脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对K562细胞α珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响 被引量：7

1

作者 刘容容 赖永榕 马劼 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期1065-1069,共5页

本研究查明脂质体转染反义脱氧寡核苷酸(ASON)对K562细胞α珠蛋白基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响,探讨基因调控治疗β地中海贫血的新思路。设计合成靶向α珠蛋白基因的ASON,并与正义寡核苷酸(SON)和空白对照进行比较。采用脂质... 本研究查明脂质体转染反义脱氧寡核苷酸(ASON)对K562细胞α珠蛋白基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响,探讨基因调控治疗β地中海贫血的新思路。设计合成靶向α珠蛋白基因的ASON,并与正义寡核苷酸(SON)和空白对照进行比较。采用脂质体转染技术将ASON、SON与K562细胞共同培养,用荧光显微术、流式细胞术检测脂质体转染效率,用实时荧光定量RT-PCR法检测K562细胞中α珠蛋白基因表达情况,并通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法观察脂质体转染ASON技术对细胞增殖的影响。结果表明:脂质体转染效率在ASON作用24h达到最高,脂质体转染ASON组的α珠蛋白基因表达水平显著低于SON和空白对照组(p<0.01),并对细胞的增殖有明显的抑制作用,上述效应呈浓度依赖性。结论:脂质体转染ASON能特异性的抑制K562细胞中α珠蛋白基因表达,可能会成为β地中海贫血基因治疗的一个新靶点。 展开更多

关键词 Α珠蛋白基因 脂质体转染 反义脱氧寡核苷酸 K562细胞 细胞增殖 地中海贫血

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c-fos反义脱氧寡核苷酸阻断VIP诱导的VEGF在小细胞肺癌细胞中表达 被引量：2

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作者 赵正源 程庆书 +2 位作者 李小飞 王小平 刘锟 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第4期312-315,共4页

背景与目的血管活性肠肽(VIP)对多种肿瘤细胞的生长具有促进作用,但其作用机制尚有许多未解之处。本研究旨在通过抑制c-fos基因表达,探讨其表达产物是否参与VIP对小细胞肺癌(SCLC)细胞中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的调节作用。方... 背景与目的血管活性肠肽(VIP)对多种肿瘤细胞的生长具有促进作用,但其作用机制尚有许多未解之处。本研究旨在通过抑制c-fos基因表达,探讨其表达产物是否参与VIP对小细胞肺癌(SCLC)细胞中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的调节作用。方法应用RT-PCR技术检测VIP作用下SCLC细胞系H446中c-fos及VEGF基因表达水平,以c-fos反义脱氧寡核苷酸(ASO)封闭c-fos基因表达,检测不同c-fos表达水平条件下VIP对VEGF表达的调节作用。结果VIP增强了c-fos及VEGF在H446细胞中的表达。c-fosmRNA的表达在VIP作用2h和4h时达到高峰,显著高于VIP作用0h时(P<0.01)。在VIP作用8h和16h时,VEGF mRNA的表达水平达到高峰,显著高于VIP作用0h时(P<0.01)。c-fosASO能明显反转VIP诱导的VEGF的表达上调(P<0.01)。结论VIP可能通过增强转录因子c-fos的表达,进而促进VEGF mRNA在肺癌细胞中的表达和分泌,促进肺癌新生血管的生成,参与肿瘤的生长。 展开更多

关键词 小细胞肺癌 血管活性肠肽 C-FOS 血管内皮生长因子 反义脱氧寡核苷酸 血管形成

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体外观察反义脱氧寡核苷酸对变形链球菌蔗糖依赖性粘附的影响

3

作者 郭青玉 吴军正 +3 位作者 肖刚 李睿 朱秀丽 温德升 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期104-107,共4页

