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脂质体介导的c-myc反义硫代寡核苷酸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡
1
作者 范钰 林庚金 +3 位作者 钱立平 许祖德 李华 徐康 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期26-29,共4页
目的　探讨c myc反义硫代寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide ,APSODN)对胃癌SGC 790 1细胞凋亡的影响。方法　人工合成c mycAPSODN ,通过脂质体转染法处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,于不同时间收集细胞 ,采用Nor... 目的　探讨c myc反义硫代寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide ,APSODN)对胃癌SGC 790 1细胞凋亡的影响。方法　人工合成c mycAPSODN ,通过脂质体转染法处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,于不同时间收集细胞 ,采用Northernblot、Westernblot检测c myc基因mRNA及蛋白表达 ,采用TUNEL方法检测凋亡指数 ,以流式细胞仪检测细胞周期。结果　TUNEL显示c mycAPSODN可诱导胃癌SGC 790 1细胞凋亡 ,并与APSODN的浓度和处理时间有关。流式细胞仪检测显示细胞阻滞于G0 /G1期。结论　c mycAP SODN可诱导胃癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 胃癌细胞 C-MYC 反义硫代寡核苷酸 脂质体 细胞凋亡 SGC-7901细胞 APSODN
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bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞的化疗敏感性
2
作者 黄红亮 王宏 +3 位作者 向军俭 唐勇 邓宁 杨红宇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第5期461-465,共5页
目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞对多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂的敏感性。方法:设计、合成bFGF反义脱氧寡核苷酸(AS),用聚乙烯亚胺(jetPEI)介导bFGF反义脱氧寡核苷酸转染入Hep2细胞;半定量RT- PCR测定bFGF反义硫代寡... 目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞对多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂的敏感性。方法:设计、合成bFGF反义脱氧寡核苷酸(AS),用聚乙烯亚胺(jetPEI)介导bFGF反义脱氧寡核苷酸转染入Hep2细胞;半定量RT- PCR测定bFGF反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bFGF mRNA水平;免疫细胞化学法检测Hep2细胞转染前后bEGF的表达水平;FACS分析bFGF反义硫代寡核苷酸诱导细胞的凋亡;MTT法检测bEGF反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖。结果:bFGF反义硫代寡核苷酸呈剂量与时间依赖抑制Hep2细胞增殖,最高抑制率为25.5%;被转染细胞bFGF mRNA和蛋白的表达分别降低52.0%和41.1%,细胞凋亡率为20.5%;bFGF反义硫代寡核苷酸协同多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂作用Hep2,使3种药物的IC_(50)分别降低75.5%、83.5%及65.4%。结论:bFGF反义硫代寡核苷酸协同化疗药物增强Hep2细胞对化疗药物敏感性,将为人喉鳞癌的生物和化学药物治疗增添新途径。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 喉鳞癌 反义硫代寡核苷酸 化疗药物 化疗敏感性
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低pH毛细管区带电泳法分离寡核苷酸和硫代反义寡核苷酸 被引量：2
3
作者 李茜 陈蓉 +1 位作者 孙毓庆 胡育筑 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期101-106,共6页
在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸（PO-ODNs）及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸（PS-ODNs）药物“癌泰得”系列样品（18～20mers）进行分离，并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电... 在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸（PO-ODNs）及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸（PS-ODNs）药物“癌泰得”系列样品（18～20mers）进行分离，并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电压、温度等因素对样品单碱基分离的影响。其中缓冲溶液的pH对分离起决定性的作用，而添加剂尿素的加入显著提高了PS-ODNs样品的分离度。结果表明，采用末涂层弹性石英毛细管（50μm，总长49．0cm，有效长度40．7cm），以50mmol／L磷酸二氢钠-磷酸（pH2．24）-7 mol／L尿素为缓冲溶液，压力进样（2kPa×10s），负极进样，正极检测，在分离电压-20kV、柱温25℃、检测波长260nm条件下，可实现寡核岢酸及硫代反义寡核苷酸混合样品的单碱基分离。PO—ODNs的18～19mers及19～20mers样品的平均分离度分别为4．68，3．20；PS—ODNs的18～19mers及19～20mers样品的平均分离度分别为1．23及0．81．该法操作简单，重现性好，可为反义寡核苷酸药物的分析提供借鉴． 展开更多
