籽粒苋copia类反转录转座子的初步研究 被引量：2

1

作者 江树业 孙梅 +2 位作者 何予卿 陈洪 陈启锋 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第2期218-222,共5页

本研究首次报道了籽粒苋中也存在 copia类反转录转座子 ,进一步验证了 copia类反转录转座子广泛存在于高等植物中 .采用 PCR方法分离鉴定了来自 4个种 2 7个基因型中的 5 3个 RT酶区序列 .序列分析表明 ,籽粒苋中的 copia类反转录转座... 本研究首次报道了籽粒苋中也存在 copia类反转录转座子 ,进一步验证了 copia类反转录转座子广泛存在于高等植物中 .采用 PCR方法分离鉴定了来自 4个种 2 7个基因型中的 5 3个 RT酶区序列 .序列分析表明 ,籽粒苋中的 copia类反转录转座子不但具有长度多样性、种间多样性、种内多样性 ,而且来自相同基因型的反转录转座子之间也存在高度异质性 .Southern杂交分析表明 ,籽粒苋中的 copia类反转录转座子以多拷贝形式存在 .Northern杂交分析表明 ,籽粒苋中的 copia类反转录转座子可能失去了转座活性 .本研究还对采用 PCR技术分离全长的 copia类反转录转座子进行了初步探讨 ,认为该方法可行 ,具有快速、经济等优点 。 展开更多

关键词 籽粒苋 copia类反转录转座子 rt酶区 异质粒 pcr

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甘蔗黄叶综合症的RT-PCR检测初报 被引量：12

2

作者 王伯辉 朱秋珍 +4 位作者 莫磊兴 王维赞 邓展云 黄冬发 王中康 《甘蔗（福建）》 2003年第4期1-3,共3页

对2002年12月采自南宁的4个田间症状程度不同的样品作RT-PCR检测,结果表明,A1(粤糖93/159)、A2(粤糖93/159)、B1(CP88/1508)3个样品为阳性,确认田间发生的是甘蔗黄叶综合症(YLS),是我国甘蔗新病害。建议尽快对病害加以控制,并加强甘蔗... 对2002年12月采自南宁的4个田间症状程度不同的样品作RT-PCR检测,结果表明,A1(粤糖93/159)、A2(粤糖93/159)、B1(CP88/1508)3个样品为阳性,确认田间发生的是甘蔗黄叶综合症(YLS),是我国甘蔗新病害。建议尽快对病害加以控制,并加强甘蔗引用检疫工作。 展开更多

关键词 甘蔗黄叶综合症 rt-pcr 广西 反转录多聚酶链式反应

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下丘脑GnRH-I mRNA在绍兴鸭松果腺中的表达 被引量：4

3

作者 倪迎冬 周玉传 +2 位作者 卢立志 陈杰 赵茹茜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期135-137,共3页

用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测 30至 15 0日龄绍兴鸭松果腺内GnRH ImRNA含量的变化。结果表明 ,绍兴鸭松果腺内存在GnRH ImRNA的表达且其核苷酸序列与绍兴鸭下丘脑内GnRH ImRNA仅有一个核苷酸差异 ,且不影响氨基酸的编码序... 用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测 30至 15 0日龄绍兴鸭松果腺内GnRH ImRNA含量的变化。结果表明 ,绍兴鸭松果腺内存在GnRH ImRNA的表达且其核苷酸序列与绍兴鸭下丘脑内GnRH ImRNA仅有一个核苷酸差异 ,且不影响氨基酸的编码序列 ,但 30至 15 0日龄松果腺内GnRH ImRNA含量未出现显著性差异 (P >0 0 5 )。 展开更多

关键词 绍兴鸭 反转录多聚酶链式反应(rt—pcr) 促性腺激素释放激素Ⅰ(GnRH-Ⅰ) 松果腺 下丘脑

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出雏至性成熟绍鸭卵巢FSH-R与LH-R mRNA表达的变化 被引量：19

