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PDT对反义bcr-abl寡核苷酸k562细胞转染的影响
1
作者 张林 虞乐华 +1 位作者 吴南顺 许川山 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期73-74,共2页
目的 :体外研究光动力治疗 (PDT)对b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸 (ASO)慢性髓细胞性白血病 (CML)细胞株K5 6 2转染的影响 ,为PDT合并反义技术应用于CML患者治疗提供实验基础。方法 :半导体激光 ,波长 6 5 0nm ,剂量 9J cm2 垂直照射。光... 目的 :体外研究光动力治疗 (PDT)对b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸 (ASO)慢性髓细胞性白血病 (CML)细胞株K5 6 2转染的影响 ,为PDT合并反义技术应用于CML患者治疗提供实验基础。方法 :半导体激光 ,波长 6 5 0nm ,剂量 9J cm2 垂直照射。光敏剂为血卟啉单甲醚(HMME) ,采用体外细胞培养技术 ,流式细胞仪检测PDT实验组与对照组荧光标记的反义bcr-abl寡核苷酸 (ASPO)K5 6 2细胞摄入率及荧光强度。结果 :①PDT可显著提高k5 6 2细胞对反义bcr-abl寡核苷酸的摄入 ,比直接转染增加转染率可达 4-1 0倍。且k5 6 2细胞对反义bcr-abl寡核苷酸的摄入和反义bcr-abl寡核苷酸浓度及作用时间有关。②光敏剂量浓度为 0 .9μmol·L- 1 时转染的效率最高 ,4小时点细胞内平均荧光强度最强 (P <0 .0 1 ) ,且细胞内平均荧光强度随ASPO浓度的增加而增高。但直接转染时 ,6小时才达到高峰。浓度为 0 .6 μmol·L- 1 ～ 0 .9μmol·L- 1 时K5 6 2细胞对荧光物质的摄入即达饱和。结论 :PDT可以增加反义bcr -abl寡核苷酸K5 6 展开更多
关键词 PDT 光动力治疗 反义bcr-abl寡核苷酸 K562细胞 基因治疗
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反义寡核苷酸的作用机制及其在运动系统中的研究进展
2
作者 杨建乐 吴南 《协和医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第4期891-896,共6页
反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)是一类新型的小分子基因靶向药物,可与目的mRNA结合,ASOs以其与目标序列互补的碱基配对方式,对基因进行靶向调控。随着基因测序技术和分子合成技术的不断发展,ASOs在运动系统中的研究和... 反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)是一类新型的小分子基因靶向药物,可与目的mRNA结合,ASOs以其与目标序列互补的碱基配对方式,对基因进行靶向调控。随着基因测序技术和分子合成技术的不断发展,ASOs在运动系统中的研究和应用进一步深入。本文阐述了ASOs在基因沉默和表达调控中的作用机制,以及其在基因治疗方面的应用前景。此外,还介绍了ASOs在运动系统疾病中的研究进展和应用情况,并分析此类药物目前所面临的问题,旨在深化医务人员对ASOs的认识,并为其在生物医学研究和临床中的推广应用提供有益参考。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 基因治疗 临床应用 运动系统
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PDGF-α受体反义寡核苷酸对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响 被引量：10
3
作者 邱梅园 彭燕一 +2 位作者 黄岚珍 张玉明 向秋 《国际眼科杂志》 CAS 2011年第2期229-231,共3页
目的:探讨血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,HRPE)细胞增殖和凋亡的作用。方法:使用阳离子脂质体lipofectamineTM2000将靶向PDGFR-α基因的ASODN转染至细... 目的:探讨血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,HRPE)细胞增殖和凋亡的作用。方法:使用阳离子脂质体lipofectamineTM2000将靶向PDGFR-α基因的ASODN转染至细胞株HRPE细胞,MTT法检测对HRPE细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞;流式细胞仪检测HRPE细胞的周期和凋亡率。结果:PDGFR-αASODN转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:沉默PDGFR-α基因表达可显著抑制HRPE细胞的增殖,并能诱导其凋亡。 展开更多
关键词 PDGF-α受体 反义寡核苷酸 视网膜色素上皮细胞 增殖 凋亡
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硫代反义寡核苷酸及脂质体对培养细胞的毒性作用 被引量：4
4
作者 刘晓波 余学清 +2 位作者 李晓艳 祝胜郎 董秀清 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期143-145,共3页
目的　评价硫代反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,AS ODN)及脂质体对肾小管上皮细胞的毒性作用。方法　针对大鼠骨调素 (osteopontin ,OPN)的cDNA序列设计合成与OPNcDNA序列互补的AS ODN ,其所有碱基均经硫代修饰 ;用不同... 目的　评价硫代反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,AS ODN)及脂质体对肾小管上皮细胞的毒性作用。方法　针对大鼠骨调素 (osteopontin ,OPN)的cDNA序列设计合成与OPNcDNA序列互补的AS ODN ,其所有碱基均经硫代修饰 ;用不同浓度的游离AS ODN或阳离子脂质体 (DOTAP)处理大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK5 2E)不同时间 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法测定细胞的存活率。结果　硫代AS ODN在 0～ 4 0 μmol/L浓度范围内或DOTAP在 0～ 10 0 μg/ml浓度范围内处理的NRK5 2E细胞存活情况良好 ;浓度 4 0 μmol/L的硫代AS ODN或浓度 10 0 μg/ml的DOTAP对NRK5 2E细胞的毒性作用较小 ,72h内无时间依赖性 ;浓度 2 0 0 μg/ml的DOTAP对细胞的毒性具有明显的时间依赖性。结论　正常使用浓度的DOTAP或硫代修饰的AS ODN对大鼠肾小管上皮细胞株均无明显毒性作用 ,建议在转染实验中 ,AS ODN ,DOTAP浓度分别不超过 4 0 μmol/L ,10 0 μg/ml,处理细胞时间小于 72h。 展开更多
