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反义核苷酸抑制人高迁移率族蛋白1表达对胰腺癌细胞的影响 被引量：4
1
作者 黄庆先 孙念峰 +1 位作者 王国斌 王春友 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期562-565,共4页
目的　构建高迁移率族蛋白 1(HMGB1)基因的反义真核表达载体 ,寻找胰腺癌基因治疗新途径。方法应用分子克隆技术构建HMGB1基因反义真核表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1,转染胰腺癌细胞株PANC 1,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、... 目的　构建高迁移率族蛋白 1(HMGB1)基因的反义真核表达载体 ,寻找胰腺癌基因治疗新途径。方法应用分子克隆技术构建HMGB1基因反义真核表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1,转染胰腺癌细胞株PANC 1,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫印迹法 (Westernblot)、噻唑蓝 (MTT)比色法检测转染 4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果　成功构建 pcDNA3 1/antisense HMGB1反义真核表达载体。所获反义表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低 (P <0 0 1)。反义 pcDNA3 1/antisense HMGB1的导入能有效抑制PANC 1增殖活性 (P <0 0 1)。 结论　应用反义RNA技术阻断HMGB1基因的表达 ,能有效抑制癌细胞的体外增殖活性 。 展开更多
关键词 反义核苷酸 HMGB1 高迁移率族蛋白1 PCDNA3 胰腺癌细胞 真核表达载体 转染 基因 体外增殖 RNA
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STAT3反义核苷酸对脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制 被引量：4
2
作者 方大钊 王伟杰 +2 位作者 董楠 付宪华 丁涟沭 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第23期3840-3843,共4页
目的:探讨转染信号转导和转录激活因子3(STAT3)反义核苷酸对人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:应用脂质体转染技术瞬时转染STAT3寡聚核苷酸反义和无义序列至U87细胞,通过CCK-8法、流式细胞仪(FCM)检测转染后... 目的:探讨转染信号转导和转录激活因子3(STAT3)反义核苷酸对人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:应用脂质体转染技术瞬时转染STAT3寡聚核苷酸反义和无义序列至U87细胞,通过CCK-8法、流式细胞仪(FCM)检测转染后各组细胞增殖、凋亡及周期,Western Blot检测转染后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及周期调控蛋白c-Myc的表达。结果:CCK-8法检测显示反义组的细胞480 nm处吸光度(0.64±0.17)较空白组(1.33±0.16)降低(t=6.772,P<0.01),而凋亡率[(44.17±3.35)%]较空白组[(14.63±3.55)%]升高(t=12.86,P<0.01);通过DNA倍体分析得出,反义组S期细胞比例[(40.63±2.71)%]高于空白组[(21.38±1.93)%,t=10.02,P<0.05];蛋白质水平检测发现反义组Bax表达上调而Bcl-2和c-Myc表达下调,各指标在无义组与空白组之间无明显差异。结论:STAT3反义核苷酸是通过调节Bax、Bcl-2及c-Myc的表达抑制U87细胞增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 脑肿瘤 胶质瘤 STAT3反义核苷酸 增殖 凋亡
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人类端粒酶逆转录酶基因反义核苷酸对白血病细胞端粒酶活性的影响 被引量：1
3
作者 何冬梅 张洹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期523-526,共4页
