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基于DNA-launched的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3: 1; 作者曹宗喜焦培荣 +3 位作者谭树义叶保国亓文宝张桂红《动物医学进展》北大核心 2016年第11期1-8,共8页; 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,将PRRSV全基因组分6段克隆,构建获得6个重组质粒,先由A1和A2片段或B1和B2片段连接构成A片段或B片段,然后D、C、B和A片段依次亚克隆入pOKq载体。在基因组5′端和3′端分别加上CMV... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统构建; 在线阅读下载PDF 职称材料

新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立: 2; 作者魏家阳李丽 +7 位作者王国康徐英英曾哲罗青平邵华斌温国元商雨潘兹书《动物医学进展》北大核心 2023年第2期30-35,共6页; 为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC... 展开更多; 关键词新城疫病毒 Mukteswar株反向遗传操作系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达绿色荧光蛋白重组猪塞内卡病毒的构建及初步应用被引量：5: 3; 作者张晓战杨磊 +8 位作者邓同炜赵攀登彭志锋陈露露郭懿文夏艳勋乔宏兴边传周王增《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期2978-2985,共8页; 塞内卡病毒A(SVA)是新近发现的一种能够引起猪特发性水疱病及新生仔猪死亡为主要临床特征的病原微生物。该病呈世界性分布,给多个国家的养猪业造成了一定的经济损失。鉴于目前国内外尚无可用SVA商品化疫苗和抗病毒药物上市,本研究拟在... 展开更多; 关键词塞内卡病毒反向遗传操作系统报告病毒绿色荧光蛋白抗病毒药物筛选; 在线阅读下载PDF 职称材料

PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响被引量：2: 4; 作者李舜李桂珍 +5 位作者原耀贤李康健马春全李守军黄良宗马骏《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期272-280,共9页; H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)已在中国多地的犬群中流行,是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明,PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关,且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-... 展开更多; 关键词犬流感 H3N2 反向遗传操作系统 PA-X 致病性; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于DNA-launched的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3: 1; 作者曹宗喜焦培荣谭树义叶保国亓文宝张桂红; 机构海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室/国家生猪种业工程中心; 出处《动物医学进展》北大核心 2016年第11期1-8,共8页; 基金国家自然科学基金项目(31272564) 现代农业产业技术体系专项资金项目(CARS-36) 海南省科学事业费项目(13-214002-0002); 文摘为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,将PRRSV全基因组分6段克隆,构建获得6个重组质粒,先由A1和A2片段或B1和B2片段连接构成A片段或B片段,然后D、C、B和A片段依次亚克隆入pOKq载体。在基因组5′端和3′端分别加上CMV启动子序列和BGH终止信号肽,全基因组510位核苷酸突变引入遗传标记位点FseⅠ。测序正确的全基因组质粒命名为pOK-A2BCD。再将pOK-A2BCD质粒转染BHK-21细胞,拯救病毒通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,结果表明拯救病毒成功,为进一步研究PRRSV致病性等相关分子机制奠定了基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统构建; Keywords PRRSV reverse genetics establishment; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立: 2; 作者魏家阳李丽王国康徐英英曾哲罗青平邵华斌温国元商雨潘兹书; 机构武汉大学生命科学学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所; 出处《动物医学进展》北大核心 2023年第2期30-35,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31873018) 国家现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-41-G13) +2 种基金湖北省农业科技创新中心重大科技研发(2020-620-000-002-01)。; 文摘为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞,成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定,结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统,为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。; 关键词新城疫病毒 Mukteswar株反向遗传操作系统; Keywords Newcastle disease virus Mukteswar strain reverse genetic system; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达绿色荧光蛋白重组猪塞内卡病毒的构建及初步应用被引量：5: 3; 作者张晓战杨磊邓同炜赵攀登彭志锋陈露露郭懿文夏艳勋乔宏兴边传周王增; 机构河南牧业经济学院动物医药学院河南农业大学动物医学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期2978-2985,共8页; 基金国家自然科学基金(32002264) 河南省科技攻关项目(192102110186) +2 种基金国家级大学生创新创业训练计划项目(202010469018)。