关键词 硫代反义寡核苷酸 脂质体 细胞毒性作用 实验研究 cDNA 肾脏疾病 反义治疗
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c-myc反义寡核苷酸对肾癌细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响 被引量：9
5
作者 王子明 种铁 张鹏 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期611-612,623,共3页
目的　观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法　用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果　①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制... 目的　观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法　用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果　①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制肾癌细胞生长的作用 ,12 μmol·L-1c mycASODN组作用 4 8h ,对瘤细胞的生长抑制率为 4 7% ;该生长抑制作用随反义药物剂量的增加而增强 ,同时随作用时间的变化而变化。②流式细胞仪检测证明 ,c mycASODN对肾癌细胞周期的抑制作用在G1期到S期。结论　c 展开更多
关键词 C-MYC 反义寡核苷酸 肾癌 生长抑制 细胞周期 ASODN 细胞培养
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无胶筛分毛细管电泳法测定猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得 被引量：4
6
作者 王秀中 王清清 +4 位作者 王诗鸿 李卫平 宋海峰 鲁丹丹 王升启 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期561-565,共5页
采用两步固相萃取(SPE)法结合无胶筛分毛细管电泳(NGCE)技术建立了猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得的定量分析方法。优化并确定了SPE的相关条件(阴离子交换柱,上样缓冲液pH值为9.0,上样体积及洗脱体积分别为5mL和3mL)和NGCE的分析条... 采用两步固相萃取(SPE)法结合无胶筛分毛细管电泳(NGCE)技术建立了猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得的定量分析方法。优化并确定了SPE的相关条件(阴离子交换柱,上样缓冲液pH值为9.0,上样体积及洗脱体积分别为5mL和3mL)和NGCE的分析条件(灌胶时间为30min,分离电压为24kV)。在优化的条件下,猕猴血浆中癌泰得在1.95～250mg/L范围内呈良好的线性关系,定量限(LOQ)为1.95mg/L。批内准确度为93.38%～100.71%,批内相对标准偏差<11%;批间准确度为89.46%～103.46%,批间相对标准偏差<9%。在不同条件(室温下存放4h;4℃下存放24h;反复冻融(-80℃至室温)2次;-80℃下保存1个月)下癌泰得在猕猴血浆中的稳定性良好。已将该方法成功地应用于癌泰得的猕猴药代动力学研究。 展开更多
关键词 固相萃取 无胶筛分毛细管电泳 反义寡核苷酸 癌泰得 猕猴
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PDGF-α受体反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变 被引量：7
7
作者 蒋姣姣 彭燕一 +1 位作者 黄海 李光辉 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第9期812-815,821,共5页
目的探讨血小板源性生长因子α受体(platelet-derived growth factor receptorα,PDGFR-α)反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的效果。方法选择健康成年有色家兔24只(48眼),右眼分别... 目的探讨血小板源性生长因子α受体(platelet-derived growth factor receptorα,PDGFR-α)反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的效果。方法选择健康成年有色家兔24只(48眼),右眼分别行玻璃体内注射人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,HRPE)稀释液(8只8眼,A组)、1.0与2.0μmol·L-1含PDGFR-α反义寡核苷酸及LipofectamineTM2000的HRPE细胞稀释液(各8只8眼,B组和C组)。左眼分别注射平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS)0.1 mL作为正常对照组。造模后1周、2周、3周、4周间接眼底镜观察PVR程度;处死动物后,进行组织病理学观察眼底改变及免疫组织化学染色观察切片着色情况。结果造模前后正常对照组兔眼玻璃体透明,视网膜结构清楚;造模后28 d,A组兔眼玻璃体内可见粗大增生的条索及视网膜脱离,B组和C组严重度低于A组。在造模后1周、2周,PVR分级在所有组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05);在3周、4周时,B组和C组的PVR分级明显低于A组(均为P<0.05)。