为了探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN)对原代培养的急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病 (CML)细胞端粒酶活性的影响 ,采用间接免疫荧光标记方法 ,通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT... 为了探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN)对原代培养的急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病 (CML)细胞端粒酶活性的影响 ,采用间接免疫荧光标记方法 ,通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT蛋白表达含量的变化 ,采用端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定 (PCR ELISA)法检测白血病细胞端粒酶活性的改变。结果显示 :hTERTASODN作用于AML和CML细胞2 4 ,48和 72小时后 ,hTERT蛋白表达水平不断降低 ;同时 ,AML和CML细胞端粒酶活性均逐渐受到抑制。结论 :hTERT基因ASODN可以通过特异性地抑制AML和CML细胞hTERT蛋白的表达 。 展开更多
关键词 人类端粒酶逆转录酶基因 反义核苷酸 白血病细胞 端粒酶活性
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转染血管紧张素Ⅱ受体反义核苷酸对心肌细胞生长的作用
4
作者 杨永健 祝善俊 +2 位作者 祝之明 胡厚祥 丁钢 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期401-403,共3页
目的　评价转染AT1反义核苷酸 (AT1A)对心肌细胞血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )受体亚型mRNA表达 ,及蛋白质和核酸合成的作用。方法　RT PCR克隆AT1cDNA序列 (476bp) ,将克隆的AT1cDNA反向插入PcDNA3 .1(5 .4kb) ,构建一完整的含AT1A的质粒 (PAT... 目的　评价转染AT1反义核苷酸 (AT1A)对心肌细胞血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )受体亚型mRNA表达 ,及蛋白质和核酸合成的作用。方法　RT PCR克隆AT1cDNA序列 (476bp) ,将克隆的AT1cDNA反向插入PcDNA3 .1(5 .4kb) ,构建一完整的含AT1A的质粒 (PAT1A) ,并转染入培养的心肌细胞 ,RT PCR和免疫印迹鉴定其转染后AT1mRNA和蛋白表达。比较AngⅡ 10 -7mol/L剌激 2 4h后的转染及非转染的心肌细胞AT1及AT2 mRNA表达 (RT PCR)、蛋白质和核酸合成 (3 H Leu及3 H TdR掺入量 )。结果　成功构建PAT1A。转染心肌细胞AT1mRNA和蛋白表达量显著减少 ,与正常对照心肌细胞相比差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。AngⅡ 10 -7mol/L剌激 2 4h后 ,与非转染心肌细胞相比 ,转染组AT1mRNA表达明显减少 ,AT2 mRNA表达明显增加 (P <0 .0 1) ,但两组间3 H Leu及3 H TdR掺入量差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　经AT1A封闭后 ,心肌细胞AT1mRNA表达显著抑制 ,同时AT2 mRNA上调。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 受体 反义核苷酸 心肌细胞 细胞生长 基因转染
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miR-93反义核苷酸对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1
5
作者 骆萍 钟晓鸣 谢春伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期396-400,共5页
目的:研究miR-93在乳腺癌组织中的表达情况,并分析miR-93反义核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用荧光定量PCR定量检测120例乳腺癌组织及对应癌旁组织中miR-93的表达;通过miR-93ASO降低乳腺... 目的:研究miR-93在乳腺癌组织中的表达情况,并分析miR-93反义核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用荧光定量PCR定量检测120例乳腺癌组织及对应癌旁组织中miR-93的表达;通过miR-93ASO降低乳腺癌细胞中miR-93的表达,利用MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞仪观察miR-93 ASO对乳腺癌细胞产生的生物学效应。实验分为3组:空白对照组,无义干扰组和miR-93 ASO组。结果:在120例乳腺癌病例中,63.33%(76/120)的乳腺癌组织miR-93表达明显高于对应癌旁组织(P<0.05);miR-93 ASO可以显著降低miR-93的表达(P<0.05);MTT实验结果显示乳腺癌细胞转染miR-93 ASO 24、48 h和96 h后的细胞存活数量均明显低于空白对照组和无义干扰组(P<0.05);克隆形成实验结果显示miR-93 ASO组克隆形成率比空白对照组和无义干扰组显著降低(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示转染miR-93ASO组较2个对照组细胞凋亡指数明显增加(P<0.05);另外,降低miR-93的表达后发现Bcl2的mRNA和蛋白均明显下降(P<0.05)。结论:miR-93在乳腺癌组织中表达上调,降低miR-93的表达可有效抑制乳腺癌细胞生长、促进细胞凋亡。miR-93有可能成为乳腺癌基因表达调控的新靶点。 展开更多
