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乙型肝炎功能性治愈新药:聚焦反义寡核苷酸和小干扰RNA
1
作者 梁携儿 刘智泓 侯金林 《临床肝胆病杂志》 北大核心 2025年第1期7-14,共8页
在乙型肝炎治疗领域,现有的核苷(酸)类似物以及聚乙二醇干扰素在功能性治愈方面的疗效较为有限。最近,反义寡核苷酸与小干扰RNA等小核酸药物以全新的作用机制和令人瞩目的早期临床研究疗效,为乙型肝炎的功能性治愈带来了前所未有的突破... 在乙型肝炎治疗领域,现有的核苷(酸)类似物以及聚乙二醇干扰素在功能性治愈方面的疗效较为有限。最近,反义寡核苷酸与小干扰RNA等小核酸药物以全新的作用机制和令人瞩目的早期临床研究疗效,为乙型肝炎的功能性治愈带来了前所未有的突破性进展。反义寡核苷酸和小干扰RNA等小核酸药物可降低HBsAg水平甚至HBsAg转阴。随着HBsAg的减少,可能部分恢复机体的乙型肝炎特异性免疫功能,并可能将单纯的HBsAg清除进一步转化为减少乙型肝炎相关肝脏事件等具有临床价值的硬终点。紧密结合新药背景下HBsAg的动态变化轨迹,进一步优化联合治疗的策略与方案,有望将乙型肝炎功能性治愈转化为提升患者生存率及显著改善其生活质量的最终目标。 展开更多
关键词 乙型肝炎 寡核苷酸类 反义 RNA 小分子干扰 乙型肝炎表面抗原 功能性治愈
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脂质体转染Kv1.5反义寡核苷酸(AsOND)对人气道平滑肌Kv活性的影响 被引量：1
2
作者 程东军 徐永健 +2 位作者 刘先胜 熊盛道 张珍祥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期266-270,共5页
目的:研究人气道平滑肌细胞(HASMCs)转染Kv1.5反义寡核苷酸(AsOND)后,电压依赖延迟整流钾通道(Kv)的活性变化,探讨其基因亚型Kv1.5在调节Kv活性中的作用。方法:采用脂质体转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting和全细胞... 目的:研究人气道平滑肌细胞(HASMCs)转染Kv1.5反义寡核苷酸(AsOND)后,电压依赖延迟整流钾通道(Kv)的活性变化,探讨其基因亚型Kv1.5在调节Kv活性中的作用。方法:采用脂质体转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting和全细胞膜片钳技术,观察转染Kv1.5 AsOND后,HASMCs Kv1.5 mRNA及蛋白表达的变化,以及转染对HASMCs Kv活性的影响。结果:脂质体转染Kv1.5 AsOND后,HASM细胞Kv1.5mRNA和蛋白质的表达均下降;Kv电流值受到显著抑制;使细胞膜电位(Em)趋向于去极化方向。结论:转染Kv1.5 AsOND可导致HASMCs Kv功能降低,Kv1.5基因亚型在调节Kv活性中可能起重要作用。 展开更多
关键词 钾通道 气道平滑肌细胞 寡核苷酸类 反义 转染
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反义寡核苷酸的作用机制及其在运动系统中的研究进展 被引量：1
3
作者 杨建乐 吴南 《协和医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第4期891-896,共6页
反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)是一类新型的小分子基因靶向药物,可与目的mRNA结合,ASOs以其与目标序列互补的碱基配对方式,对基因进行靶向调控。随着基因测序技术和分子合成技术的不断发展,ASOs在运动系统中的研究和... 反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)是一类新型的小分子基因靶向药物,可与目的mRNA结合,ASOs以其与目标序列互补的碱基配对方式,对基因进行靶向调控。随着基因测序技术和分子合成技术的不断发展,ASOs在运动系统中的研究和应用进一步深入。本文阐述了ASOs在基因沉默和表达调控中的作用机制,以及其在基因治疗方面的应用前景。此外,还介绍了ASOs在运动系统疾病中的研究进展和应用情况,并分析此类药物目前所面临的问题,旨在深化医务人员对ASOs的认识,并为其在生物医学研究和临床中的推广应用提供有益参考。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 基因治疗 临床应用 运动系统
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STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8和NO的影响 被引量：15
4
作者 范贤明 张世波 +2 位作者 刘春涛 熊彬 王曾礼 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期487-489,492,共4页
目的:探讨STAT1(signaltransducerandactivatoroftranscription1)反义寡核苷酸(ASON)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法:取Wistar大鼠5只,向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动... 目的:探讨STAT1(signaltransducerandactivatoroftranscription1)反义寡核苷酸(ASON)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法:取Wistar大鼠5只,向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取AM,并分为STAT1ASON组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(dexamethasone,DEX)组和空白对照组。