; 文摘塞内卡病毒A(SVA)是新近发现的一种能够引起猪特发性水疱病及新生仔猪死亡为主要临床特征的病原微生物。该病呈世界性分布,给多个国家的养猪业造成了一定的经济损失。鉴于目前国内外尚无可用SVA商品化疫苗和抗病毒药物上市,本研究拟在实验室前期对SVA研究的基础上建立稳定表达绿色荧光蛋白报告基因的重组病毒,为体外高通量筛选具有抗SVA活性药物提供一种简单快速有效的工具。本研究在pEGFP-C1载体EGFP基因末端引入猪捷申病毒1型的2A基因,构建EGFP-P2A融合基因过度质粒,随后分别设计带有同源臂的克隆引物,通过同源重组技术将EGFP-P2A基因插入SVA毒株CH/HeN-2018基因组2A和2B基因间,并经测序鉴定,成功构建重组载体pSVA-EGFP。将pSVA-EGFP转染PK-15细胞,盲传至P2代,获得致使感染细胞病变明显、病变时间稳定的重组SVA荧光毒rCH/HeN-2018-EGFP。通过绿色荧光观察、RT-PCR和生长曲线测定,评估了重组毒株rCH/HeN-2018-EGFP和亲本毒株生长特性。并进一步通过药物细胞毒性试验和病毒感染试验对rCH/HeN-2018-EGFP作为潜在抗SVA药物筛选工具进行评价。结果表明,rCH/HeN-2018-EGFP与亲本毒株wtCH/HeN-2018和rCH/HeN-2018在PK-15细胞中具有相似的生长特性,且遗传稳定,在P10代能够稳定表达绿色荧光,插入的EGFP-P2A基因没有出现突变现象。抗SVA病毒感染试验结果表明,用终浓度20μmol·L^(-1)的姜黄素和110μmol·L^(-1)黄芩苷预处理PK-15细胞2 h,通过观察荧光细胞的数量直观判断两种药物均能够抑制rCH/HeN-2018-EGFP在细胞中的复制,其中黄芩苷抑制效果极显著。随后在亲本毒株wtCH/HeN-2018感染试验进一步证实了黄芩苷对SVA病毒复制抑制的效果。本研究所构建的携带EGFP基因的重组SVA毒株能够高效稳定地表达绿色荧光蛋白,可以作为一种工具报告病毒应用于抗SVA药物和蛋白的筛选过程。; 关键词塞内卡病毒反向遗传操作系统报告病毒绿色荧光蛋白抗病毒药物筛选; Keywords Senecavirus A reverse genetics system reporter virus green fluorescent protein antiviral drug screen; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响被引量：2: 4; 作者李舜李桂珍原耀贤李康健马春全李守军黄良宗马骏; 机构佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东科贸职业学院动物科技学院华南农业大学兽医学院佛科院附属动物医院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期272-280,共9页; 基金广东省重点领域研发计划项目(2019B020217002) 广东省教育厅高校科研项目(2017KTSCX193) 佛山市科技创新项目(2020001004909)。; 文摘 H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)已在中国多地的犬群中流行,是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明,PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关,且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV复制能力及致病力的影响,本研究利用H3N2 CIV的8质粒操作系统,拯救了三株重组H3N2 CIV毒株:PA-X基因表达大小为232个氨基酸多肽的亲本病毒CIV_PA-X_232;对PA编码区第191、192位氨基酸的密码子进行改造,PA-X基因不表达蛋白的重组病毒CIV_PA-X_Knock;对PA+1编码区第232位氨基酸进行突变,PA-X基因表达大小为252个氨基酸多肽的重组病毒CIV_PA-X_252。通过比较3株重组病毒的聚合酶活性,在MDCK细胞中的复制效率及对小鼠致病性的差异,来评价表达不同长度的PA-X基因对H3N2 CIV的影响。结果显示,CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_232,且CIV_PA-X_252的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_Knock;CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock在MDCK细胞中的复制能力显著(P<0.05)强于CIV_PA-X_232;小鼠攻毒试验结果显示,3株重组病毒对小鼠的体重变化无明显影响,且对小鼠无致死性;仅能在感染后第1天的小鼠肺中检测出3株重组病毒的TCID50,且病毒滴度无显著差异;3株重组病毒均能对小鼠肺造成病理损伤,其中,CIV_PA-X_252对小鼠的致病性最强,CIV_PA-X_232次之,CIV_PA-X_Knock对小鼠的致病性最弱。上述结果表明,PA-X基因的延长能够提高H3N2 CIV在MDCK细胞中复制能力和对小鼠肺造成病理损伤的能力,但该变化可能对H3N2 CIV在小鼠肺内的复制能力没有影响。本试验初步探究了PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV的影响,为后续H3N2 CIV致病机制的研究提供了初步的参考。; 关键词犬流感 H3N2 反向遗传操作系统 PA-X 致病性; Keywords canine influenza H3N2 reverse genetic system PA-X pathogenicity; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于DNA-launched的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立	曹宗喜焦培荣谭树义叶保国亓文宝张桂红	《动物医学进展》北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立	魏家阳李丽王国康徐英英曾哲罗青平邵华斌温国元商雨潘兹书	《动物医学进展》北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	表达绿色荧光蛋白重组猪塞内卡病毒的构建及初步应用	张晓战杨磊邓同炜赵攀登彭志锋陈露露郭懿文夏艳勋乔宏兴边传周王增	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2021	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响	李舜李桂珍原耀贤李康健马春全李守军黄良宗马骏	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	2	在线阅读下载PDF 职称材料