关键词 miR-93 反义核苷酸 乳腺癌 细胞增殖 细胞凋亡
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γ－32P标记反义核苷酸对HBV基因表达的封闭效应
6
作者 冯雪梅 周永兴 +2 位作者 姚志强 白雪帆 张长法 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期186-189,共4页
人工构建特异性互补于ＨＢＶ基因ｍＲＮＡＳＰⅡ增强子区的１５－聚反义硫代脱氧核苷酸（１５Ｓ－ａｓＯＮ）并用ｌ－３２Ｐ进行末端标记，以２μＬｍｏ１／Ｌ剂量作用于ＨＢＶ基因转染的ＨｅｐＧ２细胞（２．２．１５细胞），培养２４... 人工构建特异性互补于ＨＢＶ基因ｍＲＮＡＳＰⅡ增强子区的１５－聚反义硫代脱氧核苷酸（１５Ｓ－ａｓＯＮ）并用ｌ－３２Ｐ进行末端标记，以２μＬｍｏ１／Ｌ剂量作用于ＨＢＶ基因转染的ＨｅｐＧ２细胞（２．２．１５细胞），培养２４ｈ及４８ｈ后检测掺入２．２．１５细胞的１５－Ｓ－ａｓＯＮ分别为６９．４ｎｍｏ１／Ｌ和７５．８ｎｍｏ１／Ｌ；对ＨＢ３ｓＡｇ的抑制率分别为５０％和７０％；斑点杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，结果表明实验组与对照组无显著性差异，提示本实验所选用的反义核苷酸对ＨＢＶ基因的封闭环节可能发生在翻译水平。实验组与对照组的细胞形态及细胞计数结果表明：我们设计的反义核酸只特异性抑制ＨＢＶ基因表达，而对宿主细胞无明显毒害作用。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因表达 基因治疗 反义核苷酸
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pH值对端粒酶基因反义核苷酸促进ADM、DDP抑制人肝癌细胞BEL-7404增殖的影响
7
作者 吴成荣 范平生 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第5期342-344,共3页
目的　观察不同 pH值对人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN )促进盐酸阿霉素(ADM)、顺铂 (DDP)抑制人肝癌细胞增殖作用的影响。方法　 96孔培养板上进行增殖抑制实验 ,用不同pH值的RP MI 16 4 0培养液的BEL 74 0 4细胞... 目的　观察不同 pH值对人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN )促进盐酸阿霉素(ADM)、顺铂 (DDP)抑制人肝癌细胞增殖作用的影响。方法　 96孔培养板上进行增殖抑制实验 ,用不同pH值的RP MI 16 4 0培养液的BEL 74 0 4细胞悬液接种于 96孔细胞培养板 ,第 1天加端粒酶基因的反义寡核酸 5 μmol/L ,2 4、4 8h后再分别加入 2 5 μmol/L ,2 4h分别加入DDP、ADM5 μmol/L。各 pH值下分设hTERT基因的ASODN对照组、DDP组、hTERT基因的ASODN +DDP组、ADM组、hTERT基因的ASODN +ADM组、BEL 74 0 4细胞对照组 ,每组各设 8个复孔 ,置 37℃恒温箱培养 4dMTT法测定结果。结果　在培养液pH 6 8时 ,hTERT基因的ASODN能提高DDP和ADM对肿瘤细胞增殖抑制作用 ,在 pH 7 3培养液时 ,hTERT基因的ASODN更能提高DDP和ADM对肿瘤细胞增殖抑制作用更强。结论　在体外 ,pH值对hTERT基因的ASODN促进ADM、DDP抑制BEL 74 0 4细胞增殖有一定的影响 ,hTERT基因的ASODN促进ADM、DDP抑制BEL 74 0 4细胞的作用需有培养液的最适 展开更多
关键词 端粒酶 PH值 反义核苷酸 ADM DDP 肝癌 细胞增殖 阿霉素 顺铂
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特异性反义寡核苷酸抗小鼠呼吸道合胞病毒感染的研究 被引量：3
8
作者 周娟 崔玉霞 +2 位作者 杨锡强 王莉佳 蒋利萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-116,共5页
目的比较研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)的反义核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,AS-ODN)和利巴韦林对RSV感染小鼠的治疗作用,寻求安全有效的抗RSV药物。方法特异性AS-ODN和利巴韦林滴鼻治疗RSV感染... 目的比较研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)的反义核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,AS-ODN)和利巴韦林对RSV感染小鼠的治疗作用,寻求安全有效的抗RSV药物。