目的：评估gtfB特异反义脱氧寡核苷酸对变形链球菌蔗糖依赖性粘附能力的影响。方法：合成针对gtfB709—726bp及3479—3497bp的反义脱氧寡核苷酸并进行硫化。将其分别自然转入变形链球菌细胞内，观察各组变形链球菌对唾液包被羟磷灰石的... 目的：评估gtfB特异反义脱氧寡核苷酸对变形链球菌蔗糖依赖性粘附能力的影响。方法：合成针对gtfB709—726bp及3479—3497bp的反义脱氧寡核苷酸并进行硫化。将其分别自然转入变形链球菌细胞内，观察各组变形链球菌对唾液包被羟磷灰石的蔗糖依赖性粘附，结晶紫染色，无水乙醇脱色，酶标仪于620nm处读取吸光度值。结果：培养基中加入反义脱氧寡核苷酸的变形链球菌蔗糖依赖性粘附明显低于对照组（P〈0．01），PS-ODN1和PS-ODN2分别可减少31．4％和41．8％细菌粘附。结论：反义脱氧寡核苷酸可以抑制变形链球菌蔗糖依赖性粘附，有可能将其开发成龋病预防及病因研究中的新型试剂。 展开更多

关键词 龋病 变形链球菌 反义脱氧寡核苷酸 蔗糖依赖性粘附

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5′-荧光素标记的RelA反义脱氧寡核苷酸在人白血病细胞HL-60中的分布及稳定性

4

作者 曹文静 张瑶珍 +1 位作者 邓金牛 李登举 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期37-38,42,共3页

目的　比较修饰型及未修饰型 Rel A反义脱氧寡核苷酸 ( AS- ODN)在人白血病细胞 HL- 60中的分布及稳定性。方法　将荧光素 ( FAM)标记的硫代磷酸酯修饰型及未修饰型 AS- ODN经脂质体介导或直接转染人 HL- 60细胞 ,应用荧光显微镜及流式... 目的　比较修饰型及未修饰型 Rel A反义脱氧寡核苷酸 ( AS- ODN)在人白血病细胞 HL- 60中的分布及稳定性。方法　将荧光素 ( FAM)标记的硫代磷酸酯修饰型及未修饰型 AS- ODN经脂质体介导或直接转染人 HL- 60细胞 ,应用荧光显微镜及流式细胞仪观察细胞内荧光的时相分布。结果　发现 1μm ol/ L 修饰型 AS- ODN进入细胞后 ,细胞内荧光强度 6h达到高峰。在有脂质体存在时 ,细胞内荧光明显增强 ,12 h后荧光减弱并逐渐消失 ;而 AS- ODN直接转染细胞 ,细胞内特别是核内荧光强度明显比脂质体组弱。未修饰型 AS- ODN直接或经脂质体介导转染 ,细胞内荧光强度均很弱 ,滞留时间不超过 4h。结论　脂质体可以提高细胞对 AS- ODN的摄取及核聚积 ,而硫代磷酸酯修饰型 展开更多

关键词 荧光素 反义脱氧寡核苷酸 硫代磷酸酯修饰 细胞内稳定性

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聚酰胺树形分子递送survivin反义脱氧寡核苷酸抑制裸鼠肝癌移植瘤 被引量：4

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作者 姚航 岳隧岩 +3 位作者 金跃明 潘碧峰 高峰 崔大祥 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第1期36-40,共5页

目的:探讨聚酰胺-胺型(polyamidoamine,PAMAM)树枝状高聚合物介导survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligodeoxynucleotide,survivin-asODN)对肝癌裸鼠移植瘤及其微血管形成的抑制作用。方法:以人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下注射... 目的:探讨聚酰胺-胺型(polyamidoamine,PAMAM)树枝状高聚合物介导survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligodeoxynucleotide,survivin-asODN)对肝癌裸鼠移植瘤及其微血管形成的抑制作用。方法:以人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下注射建立肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。将PAMAM和阳离子脂质体分别与survivin-asODN混合得到载反义基因复合物,透射电镜观察复合物的形态、粒径,zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位,离心法和紫外分光分度仪测定复合物的的包封率和体外DNA释放速度。将两种反义基因复合物分别注射裸鼠移植瘤体内,观察两组移植瘤大小;免疫组化方法检测瘤组织中微血管密度(microvesseldensity,MVD);Westernblotting检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达。结果:PAMAM-survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径[(64.9±9.6)vs(193.9±32.2)nm,P<0.01],而zeta电位高于脂质体-survivin-asODN复合物[(37.7±3.8)vs(22.6±2.2)mV,P<0.05];基因包封率两组比较无显著差异;PAMAM反义基因复合物对DNA持续释放达14d,但脂质体复合物只持续5d。PAMAM-survivin-asODN复合物治疗组裸鼠移植瘤组织survivin蛋白表达低于脂质体-survivin-asODN复合物组[(26.8±5.6)vs(37.0±5.9),P<0.05];PAMAM-survivin-asODN复合物治疗组移植瘤重量低于脂质体-survivin-asODN复合物组[(124.8±25.2)vs(210.2±33.6)mg,P<0.05],其微血管密度低于脂质体-survivin-asODN复合物组[(2.8±1.5)vs(6.4±2.7),P<0.05]。结论:PAMAM能将survivin-asODN高效递送到肝癌移植瘤细胞,降低瘤组织中survivin蛋白的表达,可通过抑制移植瘤微血管的形成来抑制癌细胞的生长。 展开更多

