以嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum, Thermo)端粒酶为研究对象,通过生物化学、生物信息学等方法得到4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白,分别与体外转录得到的Thermo端粒酶RNA进行组装。通过端粒酶体外延伸试验检测组装体的反转录活性,进一步分析影响其反转录活性的各种因素。结果表明,4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白重组质粒经大肠杆菌表达系统诱导表达后均可得到相应的Thermo端粒酶蛋白,且纯度均在90%以上;体外孵育试验表明,在10 mmol/L HEPES-KOH(pH 8.0)、1 mmol/L MgCl2、100 mmol/L NaCl、3 mmol/L KCl、体积分数25%Glycerol、10units/μL Rnasin的条件下,端粒酶蛋白与RNA的摩尔浓度比达到1∶1及以上时,两者能有效复合;端粒酶体外延伸试验发现,结构完整的Thermo端粒酶组装体具有很强的反转录活性,可使18nt-DNA引物反复延伸。TEN结构域不完整并未减弱Thermo端粒酶组装体的反转录活性,说明其在反转录过程中未发挥显著作用。T-PK区或TWJ区缺失的组装体均不能使18nt-DNA引物发生延伸,表明RNA结构的完整性是端粒酶发挥反转录功能的必要条件。
关键词
Thermo端粒酶
蛋白表达纯化
RNA体外
转录
反转录活性
Keywords
Thermo telomerase
Protein expression and purification
RNA transcription in vitro
Reverse transcriptional activity
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究
李静
赵民安
郝秀英
王晓军
曹玉锦
胡石开
唐晓义
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
嗜热毛壳菌端粒酶的表达纯化及酶学特性分析
尹虎
宋泽玉
奚绪光
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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