方法特异性AS-ODN和利巴韦林滴鼻治疗RSV感染BALB/c鼠,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR和免疫组织化学分析RSVmRNA和蛋白表达水平,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数、肺组织病理学检查了解气道炎症和治疗副作用。结果0.2、0·4mgAS-ODN和0.8mg利巴韦林能降低RSV感染小鼠肺组织病毒滴度,空斑抑制率分别为34.48%、46.75%和23.02%,与感染对照组比较差异显著(P<0·05)。0.4mgAS-ODN抑制RSVmRNA和蛋白表达,抑制率分别为30.54%和29.41%,0.4mg利巴韦林治疗降低17.65%的RSV蛋白表达。AS-ODN和利巴韦林都降低RSV感染小鼠BALF中白细胞总数,对肺组织病理性改变没有明显改善作用,与感染对照组比较差异不显著(P>0.05)。单独AS-ODN和利巴韦林滴鼻不会引发明显肺炎症病理损害。结论AS-ODN在小鼠体内有比利巴韦林更强的抗RSV作用,经滴鼻治疗没有明显毒副作用,是安全而有效的抗RSV制剂。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 反义核苷酸 利巴韦林 治疗
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超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用 被引量：4
9
作者 文明 李必波 +3 位作者 欧阳羽 蒋明东 罗弋 李少林 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期554-558,I0001,共6页
目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检... 目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。 展开更多
关键词 磁共振成像 超顺磁氧化铁 反义寡脱氧核苷酸 靶向对比剂
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c-fos反义寡聚核苷酸对亚硒酸钠引起的皮质神经元凋亡的保护作用(英文) 被引量：2
10
作者 肖荣 窦岩 +3 位作者 赵嘉惠 王瑞 闫秀珍 乔健天 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期93-100,共8页
本文利用 c-fos ASO(反义链全部硫代磷酸化修饰 )技术阻断 c-fos的表达 ,观察此项处理对亚硒酸钠在体外培养皮质神经细胞致凋亡作用和相关基因表达改变的影响。结果显示 :( 1) c-fos ASO可阻断亚硒酸钠的致凋亡作用 ,且有一定的剂量和... 本文利用 c-fos ASO(反义链全部硫代磷酸化修饰 )技术阻断 c-fos的表达 ,观察此项处理对亚硒酸钠在体外培养皮质神经细胞致凋亡作用和相关基因表达改变的影响。结果显示 :( 1) c-fos ASO可阻断亚硒酸钠的致凋亡作用 ,且有一定的剂量和时间依赖性 ;用琼脂糖凝胶电泳分析由各个时间点提取的 DNA片段 ,与对照组比较 ,c-fos ASO能明显阻断亚硒酸钠诱导的典型的 DNA梯型 ;用流式细胞仪检测得到的 DNA含量直方图也显示 ,在 c-fos ASO处理后 ,与对照组比较 ,亚硒酸钠引起的亚二倍体峰变小 ;( 2 )用 RT-PCR法检测表明 ,在用 c-fos ASO和亚硒酸钠处理皮质神经细胞后 ,不仅阻断了 c-fos表达的上调 ,对其它几种基因表达的改变也有不同的影响 ,与对照组比较 ,c-fosm RNA在各个时间点 ( 0 .5、1、2、4和 2 4h)不再上升 ,bcl-2 m RNA则不再下降 ,bax m RNA和 ACh E m RNA都不再上升 ;唯一不同的是 ,p5 3m RNA的变化趋势则与未经 c-fos ASO预处理时基本相同 ,在多数时间点两组 p-5 3m RNA水平之间无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ,说明此基因的表达基本不受 c-fos ASO作用的影响。上述结果提示 ,亚硒酸钠诱导的神经元凋亡可能是一组级联式基因表达更变的结果 ,c-fos是其中的一个组成成员 ,它的表达改变被阻断后 ,处于它下游? 展开更多
关键词 c-fos反义寡聚核苷酸 亚硒酸钠 皮质神经元凋亡 保护作用
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比较和分析NtGNL1的反义寡聚核苷酸抑制在烟草三种培养体系中的效果 被引量：2
11
作者 廖芳蕾 王鲁 +2 位作者 辛可行 陈文荣 郭卫东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期355-361,共7页