关键词 聚酰胺-胺型树枝状高聚合物 SURVIVIN 反义脱氧寡核苷酸 肝癌 抗微血管形成

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周期蛋白G1反义硫代脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控 被引量：2

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作者 贾晋松 徐世荣 +5 位作者 贾存荣 马劼 哈森 姚银荣 王毅 石翠英 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期48-54,共7页

为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白 (cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对HL 6 0细胞增殖调控的作用 ,用针对cyclinG1mRNA 5′端编码区起始密码子 (ATG/AUG)的ASON ,通过脂质体导入HL 6 0细胞共培养后 ,用免疫组织化学法和RT PCR分别检测c... 为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白 (cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对HL 6 0细胞增殖调控的作用 ,用针对cyclinG1mRNA 5′端编码区起始密码子 (ATG/AUG)的ASON ,通过脂质体导入HL 6 0细胞共培养后 ,用免疫组织化学法和RT PCR分别检测cyclinG1和mRNA水平的表达 ,用电镜、细胞原位凋亡检测法 (POD)、流式细胞术(FCM)及DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡。结果表明 :cyclinG1ASON组与SON及空白对照组相比 ,ASON能特异地抑制cyclinG1及mRNA水平的表达 ,当ASON的浓度达到一定程度时 ,HL 6 0细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制 ,出现细胞凋亡 ,并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论 :cyclinG1的特异反义脱氧寡核苷酸能封闭其蛋白及mRNA水平的表达 ,对白血病细胞的增殖有抑制作用 ,并可促使细胞凋亡 ,且有浓度依赖性。 展开更多

关键词 细胞周期蛋白G1 反义脱氧寡核苷酸 脂质体 白血病

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VEGF硫代反义寡核苷酸抑制U937细胞VEGF的表达 被引量：3

7

作者 童允洁 张敏 +1 位作者 邹萍 郭荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期151-153,共3页

为研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子反义脱氧寡核苷酸 (VEGF ASODN)对急性单核细胞白血病细胞系U937VEGF表达的影响 ,将终浓度分别为 10 ,2 0 ,30 μmol/L的VEGF ASODN和错义序列与U937细胞分别孵育 2 4 ,4 8,72小时 ,采用RT PCR检... 为研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子反义脱氧寡核苷酸 (VEGF ASODN)对急性单核细胞白血病细胞系U937VEGF表达的影响 ,将终浓度分别为 10 ,2 0 ,30 μmol/L的VEGF ASODN和错义序列与U937细胞分别孵育 2 4 ,4 8,72小时 ,采用RT PCR检测VEGFmRNA的表达 ,Westernblot检测VEGF蛋白的表达。结果显示 ,VEGF ASODN对U937细胞的VEGF的表达有明显的抑制作用 ,与错义序列组和空白对照组相比有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;错义序列组与空白对照组VEGF的表达无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :VEGFASODN可下调白血病细胞株U937的VEGFmRNA和蛋白的表达水平。 展开更多

关键词 VEGF 反义脱氧寡核苷酸 U937细胞

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舒拉明联合bcl-2基因反义寡核苷酸对前列腺癌细胞增殖的影响 被引量：1

8

作者 张勇 陈维真 +1 位作者 梁昌盛 陈炜 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第B03期37-39,共3页