分别用ASON、SON和DEX干预AM(空白对照组只加培养基),然后检测AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力。结果:用STAT1ASON处理AM后的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量减少,与空白对照组、SON组及DEX组相比较差异显著(P<0.05);DEX组AM的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量明显低于空白对照组和SON组(P<0.05);而空白对照组和SON组培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量却无统计学意义(P>0.05)。结论:STAT1ASON和DEX能使AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力下降,且STAT1ASON的作用强于DEX。STAT1可作为肺纤维化治疗的靶目标。 展开更多
关键词 STAT1 肺泡巨噬细胞 反义寡核苷酸 肺纤维化
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碳纳米管-树形分子载体递送Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖的作用 被引量：7
5
作者 潘碧峰 崔大祥 +5 位作者 徐萍 高峰 贺蓉 尤晓刚 邵君 杨浩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第3期176-180,共5页
目的:探讨碳纳米管(CNT)-树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。方法:制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳... 目的:探讨碳纳米管(CNT)-树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。方法:制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物的形态结构;然后将复合物与人肝癌HepG2细胞共培养,同时设立对照,采用透射电镜观察碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物在细胞中的定位,采用MTT法检测复合物对癌细胞生长的抑制作用。结果:AFM与凝胶电泳分析证实碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物被成功制备。透射电镜观察证实碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物位于细胞质。MTT法检测表明,CNT-PAMAM-ASODN浓度为1.0μmol/L时,即可抑制(45.97±4.28)%的HepG2细胞增殖,而ASODN组和CNT-PAMAM组在此浓度条件下对HepG2细胞的抑制率则分别为(9.33±0.85)%和(6.37±0.69)%;当CNT-PAMAM-ASODN达到1.50μmol/L时,细胞抑制率为(70.22±7.25)%,而且抑制作用随培养时间的延长与浓度的增加而增强,实验组与对照组之间细胞抑制率存在显著性差异(P<0.01)。结论:碳纳米管-树形分子复合物是一种高效的基因递送载体,能够携带Survivin反义寡核苷酸进入肝癌细胞,并高效抑制HepG2细胞的增殖,显著增强反义寡核苷酸的作用效果。 展开更多
关键词 碳纳米管 树形分子 SURVIVIN基因 反义寡核苷酸 肝癌
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绿色荧光蛋白基因mRNA反义寡核苷酸的筛选和应用 被引量：6
6
作者 毛建平 王全会 +4 位作者 施水兰 袁国刚 左刚 崔玉芳 毛秉智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期529-536,共8页
基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的... 基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNaseH分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值. 展开更多
关键词 MRNA 反义寡核苷酸 靶点 PARASS GFP
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ClC-3反义寡核苷酸对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响 被引量：9
7
作者 钱艳 关永源 +3 位作者 王冠蕾 杨晓茹 贺华 丘钦英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期314-317,共4页
目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷... 目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的ClC 3蛋白的表达 ;②ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖。结论　ClC 展开更多
关键词 CLC-3 T淋巴细胞 反义寡核苷酸 增殖
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用 被引量：8
8
作者 孙玲 王峰 +4 位作者 孙慧 乐晓萍 葛秀峰 姜中兴 张钦宪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期649-653,共5页