为探讨反义寡聚核苷酸抑制(antisense oligodeoxynucleotides inhibition)技术在植物材料上的应用,以已知功能的NtGNL1(Nicotiana tabacum GNOM-Like1)为目标基因,寻找反义寡聚核苷酸抑制最适作用体系,并进一步分析NtGNL1的具体作用。... 为探讨反义寡聚核苷酸抑制(antisense oligodeoxynucleotides inhibition)技术在植物材料上的应用,以已知功能的NtGNL1(Nicotiana tabacum GNOM-Like1)为目标基因,寻找反义寡聚核苷酸抑制最适作用体系,并进一步分析NtGNL1的具体作用。根据目标基因mRNA序列设计反义寡聚核苷酸序列,商业合成后并将其添加到烟草胚珠、种子和花粉管离体培养的培养基中,以抑制NtGNL1的表达。结果表明,将反义寡聚核苷酸引入离体培养系统,短时间内抑制了目标基因mRNA的表达,但对胚胎发育过程的影响和种子萌发的抑制都不明显。在花粉离体萌发系统中,反义寡聚核苷酸抑制能够高效地引起目标基因mRNA的下调。对FM4-64染色的花粉管显微缩时观察发现,NtGNL1的下调能够引起囊泡分布和运输方向的改变。对花粉管膜流相关的5个基因的半定量分析也显示反义寡聚核苷酸进入花粉管后,导致3个基因的表达下调,暗示NtGNL1抑制表达会影响花粉管囊泡运输的多个节点。 展开更多
关键词 反义寡聚核苷酸抑制 NtGNL1 离体培养 花粉管 囊泡运输 膜流
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大鼠鞘内注入前强啡肽原的反义寡聚核苷酸减弱福尔马林引起的脊髓背角中强啡肽 A的合成和行为痛反应 :细胞免疫化学和行为学联合观察(英文) 被引量：2
12
作者 祁文秀 张宇 +1 位作者 祁金顺 乔健天 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期351-358,共8页
应用大鼠鞘内预先注入对抗前强啡肽原表达的反义寡聚核苷酸技术 ,观察了此处理对动物后脚掌注射福尔马林 ( 5 %,1 0 0μl)诱发的行为痛反应的影响 ,同时在行为检查的 1 h后立即用免疫组化技术检测了大鼠腰髓背角 c-Fos蛋白和强啡肽 A( 1... 应用大鼠鞘内预先注入对抗前强啡肽原表达的反义寡聚核苷酸技术 ,观察了此处理对动物后脚掌注射福尔马林 ( 5 %,1 0 0μl)诱发的行为痛反应的影响 ,同时在行为检查的 1 h后立即用免疫组化技术检测了大鼠腰髓背角 c-Fos蛋白和强啡肽 A( 1 -8)的表达。结果显示 ,上述反义寡聚核苷酸预处理可明显减弱注射福尔马林引起的行为痛反应 ,而且背角中强啡肽 A( 1 -8)表达下降 ,福尔马林引起背角 Fos蛋白合成不受影响。前已证明 ,鞘内注射对抗 c-fos的反义寡聚核苷酸 ,可以减弱福尔马林引起的痛反应 ,同时背角 Fos蛋白和强啡肽 A( 1 -8)表达量减小 ;因而本实验的结果表明 :( 1 )伤害性刺激诱导背角 Fos蛋白和强啡肽合成参与伤害性信息在脊髓的传递过程 ,Fos蛋白的合成先于强啡肽的合成。 ( 2 )在脊髓痛过敏状态的调制中 ,强啡肽是作为一种致痛因子而不是抗痛因子起作用。 展开更多
关键词 前强啡肽原 反义寡聚核苷酸 强啡肽A Fos蛋白 伤害性行为反应 脊髓背角 大鼠
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鞘内注射TLR3反义寡聚核苷酸对脊神经结扎大鼠的镇痛作用 被引量：3
13
作者 章沿锋 姚尚龙 +1 位作者 张小洺 张德仁 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期230-235,共6页
目的：探讨脊髓星形胶质细胞TLR3在神经病理性疼痛中的作用。方法：雄性SD大鼠,体重180~250 g。实验一：72只鞘内置管大鼠随机分为：生理盐水（NS）20μl＋脊神经结扎（SNL）（A组）,错义寡聚核苷酸（MM-ODN）20μg/d＋SNL（B组）,反义... 目的：探讨脊髓星形胶质细胞TLR3在神经病理性疼痛中的作用。方法：雄性SD大鼠,体重180~250 g。实验一：72只鞘内置管大鼠随机分为：生理盐水（NS）20μl＋脊神经结扎（SNL）（A组）,错义寡聚核苷酸（MM-ODN）20μg/d＋SNL（B组）,反义寡聚核苷酸（AS-ODN）20μg/d＋SNL（C组）。实验二：72只SNL后7天大鼠随机分为：SNL＋NS20μl（D组）,SNL＋MM-ODN20μg/d（E组）,SNL＋AS-ODN20μg/d（F组）。实验一和实验二分别于SNL前1天和后7天开始鞘注,每天一次,共7天;于术后-1、1、3、5、7、10、14天和-1、7、10、12、14天行行为学实验。实验一和实验二分别于术后7天和14天每组各随机取6只大鼠利用免疫组织化学法观察脊髓背角GFAP的表达,并于术后-1、3、7、14天和术后7、10、14天每组各随机取6只大鼠断头处死,取L4~5脊髓节段采用RT-PCR法测定TLR3和IL-6 mRNA的表达。结果：实验一：与A组比较,C组PWPT升高并持续至术后14天（P〈0.05）,C组各时间点PWL无明显变化（P〉0.05）;与A组和B组比较,C组脊髓背角GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积分别下降46.4%（P〈0.01）和45.7%（P〈0.01）;与A组和B组比较,C组鞘内注射AS-ODN抑制了TLR3受体和IL-6 mRNA的表达。实验二D组、E组和F组在PWPT、PWL、GFAP表达和TLR3及IL-6 mRNA表达方面的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：脊髓背角星形胶质细胞TLR3可能参与了神经病理性疼痛的发生与发展。 展开更多
关键词 神经痛 脊髓 星形胶质细胞 TLR3 反义寡聚核苷酸