【目的】探讨舒拉明联合bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸对前列腺癌细胞（LNCaP细胞）增殖的影响。【方法】采用^3H-TdR掺入法观察舒拉明和反义寡脱氧核苷酸对LNCaP细胞增殖的影响，流式细胞荧光免疫法检测bcl-2基因表达，放射免疫分析法检测... 【目的】探讨舒拉明联合bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸对前列腺癌细胞（LNCaP细胞）增殖的影响。【方法】采用^3H-TdR掺入法观察舒拉明和反义寡脱氧核苷酸对LNCaP细胞增殖的影响，流式细胞荧光免疫法检测bcl-2基因表达，放射免疫分析法检测PSA表达。【结果】舒拉明和反义寡脱氧核苷酸单独作用LNCaP细胞后，细胞^3H-TdR掺入率、bcl-2蛋白表达以及PSA水平明显低于对照组，呈现剂量依赖效应，二者联合应用抑制作用明显增强。【结论】舒拉明和bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合应用，可明显增强对前列腺癌细胞增殖的抑制，减少舒拉明用药剂量。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 癌 脱氧寡核苷酸类 反义 基因 BCL-2 舒拉明

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SPIO标记的反义探针磁学性能检测 被引量：1

9

作者 文明 柏玮 +4 位作者 李必波 韩忠 陆云峰 李少林 杨学恒 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第8期956-960,共5页

采用化学交联法制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的c-erbB2癌基因反义脱氧寡核苷酸探针,经过1.5T磁共振仪测定,其T2弛豫率为0.156×106mol-1.s-1;振动样品磁强计测定出探针的磁化强度为69.4238 emu/g Fe,比饱和磁化强度68.4134 emu/g,... 采用化学交联法制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的c-erbB2癌基因反义脱氧寡核苷酸探针,经过1.5T磁共振仪测定,其T2弛豫率为0.156×106mol-1.s-1;振动样品磁强计测定出探针的磁化强度为69.4238 emu/g Fe,比饱和磁化强度68.4134 emu/g,比剩余磁化强度为30.3541 emu/g,剩磁为19.7345 Gs。为了检测探针的有效性,进一步使用该探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br-3肿瘤细胞株,同时使用正义和无义探针转染SK-Br-3肿瘤细胞株、反义探针转染正常小鼠肝细胞作对照,结果发现反义探针能够特异性进入SK-Br-3肿瘤细胞内,且能明显改善该细胞的磁学参数并降低磁共振扫描下的信号强度。 展开更多

关键词 分子影像学 反义脱氧寡核苷酸 氧化铁钠米 磁学参数 磁共振 细胞成像

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用反义核酸研究正常造血的基因调控

10

作者 王玉芝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期10-14,共5页

原癌基因是所有细胞都存在的基因组份。在正常情况下它们的表达调节着细胞增殖分化功能。这些基因产物往往是细胞因子本身,或是细胞因子受体,还可能是参加细胞代谢的酶。哺乳动物细胞基因转移技术的建立、显微注射、电击导入及逆转录病... 原癌基因是所有细胞都存在的基因组份。在正常情况下它们的表达调节着细胞增殖分化功能。这些基因产物往往是细胞因子本身,或是细胞因子受体,还可能是参加细胞代谢的酶。哺乳动物细胞基因转移技术的建立、显微注射、电击导入及逆转录病毒载体感染等方法可以有效地将外源性基因导入到细胞内。这种随机整合的方法会影响整合基因和邻近正常基因的功能,由于整合位点不适合而使导入基因不表达或难以控制。 展开更多

关键词 反义核酸技术 造血祖细胞 反义寡核苷酸 正常造血 红系祖细胞 原癌基因 细胞周期 mRNA表达 基因表达 反义脱氧寡核苷酸

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小鼠MD-1表达的影响因素及其在移植排斥反应中的作用 被引量：1