为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细... 为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);正义寡核苷酸20μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0·65)与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。TRAP-PAGE检测表明hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少。结论hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性。 展开更多
关键词 HL-60细胞 HTERT 反义寡核苷酸 端粒酶活性
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TNF-α反义寡核苷酸对马桑内酯刺激的星形胶质细胞的影响 被引量：7
9
作者 刘子建 朱长庚 +2 位作者 刘庆莹 魏瑛 蔡秋云 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期475-478,599,共5页
为进一步探讨 TNF- α在星形胶质细胞激活中的作用 ,用 TNF- α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯 (coriaria lac-tone,CL )诱导的星形胶质细胞 TNF-α的产生 ,观察 NFκBp6 5核转位和 IκBα降解的变化。在应用 TNF-α反义寡核苷酸后 ,由 CL... 为进一步探讨 TNF- α在星形胶质细胞激活中的作用 ,用 TNF- α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯 (coriaria lac-tone,CL )诱导的星形胶质细胞 TNF-α的产生 ,观察 NFκBp6 5核转位和 IκBα降解的变化。在应用 TNF-α反义寡核苷酸后 ,由 CL 刺激引起的 TNFα生成在 2、 4、 12、 2 4 h均显著减少 ,NFκBp6 5核转位在相同的 4个时间点也均受到明显抑制 ,相应胞浆蛋白的 IκBα降解也低于对照组。实验结果表明 :由 CL诱导产生的 展开更多
关键词 癫痫 星形胶质细胞 反义寡核苷酸 肿瘤坏死因子
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以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用 被引量：11
10
作者 郭敏 李育敏 +1 位作者 费嘉 张洹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1127-1131,共5页
目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在Lipo-fectamineTM2000介导下,转染K562细胞。采用四甲... 目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在Lipo-fectamineTM2000介导下,转染K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变。结果:MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异(P<0.05),反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.6μmol/L。台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24 h后,可在细胞中见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平。结论:以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 microRNA 寡核苷酸类 反义 K562细胞 细胞凋亡
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放射性碘标记反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠中的分布及显像研究 被引量：13
11
作者 沈晶 王荣福 +2 位作者 张春丽 刘萌 郭凤琴 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期655-659,共5页
目的：探讨用放射性碘标记的框架区(framework region mRNA．FR)mRNA 反义寡核苷酸(antisense oligo-nucleotide，ASON)作为 B 细胞淋巴瘤反义显像剂及反义治疗药物的可能性 方法：通过氯胺-T 法用碘[^(125)I 与碘[^(131)I]标记含酪胺... 目的：探讨用放射性碘标记的框架区(framework region mRNA．FR)mRNA 反义寡核苷酸(antisense oligo-nucleotide，ASON)作为 B 细胞淋巴瘤反义显像剂及反义治疗药物的可能性 方法：通过氯胺-T 法用碘[^(125)I 与碘[^(131)I]标记含酪胺的18聚体寡核苷酸获得^(125)I-或^(131)I-FR-ASON，建立荷人淋巴瘤裸鼠动物模型 将148 kBq^(125)I-FR-ASON(2～μg)经尾静脉注入正常小鼠，于不同时间处死小鼠，测定不同组织及标准源的放射性计数 荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体包裹的3.33 MBq ^(131)I-FR-ASON(7～9μg)，分别于注射后不同时间进行单光子发射计算机断层(single photon emission computer tomographv,SPECT)显像，以脂质体包裹的正义寡核苷酸作为对照，24h 显像后处死裸鼠，取出血液、重要器官和肿瘤组织，测定各组织的放射性计数，并计算每克组织摄取率及肿瘤与非瘤组织放射性摄取比值(T/NT) 结果：^(125)I-FR-ASON 注入正常小鼠体内后1h．各脏器的放射性摄取达高峰，24h 基本清除 肝、胃和肠放射性分布最高，骨、肌肉、脑中放射性分布较少 荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体包裹的^(131)I 标记 ASON后立即用 SPECT 成像仅见肿瘤部位，1和2h 成像可见小踪剂从肿瘤到腹腔，24h 仍可见肿瘤显像 比较24h 展开更多
