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精氨酸缺陷型菌株发酵生产反式-4-羟脯氨酸被引量：2: 1; 作者王晓姣张震宇 +1 位作者孙付保于林《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期24-30,共7页; 为了获得高产反式-4-羟脯氨酸的菌株,基于大肠杆菌的代谢网络模型的指导,以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)Δput A为出发菌株,通过基因敲除技术成功敲除arg B基因,阻断L-脯氨酸合成的前体物L-谷氨酸的分支代谢途径,增加L-脯氨酸合成的代谢流... 展开更多; 关键词大肠杆菌1 反式-4-羟脯氨酸2 基因敲除3 脯氨酸4; 在线阅读下载PDF 职称材料

无外源脯氨酸发酵产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及发酵优化被引量：1: 2; 作者胡丹丹王付才 +2 位作者张震宇孙付保周邦炜《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第20期168-174,共7页; 为实现无外源脯氨酸的条件下直接从葡萄糖转化生成反式-4-羟脯氨酸,本实验采用定点突变和基因共表达的方法构建重组大肠杆菌:首先对L-脯氨酸生物合成途径中的关键酶谷氨酸激酶进行定点突变E143A、K145A,以增强L-脯氨酸生物合成能力;然... 展开更多; 关键词脯氨酸4-羟化酶反式-4-羟脯氨酸 L-脯氨酸谷氨酸激酶共表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

提高产反式-4-羟脯氨酸工程菌产量的发酵策略被引量：1: 3; 作者王晓姣杨慧敏 +2 位作者张震宇孙付保周豪《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期40-48,共9页; 为了实现羟脯氨酸的高产,首先以缺陷型菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH作为实验菌,通过单因素优化及正交试验,优化得到新的培养基配方及培养条件。其次通过基因工程手段引入透明颤菌血红蛋白VHB基因,构建菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-... 展开更多; 关键词反式-4-羟脯氨酸大肠杆菌工程菌缺陷型透明颤菌血红蛋白发酵优化; 在线阅读下载PDF 职称材料

以甘油为碳源发酵高产反式-4-羟脯氨酸菌株的选育及营养优化: 4; 作者王金霞黄建华 +3 位作者于林张震宇岳春孙付保《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期40-47,共8页; 以低品级甘油为碳源进行微生物发酵合成反式-4-羟脯氨酸(Trans-4-hydroxy proline,Hyp)的探索。从实验室构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/p UC19-ptrp2-Hyp出发,通过易错PCR随机突变和常压室温等离子体复合诱变处理,利用单菌落琼脂块和氨... 展开更多; 关键词低品级甘油重组大肠杆菌反式-4-羟脯氨酸(Traas-4-hydroxy—L-proline Hyp) 复合突变营养优化; 在线阅读下载PDF 职称材料

sucA缺失型大肠杆菌菌株的构建与发酵条件优化: 5; 作者林凡张震宇 +1 位作者孙付保于林《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期830-837,共8页; 反式-4-羟脯氨酸在多领域具有重要应用价值。为了进一步提高反式-4-羟脯氨酸的产量,在已构建好的E. coli BL21(DE3)△putA的基础上,敲除基因sucA的同时插入密码子优化后的反式-4-羟化酶基因(hyp),并将构建好的质粒pUC19-ptrp2-hyp-vgb... 展开更多; 关键词反式-4-羟脯氨酸 sucA 透明颤菌血红蛋白基因敲除重组大肠杆菌全细胞酶活; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名精氨酸缺陷型菌株发酵生产反式-4-羟脯氨酸被引量：2: 1; 作者王晓姣张震宇孙付保于林; 机构江南大学生物工程学院; 出处《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期24-30,共7页; 基金国家自然科学基金(30970058) 江苏省自然科学基金(BK2012554) 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)开放课题基金(KLIB-ZR200801); 文摘为了获得高产反式-4-羟脯氨酸的菌株,基于大肠杆菌的代谢网络模型的指导,以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)Δput A为出发菌株,通过基因敲除技术成功敲除arg B基因,阻断L-脯氨酸合成的前体物L-谷氨酸的分支代谢途径,增加L-脯氨酸合成的代谢流,构建了精氨酸缺陷型菌株E.coli BL21(DE3)Δput AΔarg B。