4

作者 倪迎冬 赵茹茜 +3 位作者 王亚菊 周玉传 傅启高 陈杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期64-67,共4页

用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测绍鸭出雏至 90日龄卵巢卵泡刺激素受体 (FSH R)和黄体生成素受体 (LH R)mRNA含量的变化。结果表明 ,卵巢FSH RmRNA水平在 30和 6 0日龄较高 ,且 30日龄时极显著高于 1和 90日龄 (P <0 0 1) ... 用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测绍鸭出雏至 90日龄卵巢卵泡刺激素受体 (FSH R)和黄体生成素受体 (LH R)mRNA含量的变化。结果表明 ,卵巢FSH RmRNA水平在 30和 6 0日龄较高 ,且 30日龄时极显著高于 1和 90日龄 (P <0 0 1) ,与该阶段较高的卵巢相对生长速度相对应 ;而卵巢LH RmRNA水平随日龄逐渐升高 ,30、 6 0和 90日龄极显著高于 1日龄 (P <0 0 1) ,90日龄显著高于 30和 6 0日龄 (P <0 0 5 )。提示 :卵巢在早期发育阶段 ,尤其是快速增重期 ,对FSH的反应性较高 ;而接近性成熟时 ,可能由于卵泡发育的关系而对LH的反应性升高。 展开更多

关键词 绍鸭 反转录多聚酶链式反应(rt-pcr) 卵泡刺激素受体(FSH-R) 黄体生成素受体(LH-R) 卵巢

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饲粮添加锌对蛋鸡金属硫蛋白基因表达的影响 被引量：2

5

作者 李发弟 张军霞 +4 位作者 倪迎冬 赵茹茜 郝正里 郎侠 刘建斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期305-308,共4页

选用66只18周龄商品代伊莎蛋鸡,随机分为3组,每组22只。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2组在基础饲粮中分别添加60和180 mg/kg锌(以ZnSO4.H2O形式),10周后屠宰采样。采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测不同锌添加水平对蛋... 选用66只18周龄商品代伊莎蛋鸡,随机分为3组,每组22只。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2组在基础饲粮中分别添加60和180 mg/kg锌(以ZnSO4.H2O形式),10周后屠宰采样。采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测不同锌添加水平对蛋鸡肝脏和肾脏中金属硫蛋白(Metallothionein,MT)mRNA表达水平的影响。结果表明:试验1组蛋鸡肝脏中MT mRNA表达丰度显著高于试验2组和对照组(P<0.05),而试验2组与对照组之间无明显差异(P>0.05)。试验1组蛋鸡肾脏MT mRNA表达丰度显著高于试验2组(P<0.05),而试验1、2组与对照组之间均无显著性差异(P>0.05)。在饲粮中添加低水平锌可显著上调蛋鸡肝脏和肾脏中MTmRNA的表达。 展开更多

关键词 伊莎蛋鸡 锌 金属硫蛋白 反转录多聚酶链式反应 肝脏 肾脏

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加工番茄PG基因片段的cDNA克隆及表达载体构建 被引量：3

6

作者 许小勇 张丽华 +2 位作者 吴正景 关志华 程智慧 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期158-162,共5页

从加工番茄红熟果实中提取总RNA,根据已发表的多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的序列设计合成一对特异引物,经过反转录PCR,扩增出一条697bp的目的片段。通过TA克隆,把它连接到pMD18-T vector上,测序鉴定其正确性。扩增片段经Sal I和Sma I双酶... 从加工番茄红熟果实中提取总RNA,根据已发表的多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的序列设计合成一对特异引物,经过反转录PCR,扩增出一条697bp的目的片段。通过TA克隆,把它连接到pMD18-T vector上,测序鉴定其正确性。扩增片段经Sal I和Sma I双酶切插入到表达载体pBinAR CaMV 35S启动子和OCS终止子之间,用M13测序引物和目的片段引物进行PCR扩增鉴定,构建成含有PG基因片段的反义表达载体pBinAR-aPG,为进一步对加工番茄的遗传转化奠定了基础。 展开更多