关键词 淋巴瘤 碘标记 裸鼠 放射性碘 脂质体包裹 肿瘤 反义寡核苷酸 正常小鼠 RNA 器官
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Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响 被引量：6
12
作者 方艳秋 齐亚灵 +2 位作者 白晓 芦小单 谭岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期278-281,428,共4页
目的:应用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的影响。方法:根据Survivin序列合成其反义寡核苷酸序列(Survivin-ASODN)。培养肝癌细胞株SMMC-7721,用荧光素标记的Survivin-ASODN转染,并设立空白对照... 目的:应用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的影响。方法:根据Survivin序列合成其反义寡核苷酸序列(Survivin-ASODN)。培养肝癌细胞株SMMC-7721,用荧光素标记的Survivin-ASODN转染,并设立空白对照、空脂质体对照及正义寡核苷酸(SODN)对照组;用PCR方法检测Survivin基因表达水平;通过MTT方法分析Survivin-ASODN转染对肝癌细胞增殖的影响。结果:荧光素标记的Survivin-ASODN在SMMC-7721细胞中的转染率达到60%以上。SMMC-7721细胞分别用100、200、300、400和600nmol.L-1 ASODN转染后,Survivin基因表达水平下降,细胞增殖抑制率24h时分别为(3.87±1.67)%、(9.21±2.21)%、(15.21±3.18)%、(21.32±3.43)%和(32.62±3.74)%,而300nmol.L-1ASODN组48h时细胞生长抑制率为(29.21±4.12)%,72h时抑制率为(44.21±3.32)%;ASODN转染组细胞增殖抑制率与空白对照组、空脂质体组及SODN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Survivin-ASODN对细胞增殖有抑制作用,且呈现剂量依赖性;并且随着作用时间的延长,其抑制效果增强。 展开更多
关键词 SURVIVIN 反义寡核苷酸 原发性肝癌 转染 增殖抑制率
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miR-92a反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量：6
13
作者 仲飞 郝吉庆 +3 位作者 王芳 马泰 范璐璐 孙国平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第2期137-141,共5页
目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检... 目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测处理前以及处理48 h后胃癌细胞中miR-92a的表达变化;MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 Anti-miR-92a作用48 h后,miR-92a在两种胃癌细胞中的表达均显著下降(P<0.05);细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05),荧光染色显示其细胞核呈凋亡细胞的特征样改变。结论以miR-92a为靶标的ASO可以有效抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多
关键词 胃肿瘤 微小RNA 反义寡核苷酸 增殖 凋亡
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新型bcl-2基因反义寡核苷酸F951诱导人白血病HL60细胞凋亡 被引量：5
14
作者 李东良 吕联煌 +1 位作者 林振兴 陈英玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期260-263,共4页
目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL6... 目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL60细胞共孵育48h后,线粒体凋亡细胞:未处理组、FNS对照组分别为3.00%、13.57%,F9513个剂量分别为30.95%、38.08%、52.55%;Caspase活性细胞:未处理组、FNS对照组分别为0.08%、0.14%,F9513个剂量组分别为43.68%、60.54%、80.37%。凝胶电泳分析:F951处理组可见典型的DNALadder,且随着药物浓度的提高诱导DNA Ladder的作用更加明显;TUNEL和电镜检查:未处理组与FNS对照组中仅偶见凋亡细胞,F951各剂量组凋亡细胞常见,且随着药物浓度的提高凋亡细胞增多。结论F951具有诱导HL60细胞凋亡的作用;F951诱导肿瘤细胞凋亡的作用是通过抑制bcl-2基因,启动细胞凋亡调控通道而实现的。 展开更多
关键词 白血病 基因 bcl-2 寡核苷酸类 反义
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脂质体介导的cripto反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞端粒酶活性 被引量：42
15
作者 范钰 郑树 丁佳逸 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期762-765,共4页