11

作者 张鑫 陈忠华(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期444-448,共5页

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留... 目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留取标本检测脾细胞MD-1表达水平和增殖反应强度、血清IL-2和IL-10水平以及皮肤移植物组织学改变,并记录移植物存活时间。结果:CsA、MMF和AS-ODNs处理能减少脾脏MD-1表达阳性细胞数、降低脾细胞增殖反应强度、下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506与CsA和MMF处理结果的差异在于其对血清IL-10水平无明显影响;SRL处理仅能减低脾细胞增殖反应强度和延长皮肤移植物MST,对MD-1表达及IL-2与IL-10分泌无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论:CsA、FK506、MMF和AS-ODNs处理均能有效抑制小鼠MD-1的表达。免疫抑制剂干预MD-1表达的作用与血清IL-2水平下调有关。MD-1通过影响淋巴细胞增殖反应和血清IL-2、IL-10水平,在移植排斥反应中发挥重要作用。 展开更多

关键词 MD-1 免疫抑制剂 反义脱氧寡核苷酸

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封闭缺氧诱导因子作用位点对人肝癌细胞生长抑制的研究

12

作者 丁磊 陈孝平 王海平 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期750-753,共4页

目的探讨反基因技术封闭缺氧诱导因子(HIF-1α)作用位点对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的抑制作用及对细胞生长的影响。方法针对VEGF启动子区HIF-1α作用位点设计反义脱氧寡核苷酸(ODN),并以不同浓度分别转染肝癌细胞。用免疫组化SAB... 目的探讨反基因技术封闭缺氧诱导因子(HIF-1α)作用位点对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的抑制作用及对细胞生长的影响。方法针对VEGF启动子区HIF-1α作用位点设计反义脱氧寡核苷酸(ODN),并以不同浓度分别转染肝癌细胞。用免疫组化SABC法、Western blot和RT-PCR技术检测肝癌细胞中VEGF mRNA和蛋白表达;同时用经转染后的肝癌细胞培养上清液刺激常规培养的人脐静脉内皮细胞和肝癌细胞,用MTT法观察细胞生长情况。结果免疫组化结果显示不同浓度正、反义ODN与肝癌细胞共同孵育48h后,VEGF蛋白的表达在正义ODN组与空白对照组间差异无显著性意义(P>0.05);反义ODN各浓度组与空白组比较差异均有显著性意义(P<0.05),在浓度为10μmol/L时差异有极显著性意义(P<0.01)。Western blot和RT-PCR结果显示在浓度为10μmol/L作用48h时,正义ODN组积分灰度值和RNA相对比值分别为59743.2±10412.5和0.783±0.032,反义ODN组分别为38694.5±10925.1和0.468±0.015,两组间差异有极显著性意义(P<0.01)。反义ODN对肝癌细胞生长抑制效应呈浓度依赖性。结论针对VEGF的反基因技术能够抑制肝癌细胞的VEGF表达并抑制细胞生长,有望成为抗肝癌的新一代基因治疗手段。 展开更多

关键词 反义脱氧寡核苷酸 肝癌细胞 血管内皮生长因子 缺氧诱导因子

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bcl-2基因和Fas基因与小儿急性淋巴细胞白血病细胞凋亡的关系及其临床意义

13

作者 殷慧君 王昭 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期129-132,共4页

研究小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞Bcl-2蛋白表达以及特异硫代反义脱氧寡核苷酸(ASON)和抗Fas单克隆抗体(anti-Fas McAb)在诱导白血病细胞凋亡中的作用,采用免疫组织化学法和Western blot法。结果显示,小儿ALL细胞Bcl-2蛋白表达量明... 研究小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞Bcl-2蛋白表达以及特异硫代反义脱氧寡核苷酸(ASON)和抗Fas单克隆抗体(anti-Fas McAb)在诱导白血病细胞凋亡中的作用,采用免疫组织化学法和Western blot法。结果显示,小儿ALL细胞Bcl-2蛋白表达量明显高于正常,ASON和anti-Fas McAb诱使白血病细胞凋亡,且Bcl-2蛋白高表达的白血病患者比bcl-2低表达者对FasMcAb更敏感。结论提示,ASON和anti-Fas McAb可诱导ALL细胞凋亡,这为ALL临床治疗展示了新方向,也为白血病患者自体骨髓移植,体外纯净骨髓或周边血液提供理论依据和实验技术。 展开更多

关键词 BCL-2基因 FAS基因 细胞凋亡 急性淋巴细胞白血病 反义脱氧寡核苷酸

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