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c-fos基因的反义寡聚脱氧核苷酸鞘内注入减弱福尔马林引起的大鼠伤害性行为反应及脊髓背角Fos蛋白和强啡肽 A表达的研究(英文) 被引量：8
14
作者 张宇 聂红 +3 位作者 王航 张瑞新 祁金顺 乔健天 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期243-250,共8页
本研究通过鞘内注射 c-fos反义寡聚脱氧核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)封闭背角中 F os蛋白的表达 ,观察了 Fos蛋白合成和慢痛反应的关系 ,并分析 Fos蛋白合成和强啡肽 A(Dyn A)表达之间的关系。实验组动物 (n=5 )鞘... 本研究通过鞘内注射 c-fos反义寡聚脱氧核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)封闭背角中 F os蛋白的表达 ,观察了 Fos蛋白合成和慢痛反应的关系 ,并分析 Fos蛋白合成和强啡肽 A(Dyn A)表达之间的关系。实验组动物 (n=5 )鞘内预先注射 c-fos的 AS-ODN(5 0μg,5μl) ,另两个对照组 (每组 n=5 )分别注射等量生理盐水和 AS-ODN的反序核苷酸 (reverseoligodeoxynucleotides,RS-ODN,5 0μg,5μl) ;4h后 ,各组动物均在一侧后肢脚掌皮下注射 formalin(5 % ,5 0μl) ,并立即用计算动物舔拭注射侧后脚掌累计时间的方法 ,检测大鼠的伤害性行为反应 ,行为检测后 1h处死动物 ,用免疫组化方法检查脊髓背角中 Fos蛋白阳性神经元的数量和强啡肽 A(1～ 8)的表达量。结果发现 ,和两个对照组相比 ,实验组动物 Formalin诱发的伤害性行为反应的第二相明显减弱 ,同时 Form alin注射侧背角 F os蛋白样免疫阳性细胞的数量和 Dyn A含量的灰度值明显减少。本研究结果提示 ,外周伤害性刺激引起的长期持续的痛反应是以 c-fos基因表达增加及受其调控的 Dyn A表达上调为基础的 ,由此推测在脊髓背角神经元中 Fos蛋白和 Dyn 展开更多
关键词 反义寡聚脱氧核苷酸 强啡肽A 伤害性行为反应 福尔马林试验 脊髓背角 大鼠 慢性痛行为反应
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血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响 被引量：8
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作者 曾莉 常以力 邵毅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第10期905-908,共4页
目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响。方法选取健... 目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响。方法选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGFASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只)。C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100μmol·L-1VEGFASODN5μL;E组玻璃体内注射浓度为160mg·L-1Ang-15μL;F组玻璃体内注射100μmol·L-1VEGFASODN及160mg·L-1Ang-1各5μL;3d后再次行上述操作。各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数。结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、(20.98±1.14)mm2、(21.47±1.65)mm2、(14.60±1.55)mm2、(13.80±1.19)mm2、(10.81±1.35)mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P<0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P<0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.22,P>0.05)。A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P<0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F=714.91,P<0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P>0.05)。结论 VEGF ASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 血管内皮生长因子 反义寡脱氧核苷酸 血管生成素-1
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IGF-IR反义硫代磷酸型寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡的病理学研究 被引量：6