目的:探讨cripto反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌细胞端粒酶活性的影响。方法:应用脂质体瞬时转染法介导cripto反义寡核苷酸,处理人结肠癌细胞系后,分别采用实时定量PCR检测cripto mRNA表达,用TRAP检测端粒酶活性,采用软琼脂集落培养试验... 目的:探讨cripto反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌细胞端粒酶活性的影响。方法:应用脂质体瞬时转染法介导cripto反义寡核苷酸,处理人结肠癌细胞系后,分别采用实时定量PCR检测cripto mRNA表达,用TRAP检测端粒酶活性,采用软琼脂集落培养试验检测结肠癌细胞的生长。结果:Cripto ASODN可有效抑制结肠癌细胞集落生长,且与浓度相关。结肠癌细胞经Cripto ASODN转染后,端粒酶活性明显受到抑制,呈作用浓度和时间依赖性。并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论:cripto基因可能参与对结肠癌细胞端粒酶活性的调控。 展开更多
关键词 寡核苷酸类 反义 端粒 末端转移酶 基因 cripto 结肠肿瘤
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pH敏脂质体对反义寡核苷酸抗流感病毒活性的影响 被引量：7
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作者 陈忠斌 王升启 +2 位作者 王弘 朱宝珍 孙志贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期553-557,共5页
为了研究具有临床应用前景的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 脂质体转运系统，以临床药用大豆磷脂为主要原料制备了ｐ Ｈ 敏脂质体，并测定了脂质体体外转染活性、ｐ Ｈ 敏特性、细胞毒性和对 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 抗流感病毒活性的影响 结果发现，批号... 为了研究具有临床应用前景的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 脂质体转运系统，以临床药用大豆磷脂为主要原料制备了ｐ Ｈ 敏脂质体，并测定了脂质体体外转染活性、ｐ Ｈ 敏特性、细胞毒性和对 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 抗流感病毒活性的影响 结果发现，批号为 ９８０５１９０３，９８０５１１０２ 和 ９８０５１２０２ 的脂质体具有较高转染活性，但只有ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 转染活性的 １／５０～１／１００当质粒／脂质体（ Ｗ ／ Ｗ ）为 １∶４～１∶８，转染时间为 ３～５ ｈ，质粒量为 ０５ μｇ，转染后 ２４～４８ ｈ 内检测时转染活性最高 脂质体 ９８０５１２０２ 表现明显 ｐ Ｈ值依赖溶解红细胞膜特性，而脂质体 ９８０５１１０２ 和 ９８０５１９０３ 的 ｐ Ｈ 敏特性不明显 脂质体细胞毒性明显降低，如 ９８０５１９０３、９８０５１１０２ 和 ９８０５１２０２ 的毒性分别是 ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 毒性的 １／１６、１／８ 和 １／４ｐ Ｈ 敏脂质体 ９８０５１２０２ 具有促进 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 抗流感病毒作用，当 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 浓度为 ０２ μｍ ｏｌ／ Ｌ 时，ｐ Ｈ 敏脂质体 ９８０５１２０２ 使其抗病毒活性提高 ５ 倍，但 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 浓度较高时ｐ Ｈ 敏脂质体对 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ抗? 展开更多
关键词 pH敏脂质体 反义寡核苷酸 流感病毒 抗病毒作用
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TNF-α反义寡核苷酸对颅脑爆炸伤后脑组织含水量的影响 被引量：5
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作者 侯立军 卢亦成 +7 位作者 张光霁 朱诚 江基尧 白如林 丁学华 刘荫秋 李兵仓 赖西南 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期767-769,共3页
目的 :探讨 TNF-α反义寡核苷酸对颅脑爆炸伤后脑组织含水量的影响。 方法 :1 8条犬随机分为人工脑脊液组( ACSF)、正义链组和反义链组 ,利用已建成的颅脑爆炸伤模型装置致伤 ,伤前经小脑 -延髓池分别注入 ACSF、TNF-α正义寡核苷酸和 T... 目的 :探讨 TNF-α反义寡核苷酸对颅脑爆炸伤后脑组织含水量的影响。 方法 :1 8条犬随机分为人工脑脊液组( ACSF)、正义链组和反义链组 ,利用已建成的颅脑爆炸伤模型装置致伤 ,伤前经小脑 -延髓池分别注入 ACSF、TNF-α正义寡核苷酸和 TNF-α反义寡核苷酸 ,比较 3组动物脑组织含水量的变化。结果 :伤前经小脑 -延髓池脑内局部应用 TNF-α反义寡核苷酸组 ,颅脑爆炸伤后脑组织内含水量较 ACSF组和正义链组明显减少 ( P<0 .0 5)。 结论 :TNF-α反义寡核苷酸可以减轻颅脑爆炸伤后脑水肿。 展开更多
关键词 爆炸伤 肿瘤坏死因子α 反义寡核苷酸类 脑水肿 颅脑损伤
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bcl-2 mRNA反义寡核苷酸对胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性的影响 被引量：4
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作者 范钰 林庚金 +3 位作者 钱立平 许祖德 李华 徐康 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期483-485,489,共4页