关键词 低PH 毛细管区带电泳法 寡核苷酸 硫代反义寡核苷酸
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毛细管凝胶电泳法测定硫代寡核苷酸药物癌泰得的含量 被引量：10
4
作者 杨秉呼 孙偶君 +1 位作者 张敏丽 王升启 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期202-205,共4页
癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性。采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相... 癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性。采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相高效液相色谱进行纯化。采用毛细管凝胶电泳仪和单链DNA分离试剂盒测定了癌泰得的含量。所用毛细管规格为内径100μm,总长31cm,有效长度20cm;电动进样,进样电压-10kV,进样时间1s;分离电压-12 4kV;柱体温度40℃;样品储存温度为30℃;缓冲溶液为pH8 5的Tris 硼酸盐 7mol/L尿素缓冲液;紫外检测,波长为254nm。结果表明,在12 5～800mg/L时呈现良好的线性关系(r=0 99997);最低检测限为0 220mg/L;日内、日间的相对标准偏差(RSD)分别为0 449%～1 89%和1 01%～1 48%;低、中、高3种浓度的平均回收率为96 95%,RSD为6.88%。说明毛细管凝胶电泳内标法用于反义硫代寡核苷酸的含量测定结果准确、可靠。 展开更多
关键词 毛细管凝胶电泳 癌泰得 反义硫代寡核苷酸 药物
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硫代反义寡核苷酸药物FT19有关物质的分析 被引量：3
5
作者 张宏燕 鲁丹丹 +2 位作者 吴利霞 周喆 王升启 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期540-543,共4页
为了进行硫代反义寡核苷酸药物FT19的质量控制研究,建立了用阴离子交换高效液相色谱(AX-HPLC)和毛细管凝胶电泳(CGE)分析自行合成的FT19有关物质的方法。设计合成了FT19的硫代不完全序列(P=O)1和短序列(n-x)并将它们作为已知杂质。在AX-... 为了进行硫代反义寡核苷酸药物FT19的质量控制研究,建立了用阴离子交换高效液相色谱(AX-HPLC)和毛细管凝胶电泳(CGE)分析自行合成的FT19有关物质的方法。设计合成了FT19的硫代不完全序列(P=O)1和短序列(n-x)并将它们作为已知杂质。在AX-HPLC上,使用的分析柱为DNAPacPA-100(4mm×250mm);流动相A为10mmol/LNaOH-0.1mol/LNaCl,流动相B为10mmol/LNaOH-3mol/LNaCl;梯度洗脱条件为流动相B液在8min内从60%升至100%;流速1mL/min;柱温40℃;检测波长为260nm。CGE所用毛细管规格为内径100μm,总长度为31cm,有效长度为20cm;电泳缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷(Tris)-硼酸-7mol/L尿素,pH8.5;采用电动进样,进样电压-10kV;分离胶为250g/L的聚丙烯酰胺;检测波长为254nm。结果表明,FT19与硫代不完全的(P=O)1序列在AX-HPLC上能够达到基线分离,与短序列(n-1)在CGE上能达到基线分离。说明AX-HPLC和CGE联合应用能够很好地分析FT19中的有关物质。 展开更多
关键词 阴离子交换高效液相色谱 毛细管凝胶电泳 硫代反义寡核苷酸 有关物质
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I-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子的制备及对结核杆菌生长的抑制作用
6
作者 沈杰 陈志飞 +3 位作者 张红菱 李晓波 卢实 李媛媛 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期771-774,共4页
目的探讨应用纳米技术抑制分枝结核杆菌生长的可行性。方法用复凝聚法制备I-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子。在分枝结核杆菌菌株中分别加入不同量的自由ODN和壳聚糖-ODN纳米粒子,共同培养6周后观测细菌的生长情况。结果制得的纳米粒子由(35... 目的探讨应用纳米技术抑制分枝结核杆菌生长的可行性。方法用复凝聚法制备I-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子。在分枝结核杆菌菌株中分别加入不同量的自由ODN和壳聚糖-ODN纳米粒子,共同培养6周后观测细菌的生长情况。结果制得的纳米粒子由(35.6±0.9)%的ODN和(64.4±0.9)%的壳聚糖组成。壳聚糖-ODN纳米粒子浓度为4μmol/L时,其对分枝结核杆菌的抑制作用为(2.8±0.1)CFU/ml。而自由ODN在浓度低于10μmol/L时,不能有效抑制分枝结核杆菌的生长。结论壳聚糖-ODN纳米粒子比自由ODN对分枝结核杆菌的生长具有更强的抑制作用。 展开更多
关键词 壳聚糖 肌醇-1-磷酸合成酶反义硫代寡核苷酸 复合纳米粒子 结核杆菌
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