同时转入表达质粒p UC19-pro B2A-Ptrp2-hyp,该质粒含有突变基因pro B2,该突变基因所编码的谷氨酸激酶受L-脯氨酸的反馈抑制作用显著降低。摇瓶发酵结果表明,在外源添加600 mg/L L-精氨酸时,该重组菌株产反式-4-羟脯氨酸的量达到312.67 mg/L,较菌株E.coli BL21(DE3)Δput A/p UC19-pro B2A-Ptrp2-hyp提高了25.29%。; 关键词大肠杆菌1 反式-4-羟脯氨酸2 基因敲除3 脯氨酸4; Keywords Escherichia coli trans-4-hydroxyproline knockout proline; 分类号 TQ922 [轻工技术与工程—发酵工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名无外源脯氨酸发酵产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及发酵优化被引量：1: 2; 作者胡丹丹王付才张震宇孙付保周邦炜; 机构江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室和糖化学与生物技术教育部重点实验室; 出处《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第20期168-174,共7页; 基金高等学校博士学科点专项科研基金(200802951036) 国家自然科学基金(30800018 +1 种基金 30970058) 江苏省自然科学基金(BK2012554); 文摘为实现无外源脯氨酸的条件下直接从葡萄糖转化生成反式-4-羟脯氨酸,本实验采用定点突变和基因共表达的方法构建重组大肠杆菌:首先对L-脯氨酸生物合成途径中的关键酶谷氨酸激酶进行定点突变E143A、K145A,以增强L-脯氨酸生物合成能力;然后引入脯氨酸4-羟化酶基因,通过两个基因的共表达可以实现从葡萄糖到反式-4-羟脯氨酸的连续转化,而不再需要添加外源L-脯氨酸。得到的L-脯氨酸生物合成能力增强的菌株在摇瓶阶段L-脯氨酸的产量可达到1.4 g/L;pro BA2与hyp双基因共表达菌株的反式-4-羟脯氨酸产量为98.9 mg/L,比原始菌株提高了一倍,经发酵优化后得到培养基为:葡萄糖10 g/L,胰蛋白胨15 g/L,硫酸亚铁3 mmol/L,硫酸镁1 g/L,磷酸氢二钾3 g/L,氯化钙0.015 g/L,在这个培养条件下反式-4-羟脯氨酸的产量为220.0 mg/L,比优化前提高1.2倍。; 关键词脯氨酸4-羟化酶反式-4-羟脯氨酸 L-脯氨酸谷氨酸激酶共表达; Keywords proline 4-hydroxylase trans-4-hydroxyproline L-proline glutamate kinase co-expression; 分类号 TS201.1 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名提高产反式-4-羟脯氨酸工程菌产量的发酵策略被引量：1: 3; 作者王晓姣杨慧敏张震宇孙付保周豪; 机构江南大学生物工程学院; 出处《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期40-48,共9页; 基金国家自然科学基金项目（30800018,30970058）江苏省自然科学基金项目（BK2012554）江南大学工业生物技术教育部重点实验室开放课题基金项目（KLIB-ZR200801）; 文摘为了实现羟脯氨酸的高产,首先以缺陷型菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH作为实验菌,通过单因素优化及正交试验,优化得到新的培养基配方及培养条件。其次通过基因工程手段引入透明颤菌血红蛋白VHB基因,构建菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BHV,进行高密度发酵。结果显示,发酵培养基为:麦芽糖10 g/L,甘油5 g/L,胰蛋白胨22 g/L,K2HPO44 g/L,FeSO4(Fe2+∶VC=1∶1)5 mmol/L,MgSO4·7H2O 1.7 g/L,Nacl 3 g/L,Cacl20.005 g/L;培养条件为:初始pH 8.5,温度30℃,接种体积分数4%,转速220 r/min。此条件下,菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH羟脯氨酸产量约为1602 mg/L,约为优化前的1.4倍.在7 L罐发酵培养,菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BHV的羟脯氨酸产量约为18.3 g/L,与JM109ΔargB/pUC19-BH相比,提高了13.2%,说明VHB基因的引入有利于羟脯氨酸产量提高.; 关键词反式-4-羟脯氨酸大肠杆菌工程菌缺陷型透明颤菌血红蛋白发酵优化; Keywords trans-4-Hydroxyproline engineering strain E.coli defective strain vitreoscilla hemoglobin fermentation optimization; 分类号 Q815 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以甘油为碳源发酵高产反式-4-羟脯氨酸菌株的选育及营养优化: 4; 作者王金霞黄建华于林张震宇岳春孙付保; 机构江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡南阳理工学院生物与化学工程学院; 出处《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期40-47,共8页; 基金国家自然科学基金(21176106) 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)开放课题基金(KLIB-ZR200801) 河南省科技开放合作项目(162106000007); 文摘以低品级甘油为碳源进行微生物发酵合成反式-4-羟脯氨酸(Trans-4-hydroxy proline,Hyp)的探索。