关键词 加工番茄 多聚半乳糖醛酸酶 反转录pcr 克隆 反义表达载体

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孵出至产蛋前绍兴鸭下丘脑GnRH-Ⅰ与POMC mRNA表达的变化 被引量：3

7

作者 倪迎冬 周玉传 +2 位作者 卢立志 陈杰 赵茹茜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期85-88,共4页

采用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法 ,检测绍兴蛋鸭出雏后至性成熟期 (12 0日龄 )下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH Ⅰ )和阿片促黑激素皮质素原 (POMC)mRNA的变化。结果表明 :从 1日龄到 12 0日龄 ,下丘脑GnRH ⅠmRNA水平逐渐升高 ,... 采用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法 ,检测绍兴蛋鸭出雏后至性成熟期 (12 0日龄 )下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH Ⅰ )和阿片促黑激素皮质素原 (POMC)mRNA的变化。结果表明 :从 1日龄到 12 0日龄 ,下丘脑GnRH ⅠmRNA水平逐渐升高 ,1日龄水平最低 ,90日龄时显著高于 1日龄 (P <0 0 5 ) ,12 0日龄时极显著高于 1和 30日龄 (P <0 0 1) ,显著高于 6 0日龄 (P <0 0 5 )。下丘脑POMCmRNA含量呈先升后降趋势 ,6 0日龄时表达量最高 ,其水平极显著高于 1,30和 12 0日龄 (P <0 0 1) ,显著高于 90日龄时水平 (P <0 0 5 )。提示POMC基因表达的下调与GnRH Ⅰ基因表达的上调之间可能存在联系 ,两者的协同作用可能是青春期启动的关键因素。 展开更多

关键词 绍兴鸭 反转录多聚酶链式反应 促性腺激素释放激素 阿片促黑激素皮质素原 性成熟

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小菜蛾GluCl受体α亚基cDNA基因克隆和序列分析 被引量：3

8

作者 梁延坡 吴青君 +3 位作者 刘长仲 张友军 王少丽 徐宝云 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期49-54,共6页

利用RT-PCR和RACE技术对小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]4龄幼虫谷氨酸门控的氯离子通道(GluCl)受体cDNA全长进行了克隆和序列分析。通过设计简并性上、下游引物扩增出小菜蛾GluCl受体α亚基基因192bp的cDNA片段,根据得到的片段序列设... 利用RT-PCR和RACE技术对小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]4龄幼虫谷氨酸门控的氯离子通道(GluCl)受体cDNA全长进行了克隆和序列分析。通过设计简并性上、下游引物扩增出小菜蛾GluCl受体α亚基基因192bp的cDNA片段,根据得到的片段序列设计3′和5′特异性引物采用RACE技术进行3′和5′末端的克隆,获得了小菜蛾GluCl受体的cDNA的完整序列,GenBank登录号为GQ221939。该基因全长2144bp,其开放阅读框(ORF)1344bp,编码447个氨基酸。相似性分析表明:它与果蝇和赤拟谷盗的相似性均为73%,与埃及伊蚊的相似性为75%,与东亚飞蝗的相似性为79%;氨基酸分析后显示它具有GluClα亚基的典型特征,表明克隆的cDNA序列是小菜蛾GluClα亚基基因的序列。 展开更多

关键词 小菜蛾 谷氨酸门控的氯离子通道受体 反转录-多聚酶链式反应 RACE 序列分析

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人sCR1结合C3b结构域基因的克隆及在大肠杆菌中高效表达 被引量：7

9

作者 罗雪 汪正清 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第15期1551-1554,共4页

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转... 目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。 展开更多