造模后4周,B组TRD发生率(50%)和C组TRD发生率(38%)与A组(100%)相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);B组与C组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。组织病理学检查显示:造模后4周正常对照组全层结构清晰,A组兔视网膜内界膜粗糙、断裂或结构不清,各层结构欠清,神经节细胞水肿,出现空泡,数量减少,B组和C组严重度低于A组。免疫组织化学检查显示:A组视网膜全层细胞及增生的纤维组织内呈高强度棕黄色着色(++++),B组呈中等强度棕黄色着色(+++),C组呈较弱棕黄色着色(++);正常对照组视网膜表层神经节细胞、RPE内可见弱棕黄色着色(+)。结论 PDGFR-α反义寡核苷酸可降低PVR形成程度,这可能与下调视网膜细胞中PDGF-α浓度有关。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 PDGF-α受体 反义寡核苷酸 兔
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CTGF反义寡核苷酸对人晶状体上皮细胞转分化的探讨 被引量：4
8
作者 徐国兴 庄华 +4 位作者 徐巍 郭健 王婷婷 谢茂松 白月 《国际眼科杂志》 CAS 2011年第2期216-219,共4页
目的:探讨结缔组织生长因子反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs)合成CTGF与α-SMA表达的影响。方法:测定CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染率;应用CTGF反义寡核苷酸直接转染第3代HLECs进行细胞生长曲线的测定;采用逆转... 目的:探讨结缔组织生长因子反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs)合成CTGF与α-SMA表达的影响。方法:测定CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染率;应用CTGF反义寡核苷酸直接转染第3代HLECs进行细胞生长曲线的测定;采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞CTGF和α-SMAmRNA水平。结果:直接导入法反义寡核苷酸进入较慢,但72h未出现细胞毒性。CTGF-ASON直接导入法培养细胞72h后可见对细胞增殖抑制作用。直接导入法处理48h后,TGF-β1刺激能显著增加CTGF以及α-SMAmRNA的表达,但却可被CTGF-ASON直接导入法所抑制,而错义寡核苷酸却没有这种作用。结论:CTGF反义寡核苷酸直接转染HLECs能抑制TGF-β1诱导的CTGF与α-SMA表达上调,提示阻断CTGF可能是防治后发性白内障的有效手段。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 晶状体上皮细胞 反义寡核苷酸
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低pH毛细管区带电泳法分离寡核苷酸和硫代反义寡核苷酸 被引量：2
9
作者 李茜 陈蓉 +1 位作者 孙毓庆 胡育筑 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期101-106,共6页
在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸（PO-ODNs）及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸（PS-ODNs）药物“癌泰得”系列样品（18～20mers）进行分离，并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电... 在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸（PO-ODNs）及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸（PS-ODNs）药物“癌泰得”系列样品（18～20mers）进行分离，并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电压、温度等因素对样品单碱基分离的影响。其中缓冲溶液的pH对分离起决定性的作用，而添加剂尿素的加入显著提高了PS-ODNs样品的分离度。结果表明，采用末涂层弹性石英毛细管（50μm，总长49．0cm，有效长度40．7cm），以50mmol／L磷酸二氢钠-磷酸（pH2．24）-7 mol／L尿素为缓冲溶液，压力进样（2kPa×10s），负极进样，正极检测，在分离电压-20kV、柱温25℃、检测波长260nm条件下，可实现寡核岢酸及硫代反义寡核苷酸混合样品的单碱基分离。PO—ODNs的18～19mers及19～20mers样品的平均分离度分别为4．68，3．20；PS—ODNs的18～19mers及19～20mers样品的平均分离度分别为1．23及0．81．该法操作简单，重现性好，可为反义寡核苷酸药物的分析提供借鉴． 展开更多
关键词 低PH 毛细管区带电泳法 寡核苷酸 硫代反义寡核苷酸
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^(125)I标记免疫球蛋白重链V1家族框架区反义寡核苷酸 被引量：5
10
作者 王荣福 邱峰 张春丽 《同位素》 CAS 2004年第2期65-68,共4页
用DNA合成仪将含酪胺的单体连接在18聚体寡核苷酸的5′端,并用氯胺-T法进行125I标记。该标记方法的标记率为80.7%,标记物放化纯度为98.7%,体外放置24h放化纯度仍高于90%。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示各时间点的条带与未保温的对照组平... 用DNA合成仪将含酪胺的单体连接在18聚体寡核苷酸的5′端,并用氯胺-T法进行125I标记。该标记方法的标记率为80.7%,标记物放化纯度为98.7%,体外放置24h放化纯度仍高于90%。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示各时间点的条带与未保温的对照组平行,均未见异常条带。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 ^125I 标记