从实验室构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/p UC19-ptrp2-Hyp出发,通过易错PCR随机突变和常压室温等离子体复合诱变处理,利用单菌落琼脂块和氨基酸显色相结合高通量筛选出1株以甘油为唯一碳源的Hyp高产菌P71。与葡萄糖培养基相比,该菌株更适合在甘油上生长并转化L-脯氨酸合成Hyp,发酵20 h产Hyp高达1.20g/L,比生长在葡萄糖培养基上高70%以上;比其出发菌株在葡萄糖培养基上产量提高了1倍以上。通过培养基成分系统优化,发现胰蛋白胨、Fe SO4和L-脯氨酸是3大主要影响因素,最适加量分别为7.01 g/L、11.51 g/L和1.41 mmol/L;在该条件下突变菌株摇瓶发酵12 h产Hyp达1.61 g/L,比优化前提高了50%。; 关键词低品级甘油重组大肠杆菌反式-4-羟脯氨酸(Traas-4-hydroxy—L-proline Hyp) 复合突变营养优化; Keywords glycerol recombinant Escherichia coli trans-4-hydroxy proline （Hyp） combination mutagenesis nutritional optimization; 分类号 TQ922 [轻工技术与工程—发酵工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名sucA缺失型大肠杆菌菌株的构建与发酵条件优化: 5; 作者林凡张震宇孙付保于林; 机构江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室; 出处《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期830-837,共8页; 基金国家自然科学基金项目(30800018 30970058) +3 种基金工业生物技术教育部重点实验室主任基金项目(KLIB-ZR200801); 文摘反式-4-羟脯氨酸在多领域具有重要应用价值。为了进一步提高反式-4-羟脯氨酸的产量,在已构建好的E. coli BL21(DE3)△putA的基础上,敲除基因sucA的同时插入密码子优化后的反式-4-羟化酶基因(hyp),并将构建好的质粒pUC19-ptrp2-hyp-vgb导入该基因敲除菌株中。之后在摇瓶水平上,单因素优化发酵条件与发酵培养基的组分,并通过正交实验进一步确定敲除菌株的培养条件。结果表明:与含有同样质粒的原菌和两种单敲除菌E. coli BL21(DE3)△sucA、E. coli BL21(DE3)△putA相比,E. coli BL21(DE3)△putA△sucA双敲除菌具有最高的全细胞酶活,大约是原菌的2.6倍;在摇瓶水平上,发酵条件优化后,以100 mmol/L的L-脯氨酸为底物进行发酵,12 h后可得到1.08 g/L的羟脯氨酸,是优化前的3.87倍。; 关键词反式-4-羟脯氨酸 sucA 透明颤菌血红蛋白基因敲除重组大肠杆菌全细胞酶活; Keywords trans-4-hydroxyproline sucA Vitreoscilla hemoglobin gene knockout recombinant E.coli whole cell activity; 分类号 TQ920.1 [轻工技术与工程—发酵工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	精氨酸缺陷型菌株发酵生产反式-4-羟脯氨酸	王晓姣张震宇孙付保于林	《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	无外源脯氨酸发酵产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及发酵优化	胡丹丹王付才张震宇孙付保周邦炜	《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	提高产反式-4-羟脯氨酸工程菌产量的发酵策略	王晓姣杨慧敏张震宇孙付保周豪	《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	以甘油为碳源发酵高产反式-4-羟脯氨酸菌株的选育及营养优化	王金霞黄建华于林张震宇岳春孙付保	《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	sucA缺失型大肠杆菌菌株的构建与发酵条件优化	林凡张震宇孙付保于林	《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料