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等温链置换扩增反应/CRISPR-Cas12a系统结合反向荧光增强试纸条检测唾液中microRNA-31的研究
1
作者
王佳讯
徐一
+1 位作者
赵爽
宫晓群
《分析测试学报》
2025年第11期2346-2353,共8页
构建了基于核酸等温链置换扩增反应(ISDA)及CRISPR-Cas12a系统协同放大检测microRNA-31(miRNA-31)的方法,以反向荧光增强试纸条(rLFTS)为信号展示平台,实现可视化检测。通过优化ISDA反应的引物序列设计及反应缓冲液,实现了miRNA-31特异...
构建了基于核酸等温链置换扩增反应(ISDA)及CRISPR-Cas12a系统协同放大检测microRNA-31(miRNA-31)的方法,以反向荧光增强试纸条(rLFTS)为信号展示平台,实现可视化检测。通过优化ISDA反应的引物序列设计及反应缓冲液,实现了miRNA-31特异性识别和第一次信号放大,输出双链DNA产物并激活CRISPR-Cas12a切割游离单链DNA(ssDNA)报告分子的反式切割活性,同时阻碍金纳米探针通过结合ssD⁃NA与检测线上的Cy5荧光探针形成夹心结构,进而恢复Cy5荧光,以此作为定量信号,实现了对miRNA-31的高灵敏和高特异性检测。该方法对唾液样本中miRNA-31的检出限低至57.9 amol/L,加标回收率为91.6%~111%,检测结果与定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)定量结果具有良好的一致性,且检测时间仅需90 min。实验结果表明该方法具有操作简单、灵敏度高、检测时间短等优点,能够满足对唾液样本中miR⁃NA-31的超灵敏检测需求。
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关键词
等温链置换扩增
CRISPR-Cas12a
反向荧光增强试纸条
miRNA-31
核酸检测
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职称材料
题名
等温链置换扩增反应/CRISPR-Cas12a系统结合反向荧光增强试纸条检测唾液中microRNA-31的研究
1
作者
王佳讯
徐一
赵爽
宫晓群
机构
天津大学医学部生命科学学院
出处
《分析测试学报》
2025年第11期2346-2353,共8页
基金
国家自然科学基金(U2233206)。
文摘
构建了基于核酸等温链置换扩增反应(ISDA)及CRISPR-Cas12a系统协同放大检测microRNA-31(miRNA-31)的方法,以反向荧光增强试纸条(rLFTS)为信号展示平台,实现可视化检测。通过优化ISDA反应的引物序列设计及反应缓冲液,实现了miRNA-31特异性识别和第一次信号放大,输出双链DNA产物并激活CRISPR-Cas12a切割游离单链DNA(ssDNA)报告分子的反式切割活性,同时阻碍金纳米探针通过结合ssD⁃NA与检测线上的Cy5荧光探针形成夹心结构,进而恢复Cy5荧光,以此作为定量信号,实现了对miRNA-31的高灵敏和高特异性检测。该方法对唾液样本中miRNA-31的检出限低至57.9 amol/L,加标回收率为91.6%~111%,检测结果与定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)定量结果具有良好的一致性,且检测时间仅需90 min。实验结果表明该方法具有操作简单、灵敏度高、检测时间短等优点,能够满足对唾液样本中miR⁃NA-31的超灵敏检测需求。
关键词
等温链置换扩增
CRISPR-Cas12a
反向荧光增强试纸条
miRNA-31
核酸检测
Keywords
isothermal strand displacement amplification
CRISPR-Cas12a
reverse fluorescence enhancement lateral flow test strip
miRNA-31
nucleic acid detection
分类号
O657.3 [理学]
O629.7 [理学—分析化学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
等温链置换扩增反应/CRISPR-Cas12a系统结合反向荧光增强试纸条检测唾液中microRNA-31的研究
王佳讯
徐一
赵爽
宫晓群
《分析测试学报》
2025
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