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Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究 被引量：3
11
作者 王晓丽 田美丽 +4 位作者 王梅 朱红梅 杨晓娟 王亚利 宋天保 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期342-343,376,共3页
目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑... 目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果　cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论　CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 CYCLIN D1 反义寡核苷酸 人黑色素瘤 细胞周期 细胞增殖 抑制作用
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Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株IL-6/STAT3信号通路的影响和意义 被引量：9
12
作者 孙艳 王成书 王文莉 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期53-57,共5页
目的通过分析人卵巢癌细胞株转染Survivin反义寡核苷酸(ASODN)后IL-6/STAT3信号通路及其下游相关癌基因的表达以及其侵袭能力的改变,探讨Survivin ASODN在抑制人卵巢癌细胞转移中的可能作用、机制和临床价值。方法脂质体(LipofectamineT... 目的通过分析人卵巢癌细胞株转染Survivin反义寡核苷酸(ASODN)后IL-6/STAT3信号通路及其下游相关癌基因的表达以及其侵袭能力的改变,探讨Survivin ASODN在抑制人卵巢癌细胞转移中的可能作用、机制和临床价值。方法脂质体(LipofectamineTM2000)介导Survivin ASODN转染人卵巢癌SKOV3细胞株(实验组),同时设空脂质体对照,Transwell小室检测细胞株侵袭能力的改变,荧光定量PCR检测两组细胞株中白细胞介素6(IL-6)、信号转导与活化因子3(STAT3)、Survivin、血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达,Western blot检测IL-6、STAT3、磷酸化的信号转导与活化因子3(p-STAT3)、Survivin、VEGF-A蛋白的表达。结果实验组细胞株中IL-6、STAT3、Survivin、VEGF基因表达均较对照组明显下调(P<0.05);实验组细胞株中IL-6、STAT 3、p-STAT 3、Survivin、VEGF-A蛋白表达均较对照组明显下调(P<0.05)。实验组细胞株侵袭能力较对照组明显下降(P<0.01)。结论 ASODN靶向抑制Survivin可有效降低人卵巢癌细胞侵袭转移能力,抑制IL-6/STAT3信号通路及其下游相关致癌基因的表达活性。Survivin ASODN可能在防治卵巢癌复发和转移治疗中有临床价值。 展开更多
关键词 SURVIVIN反义寡核苷酸 卵巢癌 转移 IL-6/STAT3信号通路 血管内皮生长因子(VEGF)
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tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达△ 被引量：7
13
作者 胡义珍 张海江 +2 位作者 熊新春 曹阳 席祖莲 《眼科新进展》 CAS 2006年第3期180-183,共4页
目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,... 目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性。方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化。结果ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.0695±0.0009、1.0662±0.0007,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.0185±0.0024、1.0167±0.0012;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异(P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN22组间无显著性差异(P>0.05)。结论tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用。 展开更多
关键词 组织型谷氨酰胺转移酶 反义寡核苷酸 小梁细胞 开角型青光眼
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FasL反义寡核苷酸逆转肝癌细胞免疫逃逸的实验研究 被引量：6
14
作者 张娇 刘倩 +1 位作者 王杰 毛海婷 《中国现代普通外科进展》 CAS 2006年第3期147-150,共4页
目的:研究FasL反义寡核苷酸对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用。方法:用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas、FasL的表达及Jurkat细胞表面Fas的表达;用HepG2.2.15细胞与Jurkat细胞共培养方法,研究FasL诱导T细胞凋... 目的:研究FasL反义寡核苷酸对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用。方法:用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas、FasL的表达及Jurkat细胞表面Fas的表达;用HepG2.2.15细胞与Jurkat细胞共培养方法,研究FasL诱导T细胞凋亡的功能;用脂质体介导法转导FasL反义寡核苷酸入肝癌细胞,并通过检测细胞表面FasL表达、RTPCR及细胞共培养方法研究FasL反义寡核苷酸转导对肝癌细胞免疫抑制的逆转作用。结果:①HepG2.2.15细胞低表达Fas,却表达有功能的FasL,与高表达Fas的Jurkat细胞共培养可诱导后者凋亡;②肝癌细胞转入FasL反义寡核苷酸后,FasLmRNA降低;细胞表面FasL表达下降;与Jurkat细胞共培养,Jurkat细胞的凋亡率下降。结论:肝癌细胞表达的FasL可抑制T细胞的免疫功能,是肝癌细胞免疫逃逸的重要机制之一;FasL反义寡核苷酸转导可以逆转肝癌细胞的免疫抑制作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 FAS/FASL 免疫逃逸 寡核苷酸类 反义