关键词 可溶性补体Ⅰ型受体 反转录多聚酶链式反应 互补DNA克隆 蛋白质表达

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棉铃虫CYP4家族基因片段克隆及序列分析 被引量：3

10

作者 艾颖 邱星辉 何凤琴 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期60-64,共5页

以5龄实验室品系棉铃虫的总RNA为模板,采用一对昆虫细胞色素P450简并引物,利用反转录—多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增并筛选出10个新的长度约450bp的cDNA片段,并对这些序列与GeneBank中已知序列进行相似性分析,初步推测这10个P450基因片... 以5龄实验室品系棉铃虫的总RNA为模板,采用一对昆虫细胞色素P450简并引物,利用反转录—多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增并筛选出10个新的长度约450bp的cDNA片段,并对这些序列与GeneBank中已知序列进行相似性分析,初步推测这10个P450基因片段属于CYP4家族的CYP4M和CYP4S2个亚家族。 展开更多

关键词 棉铃虫 细胞色素P450 反转录-多聚酶链式反应 基因克隆

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马冠状病毒检测试剂盒的研制 被引量：3

11

作者 姜焱 顾炳泉 +1 位作者 张常印 李建 《动物医学进展》 CSCD 2005年第8期98-100,共3页

参考GenBank发表的马冠状病毒的基因序列,设计合成一对引物,对马冠状病毒进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约427bp的条带,并进行序列测定,与GenBank中发表的基因序列比较发现,与马冠状病毒核苷酸的同源性为98.7%,证实为马... 参考GenBank发表的马冠状病毒的基因序列,设计合成一对引物,对马冠状病毒进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约427bp的条带,并进行序列测定,与GenBank中发表的基因序列比较发现,与马冠状病毒核苷酸的同源性为98.7%,证实为马冠状病毒基因。通过对RT-PCR反应条件进行优化,研制了用RT-PCR方法检测马冠状病毒的试剂盒,该试剂盒的敏感性和特异性都较好。 展开更多

关键词 马冠状病毒 反转录-多聚酶链式反应

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农业害虫铅灰齿爪鳃金龟气味受体基因Or83b的克隆及序列分析 被引量：3

12

作者 陈全森 姜晓静 +3 位作者 鞠倩 赵志强 曲明静 朱新产 《江西农业学报》 CAS 2010年第11期1-4,共4页

采用简并引物反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从农业害虫铅灰齿爪鳃金龟中分离和克隆了一类非常保守的嗅觉受体蛋白基因(命名为Hp-Or83b)全序列。Hp-Or83b全长共1822 bp,5’-UTR为168 bp,3’-UTR为220 bp,... 采用简并引物反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从农业害虫铅灰齿爪鳃金龟中分离和克隆了一类非常保守的嗅觉受体蛋白基因(命名为Hp-Or83b)全序列。Hp-Or83b全长共1822 bp,5’-UTR为168 bp,3’-UTR为220 bp,开放阅读框全长1434 bp,编码478个氨基酸,预测分子量为54.24 kDa,等电点为7.46。通过同源性比较,发现Hp-Or83b氨基酸序列与已知的其它昆虫的Or83b具有较高的同源性。因此推断所获得的cDNA序列为农业害虫铅灰齿爪鳃金龟气味受体基因Or83b的cDNA序列。 展开更多

关键词 农业害虫 铅灰 金龟 气味 受体基因 克隆 序列分析 Receptor Sequence Analysis 反转录多聚酶链式反应 CDNA序列 同源性比较 末端快速扩增 氨基酸序列 开放阅读框 嗅觉受体 简并引物 蛋白基因 全序列 分子量

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2周耐力训练对大鼠骨骼肌肌动蛋白和肌球蛋白重链基因表达的影响 被引量：10