目的　探讨bcl 2反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性的影响。方法　应用脂质体瞬时转染法介导bcl 2反义寡核苷酸 ,处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,分别采用Northernblot... 目的　探讨bcl 2反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性的影响。方法　应用脂质体瞬时转染法介导bcl 2反义寡核苷酸 ,处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,分别采用Northernblot、Westernblot检测bcl 2mRNA、蛋白表达 ,用端粒微孔板杂交法检测端粒酶活性。结果　bcl 2ASODN处理的胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论　bcl 展开更多
关键词 反义寡核苷酸类 癌基因 细胞 端粒酶 bcl-2 胃癌
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CTGF反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成的抑制效应 被引量：9
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作者 陈敏生 区彩文 +3 位作者 张立建 刘启才 刘世明 黄少华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期266-270,共5页
目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用。方法 :差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)。反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介... 目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用。方法 :差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)。反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介导转染CFs,并与血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 10 -6mol/L共培养 4 8h ,采用MTT法测CFs生长数目 ,羟脯氨酸法测胶原蛋白含量 ,RT -PCR法及Westernblotting法分别测CTGFmRNA及蛋白水平的表达。结果 :AngⅡ可以在mRNA及蛋白水平明显促进CFsCTGF的表达 (P <0 . 0 1) ,且呈浓度 -时间依赖性。CTGF反义链组的MTT反应A值、胶原蛋白含量、CTGFmRNA及蛋白水平的表达量均明显低于AngⅡ组 (P <0. 0 1) ,而CTGF正义链组和错义链组与AngⅡ组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :AngⅡ刺激下产生的CFsCTGFmRNA和蛋白水平的表达上调 ,可能是心肌纤维化传导通路中的关键环节 ,CTGF反义寡核苷酸可以序列特异性地阻断CTGF的介导 ,从而抑制AngⅡ对心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的诱导作用 ,进一步证实CTGF可能是拮抗心肌纤维化的特异性靶位。 展开更多
关键词 心肌 纤维化 结缔组织生长因子 寡核苷酸类 反义
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Livin反义寡核苷酸诱导人肾癌细胞凋亡及其机制的研究 被引量：5
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作者 刘川 吴小候 +4 位作者 张唯力 唐伟 尹志康 何云锋 杜虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第17期1622-1625,共4页
目的探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对人肾癌细胞株786-O Livin mRNA及蛋白表达的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体辅助转染至786-O细胞内。采用RT-PCR检测转染后Livin mRNA的变化,细胞... 目的探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对人肾癌细胞株786-O Livin mRNA及蛋白表达的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体辅助转染至786-O细胞内。采用RT-PCR检测转染后Livin mRNA的变化,细胞免疫化学、激光扫描共聚焦显微镜观察Livin蛋白在细胞内的分布、转染后表达的变化及细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,激酶法测定Caspase3活性的变化。结果转染Livin ASODN后,RT-PCR显示786-O细胞表达Livin mRNA减少(P<0.01),激光扫描共聚焦显微镜下见细胞表达Livin蛋白减少、细胞形态发生变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Caspase3活性明显增加(P<0.01)。结论Livin ASODN能明显下调786-O细胞Livin基因的表达,诱导细胞凋亡。抑制Caspase3活性是Livin抑制细胞凋亡的途径之一。 展开更多
关键词 LIVIN 寡核苷酸类 反义 细胞凋亡 肾肿瘤
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