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胆囊癌细胞中转染Survivin和bcl-2反义寡核苷酸后凋亡作用的对比研究 被引量：4
15
作者 冯立民 姜希宏 +2 位作者 乌新林 苏永红 徐克森 《中国现代普通外科进展》 CAS 2005年第2期87-89,共3页
目的:比较转染Survivin、bcl -2反义寡核苷酸(ASODN)对胆囊癌细胞系 GBC SD的凋亡促进作用。方法:设计并合成特异性靶向 Survivin及 bcl- 2 的 ASODN。胆囊癌细胞分为 5 组:空白对照组、Survivin ASODN转染组、bcl- 2 ASODN转染组、Surv... 目的:比较转染Survivin、bcl -2反义寡核苷酸(ASODN)对胆囊癌细胞系 GBC SD的凋亡促进作用。方法:设计并合成特异性靶向 Survivin及 bcl- 2 的 ASODN。胆囊癌细胞分为 5 组:空白对照组、Survivin ASODN转染组、bcl- 2 ASODN转染组、Survivin SODN转染组和bcl -2 SODN转染组,转染24h后,采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测Survivin基因、bcl- 2基因表达的变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测 ASODN对细胞的生长抑制率。结果:转染 Survivin及bcl 2 ASODN后,胆囊癌细胞内Survivin基因表达下调 47.8%,bcl- 2 基因表达下调 52.4%;细胞凋亡率分别为(11.4±3. 9)%、(7. 3±3. 2)%,与对照组差异有统计学意义(P< 0. 01)。而转染 SurvivinASODN组及bc1 2ASODN组相比差异也有显著性(P<0.05)。两转染组相对于空白对照组的生长抑制率分别为54.3%、41.6%。结论:Survivin和bcl 2反义寡核苷酸均可有效的抑制Survivin及bc1- 2基因的表达,从而诱导胆囊癌细胞的凋亡,两者相比,Survivin反义寡核苷酸可更为有效地诱导胆囊癌细胞的凋亡。 展开更多
关键词 胆囊肿瘤 基因 Survivin 基因 BCL-2 寡核苷酸类 反义 转染
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PBCA纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响 被引量：2
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作者 付春景 张艳艳 +3 位作者 黄幼田 杨洪艳 付旭东 张振中 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第27期9-10,共2页
目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(PBCA-NP s)作为端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(A-SODN)载体,转染肺癌A 549细胞,观察其对该细胞周期和凋亡的影响。方法PBCA-NP s携带hTERT A SODN转染A 549细胞后,绘制细胞生长曲线表达细胞生长状态... 目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(PBCA-NP s)作为端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(A-SODN)载体,转染肺癌A 549细胞,观察其对该细胞周期和凋亡的影响。方法PBCA-NP s携带hTERT A SODN转染A 549细胞后,绘制细胞生长曲线表达细胞生长状态的变化;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果A SODN转染后A 549细胞增殖减慢;FCM检测结果显示:A SODN转染后细胞周期变化明显,细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显增加。结论hTERT A SODN能有效改变A 549细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶 反义寡核苷酸 细胞周期 细胞凋亡 肺肿瘤
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PCNA反义寡核苷酸抑制人肝癌细胞体外增殖的研究 被引量：4
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作者 朱金海 黄建富 +2 位作者 陈燕凌 陈大良 殷凤峙 《肝胆外科杂志》 2002年第1期65-68,共4页
目的　观察增殖细胞核抗原 (PCNA)反义寡核苷酸对人肝癌细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变。方法　MTT法、集落形成试验观察 PCNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生长抑制 ,免疫组化技术检测 PCNA的蛋白表达 ,流式细胞仪分析细胞周期... 目的　观察增殖细胞核抗原 (PCNA)反义寡核苷酸对人肝癌细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变。方法　MTT法、集落形成试验观察 PCNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生长抑制 ,免疫组化技术检测 PCNA的蛋白表达 ,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果　 PCNA反义核酸作用后的肝癌细胞生长明显受到抑制 ,抑制效应于作用后 48h最为明显 ,并于 72 h后逐渐减弱。集落形成率明显下降。 PCNA蛋白表达明显下降。细胞周期中 S期细胞数明显减少。结论　 展开更多