13

作者 逄金柱 王瑞元 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期415-418,共4页

目的:研究2周跑台训练对雄性SD大鼠骨骼肌肌动蛋白(α-actin)和肌球蛋白重链(myosinheavychain,MHC)基因表达的影响。方法:实验以20只雄性SD大鼠为研究对象,将其随机分为对照组和训练组。运动训练组大鼠进行连续2周强度约为75%VO2max(1... 目的:研究2周跑台训练对雄性SD大鼠骨骼肌肌动蛋白(α-actin)和肌球蛋白重链(myosinheavychain,MHC)基因表达的影响。方法:实验以20只雄性SD大鼠为研究对象,将其随机分为对照组和训练组。运动训练组大鼠进行连续2周强度约为75%VO2max(18.5～24米/分钟,坡度为0°,每次运动50分钟,每天2次)的跑台训练,采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定股四头肌深层肌α-actin和MHCmRNA含量。结果:(1)连续2周跑台训练后,股四头肌α-actinmRNA表达增加了22%(P<0.01)。(2)连续2周跑台训练后,股四头肌MHCIIx、MHCIIbmRNA含量分别是安静对照组的109%(P<0.05)和108%(P<0.001),MHCIIb和MHCImRNA变化不明显,结论:(1)短期耐力训练能够提高骨骼肌α-actin基因表达;(2)短期耐力训练后,快型MHC中的两种慢型MHC异形体———MHCIIx、MHCIIa基因表达增加,但未引起快型MHCIIb和慢型MHCI基因表达的变化。 展开更多

关键词 肌球蛋白重链 基因表达 肌动蛋白 耐力训练 骨骼肌 Α-ACTIN 反转录聚合酶链式反应 RNA含量 股四头肌 mRNA表达 SD大鼠 MHCI chain 训练后 研究对象 pcr) 训练组 对照组 半定量 雄性 运动 短期 慢型 快型

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Ghrelin在马鹿器官组织中的表达

14

作者 张召议 王彩云 杨银凤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期29-31,34,共4页

为研究Ghrelin在马鹿体内可能表达的器官,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测马鹿的舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝、胰... 为研究Ghrelin在马鹿体内可能表达的器官,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测马鹿的舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝、胰、颌下腺、腮腺、气管、肺、肾、输尿管、膀胱、卵巢、输卵管、子宫、阴道、大脑、下丘脑、垂体、松果体、甲状腺、肾上腺、心肌、心内膜、脾、淋巴结和骨骼肌中Ghrelin表达情况。结果显示,Ghrelin在皱胃内的表达量明显高于其他器官(P<0.05);胰、子宫、卵巢、十二指肠和食管次之,与其余30种器官的表达量相比差异也显著(P<0.05);其余器官内的表达量相对较少。结论:Ghrelin在所检测的36种器官内均有表达。 展开更多

关键词 GHRELIN 马鹿 反转录-聚合酶链式反应 实时荧光定量pcr

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冬小麦黄矮病毒的分子生物学鉴定试验研究

15

作者 杜秋丽 《种子科技》 2016年第8期113-114,共2页

本研究以检测冬小麦黄矮病毒(BYDV-PAV)的分子生物学特征为目的。首先,通过电击法将3种质粒(UV1304、UV1306、UV1304rtd)转化土壤农杆菌(EHA105、4404,GV3101等)。然后,通过机械损伤使含有上述质粒的农杆菌侵染小麦(西农749、小偃6号、... 本研究以检测冬小麦黄矮病毒(BYDV-PAV)的分子生物学特征为目的。首先,通过电击法将3种质粒(UV1304、UV1306、UV1304rtd)转化土壤农杆菌(EHA105、4404,GV3101等)。然后,通过机械损伤使含有上述质粒的农杆菌侵染小麦(西农749、小偃6号、张氏3个品种),并将侵染后的小麦放在室外进行处理,至表现出感染病毒的症状时提取病毒RNA并进行检测。经过一段时间的处理后,只有西农749表现出症状,RNA电泳也显示出提取物中存在RNA,但是经过RT-PCR反转录然后再PCR扩增c DNA后进行电泳出现负结果。3种质粒的c DNA电泳结果出现相似现象:以CP5′+MPR1为引物得到的c DNA电泳均无条带;其他引物得到的c DNA电泳均显示相似的条带,而且因引物不同条带位置也不同。 展开更多

关键词 冬小麦黄矮病毒(BYDV-PAV) 土壤农杆菌(GV3101) 反转录pcr(rt-pcr) 聚合酶链式反应(pcr)

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