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作者 牛朝诗 罗其中 +1 位作者 徐纪文 沈建康 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2001年第5期422-426,共5页
目的 :探讨IGF IR基因的反义硫代磷酸型寡核苷酸对胶质瘤细胞的形态学影响。方法 :根据IGF IRcDNA序列设计正义、反义寡核苷酸片段 ,并对其部分碱基进行硫代磷酸修饰。体外培养的胶质瘤细胞分别经正义寡核苷酸和反义寡核苷酸处理 ,应用... 目的 :探讨IGF IR基因的反义硫代磷酸型寡核苷酸对胶质瘤细胞的形态学影响。方法 :根据IGF IRcDNA序列设计正义、反义寡核苷酸片段 ,并对其部分碱基进行硫代磷酸修饰。体外培养的胶质瘤细胞分别经正义寡核苷酸和反义寡核苷酸处理 ,应用倒置显微镜活细胞观察、HE染色光镜观察、透射电镜及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法研究IGF IR反义硫代磷酸型寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡作用。结果 :经反义寡核苷酸转染的胶质瘤细胞中 ,呈现典型的凋亡形态学改变。凋亡细胞最早期表现为细胞体积、容量减少 ,染色质凝聚 ,继之染色质集聚于核膜下成新月状或块状 ;细胞核内染色质可完全固缩成团呈“黑洞”样或萎缩的核破裂形成一些较小的膜包绕的球体位于胞质内 ,最后出泡形成凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳分析经反义寡核苷酸处理的胶质瘤细胞DNA降解片段 ,可见有明显的小分子量DNA梯状条带 ,而野生型和正义寡核苷酸处理的胶质瘤细胞未见DNA梯状条带。结论 :IGF IR所介导的分泌环路IGF I/IGF IR ,在胶质瘤细胞增殖和维持恶性表型中起重要作用 ;IGF IR反义硫代磷酸型寡核苷酸能诱导胶质瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 受体 胰岛素样生长因子Ⅰ 神经胶质瘤 凋良心 反义寡脱氧核糖核苷酸类
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ets-1基因的反义寡核苷酸治疗胃癌的研究 被引量：1
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作者 丁印鲁 赵峰 +2 位作者 常新忠 宫向前 李兆亭 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第3期190-193,共4页
目的 :研究ets 1反义寡核苷酸对胃癌的治疗作用及其机制。方法 :应用ets 1反义、正义寡核苷酸转染SGC 790 1细胞 ,并设PBS对照组。转染后应用逆转录聚合酶链式反应检测ets 1mRNA的变化 ,克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化 ,Transwell... 目的 :研究ets 1反义寡核苷酸对胃癌的治疗作用及其机制。方法 :应用ets 1反义、正义寡核苷酸转染SGC 790 1细胞 ,并设PBS对照组。转染后应用逆转录聚合酶链式反应检测ets 1mRNA的变化 ,克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化 ,Transwell小室检测癌细胞体外侵袭力的变化 ,并应用裸鼠胃癌皮下转移模型观察对体内侵袭力的影响。结果 :转染ets 1反义寡核苷酸后 ,ets 1mRNA表达降低 ,形成克隆数目较正义组、对照组明显减少 (2 4 .2± 4 .8vs 4 7.6± 8.1vs 4 4 .3± 7.6 ,P<0 .0 1) ,穿过小室滤膜细胞数目明显减少 (97.1± 11.1vs 198.7± 18.3,2 0 5 .8± 2 2 .2 ,P <0 .0 1) ,裸鼠胃癌生长明显受到抑制。结论 :ets 1反义寡核苷酸对胃癌有治疗作用 ,其机制可能与降低胃癌细胞体内外侵袭力有关。 展开更多
关键词 胃癌 转录因子 反义寡脱氧核苷酸 肿瘤浸润
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PCNA反义寡脱氧核苷酸对牛晶状体上皮细胞体外增殖活性的影响 被引量：5
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作者 翁景宁 博士生 张惠蓉 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期199-201,共3页