关键词 反义寡核苷酸类 增殖细胞核抗原 肝癌 细胞增殖
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反义寡核苷酸抑制人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及其蛋白的表达 被引量：2
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作者 梁秦龙 王梅 +1 位作者 王冰 赵继元 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期570-572,共3页
目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法人工合成survivin ASODN,脂质体介导转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化SP法检测survivin mRNA及其蛋白表达的变化。... 目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法人工合成survivin ASODN,脂质体介导转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化SP法检测survivin mRNA及其蛋白表达的变化。结果转染24 h后,ASODN组A375细胞survivin mRNA表达较对照组显著下调(P<0.01);转染48 h后,与对照组相比,ASODN组细胞的survivin蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论Survivin ASODN可下调A375细胞survivin mRNA的表达和survivin蛋白水平。 展开更多
关键词 SURVIVIN 恶性黑色素瘤 反义寡核苷酸
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CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响 被引量：3
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作者 李中国 王林农 张虹 《眼科新进展》 CAS 2007年第11期821-823,共3页
目的观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼发病过程中可能的作用。方法采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞。MTT法观察C... 目的观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼发病过程中可能的作用。方法采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞。MTT法观察CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞增生的影响。流式细胞仪检测CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞凋亡的影响。结果3种浓度的CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞的增生起抑制作用且呈浓度依赖性,浓度越高抑制作用越强,但对小梁细胞的凋亡起促进作用,浓度越高促凋亡作用越明显。结论CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞增生作用受到抑制,小梁细胞的凋亡增加。黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞的增生与凋亡过程参与了原发性开角型青光眼发病过程。 展开更多
关键词 小梁细胞 CD44 反义寡核苷酸 增生 凋亡
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STAT3反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响 被引量：2
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作者 孙兆翎 韩萍 +1 位作者 吴维光 唐雅娟 《山东医药》 CAS 2012年第32期85-87,F0003,共4页
目的观察转染信号转导与转录激活因子3(STAT3)的反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭功能的影响。方法针对人STAT3的基因序列设计并合成反义寡核苷酸,用阳离子脂质体介导转染人宫颈癌He-La细胞。应用RT-PCR和Western blot法分别检... 目的观察转染信号转导与转录激活因子3(STAT3)的反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭功能的影响。方法针对人STAT3的基因序列设计并合成反义寡核苷酸,用阳离子脂质体介导转染人宫颈癌He-La细胞。应用RT-PCR和Western blot法分别检测STAT3基因mRNA及蛋白表达水平,软琼脂集落培养检测细胞的定植功能,体外侵袭实验检测HeLa细胞的侵袭能力。结果转染STAT3反义寡核苷酸HeLa细胞(HeLaSTAT3-ASODN)STAT3基因的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(HeLaSTAT3-SODN)和正义组(HeLa),P<0.05;各组细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数分别为:HeLa组(74.31±7.62)、(44.85±6.26)个,HeLaSTAT3-SODN组(71.57±6.92)、(45.46±6.79)个,HeLaSTAT3-ASODN组(45.18±7.69)、(22.41±5.98)个。与HeLa组、HeLaSTAT3-SODN组比较,HeLaSTAT3-ASODN组克隆形成数和透膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 STAT3基因特异反义寡核苷酸可通过下调STAT3基因表达抑制细胞的定植和侵袭。 展开更多
关键词 人宫颈癌HELA细胞 STAT3基因 反义寡核苷酸 定植 侵袭
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