目的使用增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸（ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ）作用于牛晶状体上皮细胞，观察其对细胞增殖活性的影响，以探讨ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ技术防治后发性白内障形成的新途径。方法应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖活性，... 目的使用增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸（ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ）作用于牛晶状体上皮细胞，观察其对细胞增殖活性的影响，以探讨ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ技术防治后发性白内障形成的新途径。方法应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖活性，用流式细胞仪检测晶状体上皮细胞 ＰＣＮＡ蛋白的表达。结果 ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ ３０～５０ μｍｏｌ／Ｌ可使细胞增殖显著受抑制，其 ＣＰＭ值分别从对照组的 ６ ６９９． ６７下降为 ５ ９８６． ３３，５ ５２５． ３３和 ５ １５４． ６７，ＰＣＮＡ蛋白在晶状体上皮细胞的表达阳性率下调至１２．３２％，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＮＡ ＳＯＤＮ组则作用不明显，与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），而ＰＣＮＡ　ＡＳＯＤＮ组与ＰＣＮＡ　ＳＯＤＮ组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。结论ＰＣＮＡ　ＡＳＯＤＮ可以显著抑制牛晶状体上皮细胞体外增殖活性，其抑制作用可能通过阻断ＰＣＮＡ ｍＲＮＡ的翻译过程而影响 ＰＣＮＡ蛋白表达。 展开更多
关键词 晶状体上皮细胞 增殖细胞核抗原 反义寡脱氧核苷酸
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保护薇乔缝线携载反义寡聚核苷酸的实验研究 被引量：1
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作者 曲乐丰 景在平 曹贵松 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第11期854-856,共3页
目的：探讨手术缝线携载反义基因片断的可能性及可行性，为术中血管吻合口局部转染反义基因提供新的途径。方法：保护薇乔缝线反复浸于反义核酸溶液中７２ ｈ，溴化乙锭（ＥＢ）标记，紫外灯下观察其吸附反义基因的情况。将吸附反义基... 目的：探讨手术缝线携载反义基因片断的可能性及可行性，为术中血管吻合口局部转染反义基因提供新的途径。方法：保护薇乔缝线反复浸于反义核酸溶液中７２ ｈ，溴化乙锭（ＥＢ）标记，紫外灯下观察其吸附反义基因的情况。将吸附反义基因的缝线置于生理盐水中分别于不同时间点测其释放的Ｄ值，绘出体外控释曲线。同时取释放液进行电泳分析。以在荧光标记的核酸溶液中浸过的缝线直接行兔颈总动脉吻合，２４ ｈ 取材制片荧光显微镜下观察。结果：吸附核酸的保护薇乔缝线经ＥＢ标记后在紫外灯下呈烧红的铁丝样，释放曲线提示２ ｈ 释放明显增加，３６ｈ 释放达高峰。电泳则可见随时间延长而逐渐变亮的电泳带。荧光显微镜下见吻合口附近血管壁全层散在荧光分布。结论：保护薇乔缝线可较大量携载反义基因片段，可于术中血管吻合时直接将反义基因转移至吻合口并缓慢释放。 展开更多
关键词 保护薇乔缝线 反义寡聚核苷酸 内膜增生 血管
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纳米微粒介导反义寡脱氧核苷酸逆转乳腺癌细胞多药耐药的实验研究 被引量：1
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作者 彭志平 李少林 +3 位作者 文明 蒋明东 段红 王树斌 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期498-501,共4页
目的探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响。方法采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检... 目的探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响。方法采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检测转染48h后细胞耐药基因mdr-1、mrp的表达;MTT法检测经转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素(ADR)、表柔比星(epirubicin)、5-氟脲嘧啶(5-FU)和紫杉醇(paclitaxel)的敏感性。结果纳米微粒介导mdr-1、mrpASODN转染48h后,MCF-7/ADR细胞的mdr-1、mrp在mRNA和蛋白质表达水平上均显著降低(P<0.05);细胞对ADR、表柔比星、5-氟脲嘧啶和紫杉醇的耐药指数均显著降低(P<0.05)。结论耐药基因反义寡脱氧核苷酸能在体外抑制耐药基因的表达,从而提高细胞的药物敏感性;纳米微粒具有较好的体外介导反义寡脱氧核苷酸转染效果。 展开更多
关键词 乳腺癌 多药耐药 反义寡脱氧核苷酸 纳米微粒
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